【正文】 13] 付建福. 玉米黃曲霉毒素的檢驗與預(yù)防措施[J]. 豬業(yè)科學(xué)，2008，（3）：32[14] 李書國，陳輝等. 糧油食品中黃曲霉毒素檢測方法綜述[J]. 糧油食品科技: 2009，17（2）：6265[15] 鄭天，屠春燕. 高效液相色譜法和液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在食品工業(yè)上的應(yīng)用[J]. 南京工業(yè)大學(xué)學(xué)報, 2004，26(2)：99105。同時，感謝同組實驗的張德剛、王宏偉、余明朝等同學(xué)實驗過程中給予的無私幫助，還有學(xué)姐郭衛(wèi)的耐心指導(dǎo)！最后，我要向關(guān)心和支持我的所有老師、同學(xué)和朋友們表示真摯的謝意！感謝他們對我的關(guān)心、關(guān)注和支持！參考文獻[1] 楊靜，哈益明，王鋒. 高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測花生中的黃曲霉毒素B1[J]. 分析試驗室，2009，（06）：3538[2] 劉作新，高軍俠. 黃曲霉毒素的檢測方法研究進展[J]. 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2004，（2）：223226[3] 馬志科，昝林森. 黃曲霉毒素危害、檢測方法及生物降解研究進展[J]. 動物醫(yī)學(xué)進展，2009，（9）：9194[4] 何學(xué)超，馮永建，郭道林等. 黃曲霉毒素B1液相色譜法檢測技術(shù)比較分析[J]. 谷物化學(xué)與品質(zhì)分析，2008，(5)：3641[5] 吳丹. 黃曲霉毒素在糧食和食品中的危害及防治[J]. 糧食加工，2007，（03）：9194[6] G C Llewellyn, W A O39。從實驗中可以看出液質(zhì)聯(lián)用的測定方法是一種高效的定性定量方法。在本方法選擇的最佳條件下，～，與其色譜峰面積呈顯著線性相關(guān)，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=+，相關(guān)系數(shù)為R2=。在實驗過程中，特別是在樣品的前處理過程中，由于操作和儀器的不準(zhǔn)確性，導(dǎo)致樣品中的黃曲霉毒素提取不充分，提取量可能低于液質(zhì)聯(lián)用法的檢出限，造成在實驗結(jié)果中無黃曲霉毒素的檢出。圖9 60%甲醇提取無損大豆中黃曲霉毒素B2分子量（337）的質(zhì)譜圖圖9顯示，在無損大豆（60%甲醇）質(zhì)譜圖中，正離子ESI在m/（分子量337）的準(zhǔn)分子離子峰[M+Na]+峰，提示該樣品中可能含有黃曲霉毒素B2。（5）加入無水硫酸鈉干燥時會帶走一些有機溶劑且過濾時濾紙上也會有有機溶劑的殘留，這些都會造成黃曲霉毒素的損失。為了解決這個問題重復(fù)三次用正己烷萃取油脂，這樣就要過濾三次，每次過濾黃曲霉毒素都可能粘在濾紙上造成黃曲霉毒素的損失。根據(jù)黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)品的出峰時間，在所測得的樣品色譜圖中找相近的時間處的峰，10個樣品均未測出黃曲霉毒素。表4 重復(fù)性與檢出限AFB1標(biāo)準(zhǔn)品123456789保留時間（min）峰面積（mVs）保留時間（min）1246810從圖1中可以看出，進樣量與色譜峰面積呈顯著的線性關(guān)系，隨著進樣量的增加峰面積的值也相應(yīng)增大。表2 色譜柱溫度實驗結(jié)果柱溫（℃）保留時間（min）容量因子（k）2025303540 方法的靈敏度取濃度為139181。柱溫不能高于固定液的最高使用溫度，否則會造成固定液大量揮發(fā)流失。L時，黃曲霉毒素B1的分離效果及峰形最好，因此選擇進樣量為7181。保留時間太短易有雜質(zhì)干擾，分離效果不好；保留時間太長，分析效率下降，綜合考慮甲醇/水（42/58，V/V）定為流動相。 色譜條件的優(yōu)化 流動相的選擇根據(jù)黃曲霉毒素B1的理化性質(zhì)和相應(yīng)的資料，對AFB1進行色譜分離，有機溶劑一般采用乙腈或甲醇。 質(zhì)譜條件 電離源：ESI；采用正離子模式，利用保留時間和碎片信號判斷定性結(jié)果，掃描范圍m/z 1002200；毛細管電壓：4574V；毛細管出口壓力：197V；霧化器壓力：15psi；干燥氣流速：10L/min；干燥溫度：350℃。 色譜條件 Agilent C18柱（5μm，150mm）；柱溫40℃；流動相：甲醇：水42：58；純凈水。溶解液通過凈化柱，收集于指形管。取濾渣于250mL的具塞錐形瓶中，準(zhǔn)確加入100mL60%甲醇/水溶液（V/V）搖勻，在25℃水浴恒溫振蕩器中振蕩30min，經(jīng)15cm快速定性濾紙過濾，在濾液中加入無水硫酸鈉干燥，濾液于100mL燒瓶中，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器50℃蒸干。黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)品（固體），石家莊偉天科學(xué)儀器有限公司。無水硫酸鈉（分析純），洛陽市化學(xué)試劑廠出品。 試劑與溶液正己烷（分析純），天津市可米歐化學(xué)試劑有限公司出品。RE—52旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器有限公司出品。本課題采用液質(zhì)聯(lián)用的方法測定花生、玉米、大豆等糧食作物中的黃曲霉毒素。近年來,氣相色譜法、高效液相色譜法已經(jīng)成為現(xiàn)代儀器分析的應(yīng)用最為廣泛的方法?！”菊n題研究的意義黃曲霉毒素是對人類和動物危害大的真菌毒素之一。表示一個組分在固定相中停留的時間（tR1）是不保留組分保留時間（t0）的幾倍。在反相色譜中，水是方向色譜中最弱的洗脫溶劑，隨著水的配比的逐漸減少，溶劑的極性逐漸的減少，故溶劑的強度逐漸增加，其洗脫能力也越來越低。普通的HPLC—MS/MS分離的效果差，分析花費的時間長，因此，該方法仍然具有比較大的提升空間?！∫合嗌V—質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(LC—MS)高效液相色譜法作為基本分析方法在食品工業(yè)上應(yīng)用已經(jīng)十分廣泛，色譜是一種高分辨率的分離技術(shù)，基本原理是利用各物質(zhì)在固定相和流動相之間物理分配性質(zhì)的差異，使混合物中的多種成分相互分離。其原理是將已知抗原吸附在固態(tài)載體表面，洗除末吸附抗原，加入一定量抗體與待測樣品（含有抗原）提取液的混合液，競爭培養(yǎng)后，在固相載體表面形成抗原抗體復(fù)合物。林海丹等也采用該法測定了果仁中AF。　親和柱高效液相色譜法(IAGHPLC)親和柱高效液相色譜法(IAG—HPLC)方法具有快速、高效、靈敏、準(zhǔn)確、方便、安全、易于推廣等優(yōu)點，因此是目前最為先進的一種分析方法，國際標(biāo)準(zhǔn)化組織 ISO 已將該法列為國際標(biāo)準(zhǔn)方法。Blesa J利用C鏈合硅石為固相分散提取法的吸附劑，以乙腈為洗脫劑，HPLC結(jié)合熒光檢測器對花生中的4種AF進行測定，回收率為78 %～86 %，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差是4%～7%，～。靈敏度低、重現(xiàn)差、操作煩瑣、時間長且安全性差等缺點，已越來越不適用現(xiàn)代分析的要求[14]。為了提高薄層層析法的精度，還建立薄層掃描等其他的方法來確定黃曲霉毒素，它是薄層層析法的儀器化，樣品的處理和層析條件與薄層層析法相同，只是在標(biāo)準(zhǔn)品的設(shè)定和結(jié)果判定上有所不同。萃取試劑一般為甲醇—2—水或乙腈—2—水等；凈化方法有薄層法、反相分配柱法、免疫親和柱法等[3]。鑒于各種黃曲霉毒素的易引入和比較強烈的毒性，歐盟等相應(yīng)的機構(gòu)已經(jīng)對黃曲霉毒素的含量水平做了嚴(yán)格的規(guī)定：在干果中B1不得超過2μg/kg，黃曲霉毒素的總量不得超過4μg/kg (B1+B2+G1+G2)?！↑S曲霉毒素檢測方法黃曲霉毒素是最為常見的一類毒素，主要分為BBGGMM2。環(huán)境溫度為15℃時，處于不同水活度中的黃曲