免疫熒光檢測(cè)-全文預(yù)覽
【正文】 75%HEp2/靈長(zhǎng)類(lèi)肝臟：抗PMScl抗PMScl抗體 34 3060Scl70 靶抗原抗SSB抗體靶抗原：與 小分子RNA （U6RNA, pretRNA） 結(jié)合的磷脂蛋白 （48 kDa）功能： 4095SSB 連接的6 種不同蛋白分子HEp2 細(xì)胞/靈長(zhǎng)類(lèi)肝臟：抗RNP/SmU1nRNP靶抗原：與U1nRNA 連接的3個(gè)蛋白分子（70K、A和C蛋白）功能：切割premRNA相關(guān)性：MCTD: SLE： 形成核小體組蛋白靶抗原：組蛋白HH2A、H2B、HH4SLE % ssDNAssDNA / dsDNA pattern，M）著絲點(diǎn)型（centromert SLE抗核抗體的檢出率85－95類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎混合性結(jié)締組織病 相關(guān)疾病的ANA譜ELISA ELISAANA確認(rèn)實(shí)驗(yàn)（2）Westernblot:HEp2 細(xì)胞提取物ENA 譜:采用各種高度純化的抗原ELISA：抗ENA 譜 ELISA:ANA確認(rèn)實(shí)驗(yàn)（1）具體操作熒光工作臺(tái)的布置清洗載片的擦拭封片封片體積:10 181。使用聚苯乙烯封片板?？稍诿?50ml磷酸鹽緩沖液中加10滴(150 181。從現(xiàn)在開(kāi)始，注意避免陽(yáng)光直射載片。l/反應(yīng)區(qū)(5 x 5 mm)60 181。加樣前應(yīng)使用加樣器混勻。清洗：用燒杯盛PBSTween緩沖液，流水沖洗載片，然后立即放入裝有PBSTween緩沖液的小杯中浸洗至少5分鐘。l/反應(yīng)區(qū)(5 x 5 mm)70 181。滴加完所有待測(cè)標(biāo)本后才開(kāi)始溫育（一次最多200份）。按照試劑盒使用說(shuō)明稀釋血清標(biāo)本。只有當(dāng)載片平衡到室溫后方可打開(kāi)袋子。因?yàn)橐后w被局限在一封閉的空間里，所以不再需要傳統(tǒng)的“濕盒”。 協(xié)助檢測(cè)其它項(xiàng)目（如 ANCA、ENA）ELISA：采用高度純化的抗原初篩ANAANA檢測(cè)方法 經(jīng)驗(yàn)性強(qiáng)ELISA法：采用高度純化抗原或全細(xì)胞抗原 廣義定義靶抗原分布： antibodies，ANAs）經(jīng)典定義：針對(duì)細(xì)胞核成分的一大組抗體譜。該方法簡(jiǎn)便、敏感，且可根據(jù)核染色形態(tài)確定核抗原的類(lèi)型。封好的載片可于4℃長(zhǎng)期保存。6．封片進(jìn)不可用力擠壓蓋玻片，以免損壞基質(zhì)。⑥應(yīng)用細(xì)胞片做抗原片可檢出著點(diǎn)型(ACA)注意事項(xiàng)②周邊型(核膜型)：細(xì)胞核周?chē)尸F(xiàn)熒光；③斑點(diǎn)型(顆粒型)：細(xì)胞核內(nèi)呈現(xiàn)斑點(diǎn)狀熒光；陽(yáng)性待檢血清可作進(jìn)一步稀釋后測(cè)定效價(jià)。然后繼續(xù)下1張。8．封片：將蓋片直接放于泡沫塑料板凹槽中，滴加甘油/PBS至蓋片：每反應(yīng)區(qū)約10μl。不必混搖。2．稀釋?zhuān)篜BSTween緩沖液稀釋血清，設(shè)陰陽(yáng)性對(duì)照。3．30℃保存?zhèn)溆谩?2)Hep2細(xì)胞抗原片制備：Hep2細(xì)胞是建株的人喉癌上皮細(xì)胞。如需自行制備，方法如下：(1)肝印片制備：取48周齡小鼠，斷頸殺死后，剖腹取肝。如果血清中含有ANA，就會(huì)與細(xì)胞核成分特異性結(jié)合。本次實(shí)驗(yàn)以熒光免疫顯微技術(shù)檢測(cè)抗核抗體(ANA)為例進(jìn)行實(shí)習(xí)。熒光免疫技術(shù)是以熒光物質(zhì)標(biāo)記的特異性抗體或抗原作為標(biāo)準(zhǔn)試劑，用于相應(yīng)抗原或抗體的分析鑒定和定量測(cè)定。熒光免疫測(cè)定主要有時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定和熒光偏振免疫測(cè)定等。以小鼠肝細(xì)胞或某些培養(yǎng)細(xì)胞(如Hep2)作抗原片，將病人血清加到抗原片上。1．抗原片 現(xiàn)多用商品試劑。冷風(fēng)吹干，乙醇固定，冰箱可保存1周。(3)肝切片制備：取小鼠肝組織作冰凍切片，厚4μl。、陽(yáng)性和陰性對(duì)照血清 臨床標(biāo)本篩選獲得。加完所有標(biāo)本后開(kāi)始溫育。5．沖洗：用燒杯盛PBSTween緩沖液流水沖洗生物薄片，然后立即將其浸入盛有PBSTween緩沖液的小杯中至少1分鐘。熒光素標(biāo)記的抗人球蛋白用前需混勻并以PBSTween緩沖液稀釋。將生物薄片面朝下放在已準(zhǔn)備好的蓋玻片上，立即查看并調(diào)整使蓋片嵌入載片的凹槽中?？乖谐霈F(xiàn)陽(yáng)性染色細(xì)胞為
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