基因診斷和基因治療(1)-全文預(yù)覽
【正文】 將外源正?；?qū)氚屑?xì)胞，以糾正或補(bǔ)償因缺陷和異?；蛞鸬募膊。_(dá)到治療目的。 （ 1）酶類腫瘤標(biāo)志物 （ 2）激素類標(biāo)志物 （ 3）胚胎抗原 （ 4）特殊蛋白標(biāo)志物 （ 5）糖蛋白類抗原 （ 6）血中癌基因蛋白 （ 7）唾液酸和唾液酸?；D(zhuǎn)移酶 （ 8）多胺 免疫組化篩選提高檢出率 法醫(yī)學(xué)鑒定 針對(duì)人類 DNA 遺傳差異進(jìn)行的個(gè)體識(shí)別和親子鑒定。 檢測(cè)方法： Southern 雜交 定量 PCR 基因的過量表達(dá)：包括基因擴(kuò)增基礎(chǔ)上的過量表達(dá)及非 DNA水平的過量表達(dá)。 非典型性肺炎（ SARS） 由一種新型冠狀病毒（ SARSCoV）引起，多種 途徑傳播，傳染性強(qiáng)、高致死率的急性疾病。 HIV特異地侵犯輔助性 T細(xì)胞（ CD4），引起人體細(xì)胞免疫嚴(yán)重缺陷，導(dǎo)致頑固的機(jī)會(huì)性感染，惡性腫瘤和神經(jīng)系統(tǒng)損傷。（可與 PCR聯(lián)用： PCRASO） 單鏈構(gòu)象多態(tài)性（ SSCP） 日本 Orita等研究發(fā)現(xiàn)，單鏈 DNA片段呈復(fù)雜的 空間折疊構(gòu)象，當(dāng)有一個(gè)堿基發(fā)生改變時(shí)，會(huì)或 多或 少地影響其空間構(gòu)象，使構(gòu)象發(fā)生改變， 空間構(gòu)象有差異的單鏈 DNA分子在聚丙烯酰胺 凝膠中受排阻大小不同 .因此，通過 非變性聚丙 烯酰胺凝膠電泳 (PAGE)， 可以非常 敏銳地將構(gòu) 象上有差異的分子分離開 . PCRSSCP PCRSSCP基本過程 ① PCR擴(kuò)增靶 DNA ② 將特異的 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物變性后快速?gòu)?fù)性 。為達(dá)到 選擇性 擴(kuò)增的目的，再在模板末端添加具有 選擇性核苷酸（ 1～ 3個(gè)）的不同引物 ，然后 PCR擴(kuò)增，結(jié)果只有那些兩端序列與選擇性核苷酸配對(duì)的酶切片段被擴(kuò)增。 （四）擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性（ AFLP） 應(yīng)用于基因突變性質(zhì)不明的連鎖分析。 （ 6）、實(shí)時(shí)定量 PCR： 借助特異性結(jié)合 DNA的熒光染料，實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)檢測(cè) PCR 擴(kuò)增的 DNA量的變化。簡(jiǎn)單、快捷、靈敏。用于檢測(cè)特 定基因片段的存在，分析鑒定基因突變。 （無細(xì)胞分子克隆技術(shù)）。 （ RNA可直接用 變性膠電泳 ，轉(zhuǎn)膜） 制備樣品： 核酸印跡雜交基本過程： （ 2）制備探針： 探針：一段能和待檢測(cè)核酸分子按堿基互補(bǔ)配對(duì) 原則而結(jié)合的核酸分子片段。 表型克隆技術(shù) －－是將有關(guān)表型與基因結(jié)構(gòu)結(jié)合，直接 分離該表型的相關(guān)基因，并對(duì)疾病相關(guān)的 一組基因 進(jìn)行 克隆，然后用作多種探針，來診斷多基因遺傳病。 定位性克隆 －－根據(jù)遺傳連鎖圖進(jìn)行定位性克隆。 基因診斷的基本策略： 檢測(cè)已知的能產(chǎn)生某種特定功能蛋白的基因 這些基因根據(jù)其特定功能已被克隆，并被定位在染色體上，基因序列亦被測(cè)定，致病時(shí)的基因改變亦較清楚。 先天遺傳性疾病 遺傳性疾病 : 發(fā)病的原因?yàn)樘囟ɑ虻耐蛔儭? 可檢測(cè)正在生長(zhǎng)的病原體或潛在病原體。 基因診斷是在 DNA/RNA水平檢測(cè)分析基因的存在、結(jié)構(gòu)變異和表達(dá)狀態(tài)，與 傳統(tǒng)診斷方法比較有其特點(diǎn)： 基因診斷的特點(diǎn)： 病因診斷： 直接瞄準(zhǔn)病理基因，不僅對(duì)表型出現(xiàn)的疾病作出診斷，還可能發(fā)現(xiàn) 潛在的致病因素，如 : 確定有遺傳家族史的人攜帶致病基因。如：惡性腫瘤、高血壓、動(dòng)脈硬化、 糖尿病、先天畸形等、 三、 獲得性基因病 ：指外源基因（ DNA）侵入， 在機(jī)體產(chǎn)生疾病，一旦將其清除便可痊愈。 將基因或其組成部分發(fā)生異常的疾病統(tǒng) 稱為 基因病 ?；虻母淖?，會(huì)導(dǎo)致各種表型的改變，進(jìn)而引起疾病的發(fā)生。 二、 多基因病 ：由多個(gè)基因突變綜合作用引起的 疾病。 （細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)變化、代謝產(chǎn)物異常、特定蛋白分子識(shí)別差異等） 基因診斷 對(duì)患者基因直接分析 基因診斷定義（概念）： 基因診斷 是利用現(xiàn)代分子生物學(xué)和分子遺傳學(xué)的技術(shù)方法，直接檢測(cè)患者體內(nèi)基因結(jié)構(gòu)及其表達(dá)水平是否正常，從而對(duì)疾病作出診斷或輔助診斷。樣品可長(zhǎng)期保存。 尤其是當(dāng)無抗體時(shí)，基因診斷成為唯一手段。 （ 2）用 southern 雜交得到 DNA指紋圖譜 個(gè)體識(shí)別、親子鑒定、法醫(yī)物證 其他 二、基因診斷的對(duì)象 遺傳穩(wěn)定，個(gè)體特異，因而用于法醫(yī)和親子鑒定。 染色體遺傳連鎖圖 －－用限制性內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)作遺傳 標(biāo)志，定位與之相連鎖的正常基因與致病基因，建立相應(yīng)的遺傳連鎖圖譜。 檢測(cè)表型克隆基因 針對(duì)多基因?。ㄈ纾褐囟确逝帧⑾?、高血壓、癲癇、精神病、多種自身免疫性疾?。?。 基因檢驗(yàn)的兩個(gè)必要條件： 必需的特異探針（ 標(biāo)記的 ） 必需的基因組 DNA 核酸分子雜交－－核酸印跡雜交 ? DNA印跡雜交（ Southern blot） ? RNA印跡雜交 （ Nouthern blot） ? 斑點(diǎn)印跡雜交 （ Dotblot） ? 原位雜交 (situ hybridization) 核酸印跡雜交基本過程： 提取 DNA或 RNA → 酶切 → 凝膠電泳 → 膠變 性處理（ DNA） → 轉(zhuǎn)印核酸片段到 NC膜上。 一種體外模擬自然 DNA復(fù)制過程的核酸擴(kuò)增技術(shù)。 （呈 2n 擴(kuò)增速度） PCR基本過程和原理 特點(diǎn)：特異性強(qiáng) 靈敏度高 樣品可以是： 毛發(fā)、血痕 單細(xì)胞、 病原體、 腫瘤殘留物、 犯罪現(xiàn)場(chǎng)遺留物 基因診斷中常用的 PCR技術(shù)： （ 1）、 DNA PCR： （ 2）、 RT
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