【正文】 狹縫寬度直接影響測定靈敏度和校正曲線的線性范圍。也可以用水解、氧化還原或調節(jié)酸堿性方法等，消除干擾。因此在紫外測定時，在溶解度允許的范圍內， 應盡量選擇極性小的溶劑 。當苯環(huán)上引入生色基時，吸收峰顯著紅移，此時 E2帶就稱為 K帶。二者可分別看成是苯環(huán)中的乙烯鍵和共軛乙烯鍵所引起的，也屬π→π* 躍遷。 C O (3)B吸收帶：這是芳香族化合物的特征吸收帶，由苯的π→π* 躍遷所產生。該帶的特點是吸收強度很弱，處于長波方向，吸收峰波長一般在 270 nm以上?；衔锝Y構不同，躍遷類型不同、因而有不同的吸收帶。一般有兩個吸收峰，在 200 nm附近有一個峰，屬 K帶，在 238nm附近還有一個峰，類似苯環(huán)的 B帶。菲的譜帶 E1為 252nm， ε＝ 50000， E2＝ 293nm，ε＝ 16000， B譜帶為 330 nm， ε＝ NH2 N H 2N O 2N H 2O 2N ② 當兩個取代基都是 吸電基或都是供電基 時，由于效應相同，兩個基團不能協同，則吸收峰往往不超過單取代基時的波長，且鄰、間、對位三個異構體的波長也相近。表 6— 7列出一些單取代苯的紫外吸收數據 (3)苯的二取代物： 在二取代苯中，由于取代基的性質和取代位置不同，產生的影響也不同。 帶弧對電子基團取代：如－ NH－ OH、－ OK等由于弧對電子與苯環(huán)上的 π電子產生 n— π共軛使吸收強度增加．產生紅移。在氣體或非極性溶劑中精細結構較清楚，在極性溶劑中，精細結構消失。 在 180－ 184nm處 (ε＝ 47000)、有強吸收的 E1帶，因在遠紫外區(qū)，實用意義不大。為共軛體系一端的單個生色基的躍遷。形成大 π鍵，使電子更容易激發(fā)，可使 吸收峰波長向長波方向移動 。表 6— 5列出了能進行 n→σ* 躍遷的一些基團和原子。在近紫外區(qū)沒有吸收峰，只有在遠紫外區(qū) (10一 200 nm)才有吸收峰。 藍移 (Hypsochromic)：指由于取代基或溶劑等的影響，使吸收峰向短波方向移動的效應。常見生色基的最大吸收峰見表 6— 4。 通常當電子由一個能級躍遷到另一個能級時，同時伴隨有振動能級和轉動能級的躍遷。以醛基為例示意如下： 當有機化合物吸收紫外光時，這些價電子可以從基態(tài)躍遷到較高的能級狀態(tài) (受激態(tài) )，此時電子所占的軌道稱為 σ*， π*反鍵軌道 。 分子躍遷有三種類型，即 電子躍遷，振動躍遷及旋轉躍遷 ，這三種躍遷所需的能量不同，可以產生三種不同的吸收光譜，即電子光譜、振動光譜及轉動光譜。對多數商品分光光度計而言， 1％吸收 (T＝ ， A＝ )與其最小可測信號相符。 177。 177。 177。假設透光率測量誤差 ΔT為 ，通過以上公式計算，可得到與 T及 A的函數關系數據列于表 6— 3。 根據比爾定律公式 可以改寫為 上式左邊換成自然對數，然后兩邊取微分，可得： 上述公式兩式相除，經過整理可得下式： 1logT bc?＝log T bc?－ ＝d T dT bc?－ ＝d 0 .4 3 4 dTT lo g Tcc ＝ 如以有限值表示又可以寫成 式中： —— 濃度相對誤差， ΔT—— 透光率 T測量中的絕對誤差。 4． 譜帶寬度的影響 在實際測定樣品時，為了保證足夠的光強，分光光度計的狹縫必須保持一定寬度，因此，由出射狹縫投射到被測物質上的光，并不是真正的單色光，而是一個有限寬度的譜帶，稱為 光譜帶通 。 2． 化學偏離 由于吸收組分的 締合、解離、光化學作用或與溶劑的相互作用 ，使吸收峰的形狀、位置、強度以及精細結構都發(fā)生變化，導致偏離。 吸收曲線的用途： （ 1）吸收曲線的特征和形狀是由分子的電子結構決定的，它反映了物質分子中能級的變化情況； （ 2）它描述了物質對不同波長光的吸收能力，在 定量分析中可作為選擇最大吸收波長的依據 ； （ 3）吸收曲線體現了物質的特性，不同物質具有不同特征的吸收曲線，因此可用作 定性鑒定的依據 。吸收曲線有時也可用 ε或 logε作為縱坐標。如圖 6－ 2所示。 (3) ε值可以衡量不同物質在同一波長下吸收能力的強弱，在同一波長下， ε值越大吸收光能力愈強。 用 mol/L來表示時，用 L為 1cm比色池，相應的吸光系數稱為摩爾吸光系數（ molar absorptivity）用符號 ε表示 用百分濃度 g/100ml來表示時， L為 1cm比色池，相應吸光系數稱為百分吸光系數，用符號 表示。光的強度隨介質的厚度及吸光物質的濃度的遞增而 依指數規(guī)律遞減 。對檢測器的要求是靈敏度高、對輻射響應時間短、對輻射能量響應的線性關系良好、噪音小、性能穩(wěn)定等。測定時如遇揮發(fā)性液體或氣體， 需蓋上池蓋 ，以免溶液揮發(fā)影響測定濃度或產生氣體損害儀器部件。 現代高級分光光度計往往采用雙單色器，即包含兩個光柵或兩個棱鏡，或一個棱鏡一個光柵，這樣可以減少雜散光，提高儀器的分辨能力?？叹€處不透光，光只能在兩條刻線中間的平面處透過去。 玻璃棱鏡只能用于可見光區(qū)；石英棱鏡或反射光柵可用于紫外、可見及近紅外光區(qū)。 紫外光區(qū)用 氫弧燈或氘燈 ，其波長在 180－375nm。 二、可見紫外分光光度計 分光光度法使用的儀器是分光光度計。 1cE h v h h c??＝ ＝ ＝ 可將電磁波波長劃分為若干波段區(qū)域各波段能量不同，引起物質運動的形式亦不同。所謂微粒性，即指光是由光量子（或光子）的一種粒子組成。 （一）光的波動性 光作為電磁波，具有波動性的特征，可用波長（ λ）、頻率（ v）及波數（ σ）來表示?？梢娮贤夥止夤舛确? ? 一、 分光光度法的基本概念 ? 二、可見紫外分光光度計 ? 三、分光光度法的基本定律 ? 四、分子結構與電子光譜 ? 五、定 量 分 析 ? 六、在農藥分析中的應用 一、分光光度法的基本概念 分光光度法是根據物質對光具有選擇性的吸收特征而建立起來的一種分析方法，通常又稱吸收光譜法。光具有波粒二重性，它既是電磁波又是輻射能。 cv?＝ cv ?＝ 1? ?＝（二）光的微粒性 —— 普朗克公式 光作為輻射能又具有微粒性的特征。 （三）可見紫外、紅外光區(qū)的劃分 根據電磁波具有波粒二重性的特點，可把自然界存在的各種電磁波按波長順序排列成譜，稱為電磁波譜，如表 6－ 1所示。 分為三個區(qū)域 : 100－ 200nm 遠紫外區(qū) 200－ 400nm 近紫外區(qū) 400－ 800nm 可見光區(qū)域。 （一）光源 在可見紫外分光光度計上常用的光源是鎢絲燈和氫弧燈 (或氘燈 ) 可見光區(qū)用 鎢絲白熾燈 ，其波長在 320－2500nm之間。散射器是單色器的核心，由棱鏡或衍射光柵組成。 光柵的色散原理：光柵是在石英或玻璃表面上刻劃許多等距離的平行線，大約每 15000－ 30000條線。 從棱鏡或光柵射出的光經 旋轉反射鏡 就可依次射出狹縫，經聚焦后達到吸收池。 池厚（內徑）有 ， 1， 2cm等幾種，一般使用 1cm的，吸收池的光潔度對測定影響很大， 透明光學面不得用手指拿，不得用毛刷等硬物擦洗，通常用擦鏡紙擦洗 。 光電倍增管是當前應用最多的一種檢測器，它的作用是利用二次電子發(fā)