【正文】 13] 付建福. 玉米黃曲霉毒素的檢驗(yàn)與預(yù)防措施[J]. 豬業(yè)科學(xué)，2008，（3）：32[14] 李書國(guó)，陳輝等. 糧油食品中黃曲霉毒素檢測(cè)方法綜述[J]. 糧油食品科技: 2009，17（2）：6265[15] 鄭天，屠春燕. 高效液相色譜法和液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在食品工業(yè)上的應(yīng)用[J]. 南京工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào), 2004，26(2)：99105。同時(shí)，感謝同組實(shí)驗(yàn)的張德剛、王宏偉、余明朝等同學(xué)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中給予的無(wú)私幫助，還有學(xué)姐郭衛(wèi)的耐心指導(dǎo)！最后，我要向關(guān)心和支持我的所有老師、同學(xué)和朋友們表示真摯的謝意！感謝他們對(duì)我的關(guān)心、關(guān)注和支持！參考文獻(xiàn)[1] 楊靜，哈益明，王鋒. 高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)花生中的黃曲霉毒素B1[J]. 分析試驗(yàn)室，2009，（06）：3538[2] 劉作新，高軍俠. 黃曲霉毒素的檢測(cè)方法研究進(jìn)展[J]. 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，（2）：223226[3] 馬志科，昝林森. 黃曲霉毒素危害、檢測(cè)方法及生物降解研究進(jìn)展[J]. 動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2009，（9）：9194[4] 何學(xué)超，馮永建，郭道林等. 黃曲霉毒素B1液相色譜法檢測(cè)技術(shù)比較分析[J]. 谷物化學(xué)與品質(zhì)分析，2008，(5)：3641[5] 吳丹. 黃曲霉毒素在糧食和食品中的危害及防治[J]. 糧食加工，2007，（03）：9194[6] G C Llewellyn, W A O39。從實(shí)驗(yàn)中可以看出液質(zhì)聯(lián)用的測(cè)定方法是一種高效的定性定量方法。在本方法選擇的最佳條件下，～，與其色譜峰面積呈顯著線性相關(guān)，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=+，相關(guān)系數(shù)為R2=。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，特別是在樣品的前處理過(guò)程中，由于操作和儀器的不準(zhǔn)確性，導(dǎo)致樣品中的黃曲霉毒素提取不充分，提取量可能低于液質(zhì)聯(lián)用法的檢出限，造成在實(shí)驗(yàn)結(jié)果中無(wú)黃曲霉毒素的檢出。圖9 60%甲醇提取無(wú)損大豆中黃曲霉毒素B2分子量（337）的質(zhì)譜圖圖9顯示，在無(wú)損大豆（60%甲醇）質(zhì)譜圖中，正離子ESI在m/（分子量337）的準(zhǔn)分子離子峰[M+Na]+峰，提示該樣品中可能含有黃曲霉毒素B2。（5）加入無(wú)水硫酸鈉干燥時(shí)會(huì)帶走一些有機(jī)溶劑且過(guò)濾時(shí)濾紙上也會(huì)有有機(jī)溶劑的殘留，這些都會(huì)造成黃曲霉毒素的損失。為了解決這個(gè)問(wèn)題重復(fù)三次用正己烷萃取油脂，這樣就要過(guò)濾三次，每次過(guò)濾黃曲霉毒素都可能粘在濾紙上造成黃曲霉毒素的損失。根據(jù)黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)品的出峰時(shí)間，在所測(cè)得的樣品色譜圖中找相近的時(shí)間處的峰，10個(gè)樣品均未測(cè)出黃曲霉毒素。表4 重復(fù)性與檢出限AFB1標(biāo)準(zhǔn)品123456789保留時(shí)間（min）峰面積（mVs）保留時(shí)間（min）1246810從圖1中可以看出，進(jìn)樣量與色譜峰面積呈顯著的線性關(guān)系，隨著進(jìn)樣量的增加峰面積的值也相應(yīng)增大。表2 色譜柱溫度實(shí)驗(yàn)結(jié)果柱溫（℃）保留時(shí)間（min）容量因子（k）2025303540 方法的靈敏度取濃度為139181。柱溫不能高于固定液的最高使用溫度，否則會(huì)造成固定液大量揮發(fā)流失。L時(shí)，黃曲霉毒素B1的分離效果及峰形最好，因此選擇進(jìn)樣量為7181。保留時(shí)間太短易有雜質(zhì)干擾，分離效果不好；保留時(shí)間太長(zhǎng)，分析效率下降，綜合考慮甲醇/水（42/58，V/V）定為流動(dòng)相。 色譜條件的優(yōu)化 流動(dòng)相的選擇根據(jù)黃曲霉毒素B1的理化性質(zhì)和相應(yīng)的資料，對(duì)AFB1進(jìn)行色譜分離，有機(jī)溶劑一般采用乙腈或甲醇。 質(zhì)譜條件 電離源：ESI；采用正離子模式，利用保留時(shí)間和碎片信號(hào)判斷定性結(jié)果，掃描范圍m/z 1002200；毛細(xì)管電壓：4574V；毛細(xì)管出口壓力：197V；霧化器壓力：15psi；干燥氣流速：10L/min；干燥溫度：350℃。 色譜條件 Agilent C18柱（5μm，150mm）；柱溫40℃；流動(dòng)相：甲醇：水42：58；純凈水。溶解液通過(guò)凈化柱，收集于指形管。取濾渣于250mL的具塞錐形瓶中，準(zhǔn)確加入100mL60%甲醇/水溶液（V/V）搖勻，在25℃水浴恒溫振蕩器中振蕩30min，經(jīng)15cm快速定性濾紙過(guò)濾，在濾液中加入無(wú)水硫酸鈉干燥，濾液于100mL燒瓶中，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器50℃蒸干。黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)品（固體），石家莊偉天科學(xué)儀器有限公司。無(wú)水硫酸鈉（分析純），洛陽(yáng)市化學(xué)試劑廠出品。 試劑與溶液正己烷（分析純），天津市可米歐化學(xué)試劑有限公司出品。RE—52旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器有限公司出品。本課題采用液質(zhì)聯(lián)用的方法測(cè)定花生、玉米、大豆等糧食作物中的黃曲霉毒素。近年來(lái),氣相色譜法、高效液相色譜法已經(jīng)成為現(xiàn)代儀器分析的應(yīng)用最為廣泛的方法?！”菊n題研究的意義黃曲霉毒素是對(duì)人類和動(dòng)物危害大的真菌毒素之一。表示一個(gè)組分在固定相中停留的時(shí)間（tR1）是不保留組分保留時(shí)間（t0）的幾倍。在反相色譜中，水是方向色譜中最弱的洗脫溶劑，隨著水的配比的逐漸減少，溶劑的極性逐漸的減少，故溶劑的強(qiáng)度逐漸增加，其洗脫能力也越來(lái)越低。普通的HPLC—MS/MS分離的效果差，分析花費(fèi)的時(shí)間長(zhǎng)，因此，該方法仍然具有比較大的提升空間?！∫合嗌V—質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(LC—MS)高效液相色譜法作為基本分析方法在食品工業(yè)上應(yīng)用已經(jīng)十分廣泛，色譜是一種高分辨率的分離技術(shù)，基本原理是利用各物質(zhì)在固定相和流動(dòng)相之間物理分配性質(zhì)的差異，使混合物中的多種成分相互分離。其原理是將已知抗原吸附在固態(tài)載體表面，洗除末吸附抗原，加入一定量抗體與待測(cè)樣品（含有抗原）提取液的混合液，競(jìng)爭(zhēng)培養(yǎng)后，在固相載體表面形成抗原抗體復(fù)合物。林海丹等也采用該法測(cè)定了果仁中AF?！∮H和柱高效液相色譜法(IAGHPLC)親和柱高效液相色譜法(IAG—HPLC)方法具有快速、高效、靈敏、準(zhǔn)確、方便、安全、易于推廣等優(yōu)點(diǎn)，因此是目前最為先進(jìn)的一種分析方法，國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織 ISO 已將該法列為國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)方法。Blesa J利用C鏈合硅石為固相分散提取法的吸附劑，以乙腈為洗脫劑，HPLC結(jié)合熒光檢測(cè)器對(duì)花生中的4種AF進(jìn)行測(cè)定，回收率為78 %～86 %，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差是4%～7%，～。靈敏度低、重現(xiàn)差、操作煩瑣、時(shí)間長(zhǎng)且安全性差等缺點(diǎn)，已越來(lái)越不適用現(xiàn)代分析的要求[14]。為了提高薄層層析法的精度，還建立薄層掃描等其他的方法來(lái)確定黃曲霉毒素，它是薄層層析法的儀器化，樣品的處理和層析條件與薄層層析法相同，只是在標(biāo)準(zhǔn)品的設(shè)定和結(jié)果判定上有所不同。萃取試劑一般為甲醇—2—水或乙腈—2—水等；凈化方法有薄層法、反相分配柱法、免疫親和柱法等[3]。鑒于各種黃曲霉毒素的易引入和比較強(qiáng)烈的毒性，歐盟等相應(yīng)的機(jī)構(gòu)已經(jīng)對(duì)黃曲霉毒素的含量水平做了嚴(yán)格的規(guī)定：在干果中B1不得超過(guò)2μg/kg，黃曲霉毒素的總量不得超過(guò)4μg/kg (B1+B2+G1+G2)?！↑S曲霉毒素檢測(cè)方法黃曲霉毒素是最為常見(jiàn)的一類毒素，主要分為BBGGMM2。環(huán)境溫度為15℃時(shí)，處于不同水活度中的黃曲