《疫學(xué)技術(shù)和臨床》ppt課件-全文預(yù)覽
【正文】 力 ? 儀器的能力／局限性 ? 預(yù)處理的要求 CONFIDENTIAL Rev. 05/07/02 34 試劑原材料的選擇 ? 原材料 ? 抗體 ? 標(biāo)準(zhǔn)品 ? 封閉試劑（稀釋液） ? 清洗緩沖液 Y Y CONFIDENTIAL Rev. 05/07/02 35 抗體的選擇 ? 單克隆 (Monoclonal) 和多克隆 ( polyclonal) ? 選擇的標(biāo)準(zhǔn) (criteria) ? 特異性 (Specificity) ? 靈敏度 (Sensitivity) ? 供應(yīng)能力 (Supply) ? 相關(guān)性 (Correlation) ? 可制造性 (Manufacturability) ? 花費(fèi) (Cost) CONFIDENTIAL Rev. 05/07/02 36 多克隆抗體 (Polyclonal Antibodies) ? 免疫動(dòng)物獲得 ,如羊或兔 ? 時(shí)間長(zhǎng) ,復(fù)雜的制作流程 ? 注射 ,監(jiān)測(cè)滴度 (可能反覆注射 ) ? 周期性的抽血獲得 ? 特徵化 (Characterization)和純化(purification) ? 生產(chǎn)出＂雞尾酒＂式的抗體 ,針對(duì)所有抗原決定簇 ? 適合對(duì)臨床靈敏度要求較高分析測(cè)試 Y Y Y Y Y CONFIDENTIAL Rev. 05/07/02 37 單克隆抗體 (Monoclonal antibodies) Y Y Y Y 克隆的結(jié)果 抗體的產(chǎn)生具有高度的同源性和特異性并針對(duì)一個(gè)抗原決定簇 可以選擇最好的抗體 在大量生產(chǎn)時(shí)可以確保持續(xù)的供應(yīng) 適合對(duì)臨床特異性和批間一致性要求較高的分析測(cè)試 CONFIDENTIAL Rev. 05/07/02 38 抗體的選擇 ? 篩選 ? 抗體需經(jīng)過(guò)靈敏度，特異性和穩(wěn)定性的評(píng)價(jià) ? 許多的抗原決定簇并非一種分子所獨(dú)有 ? 被測(cè)抗原的穩(wěn)定性不同 ? 被測(cè)抗原的游離和結(jié)合方式 CONFIDENTIAL Rev. 05/07/02 39 案例 : hLH 抗原位點(diǎn)圖 Beta Alpha BD 1 hTSH hCG BD 2 hCG AD 1 hCG hFSH hTSH BD 3 AD 3 AD 2 hCG hFSH hTSH CONFIDENTIAL Rev. 05/07/02 40 案例 : TroponinI 抗原位點(diǎn)圖 ? 肌鈣蛋白 I ? 穩(wěn)定性的問(wèn)題 ? 氧化的問(wèn)題 ? 磷酸化的問(wèn)題 Nterminal Cterminal 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 P O O __ __ Access 1st Gen 3134 5870 (crossreact) 157160 PMP Detect Access AccuTnI ____ ___ 2440 4149 PMP Detect CONFIDENTIAL Rev. 05/07/02 41 抗體的選擇 ? 等分子 (Equimolar) vs. 非等分子 (nonequimolar)分析 ? 依賴(lài)于特異性抗體的選擇 結(jié)合方式 一些位點(diǎn)被隱藏 游離方式 所有位點(diǎn)都暴露 PSA ACT PSA CONFIDENTIAL Rev. 05/07/02 42 嗜異性抗體 (Heterophile Antibody) ?病人樣品中可能自然產(chǎn)生一些針對(duì)動(dòng)物免疫球蛋白的抗體 (通常是鼠或羊 ) ?來(lái)源于暴露于這些動(dòng)物或接受過(guò)動(dòng)物血清的治療 ?分析的干擾 ?可以在雙單克隆夾心法分析方式中引起假陽(yáng)性 ?可以在單克隆 /多克隆分析方式中出現(xiàn)假陰性 CONFIDENTIAL Rev. 05/07/02 43 嗜異性抗體反應(yīng) ? 假陽(yáng)性 較多見(jiàn) ? 嗜異性抗體在捕捉抗體和檢測(cè)抗體中搭橋 ,出現(xiàn)在雙單克隆夾心法方式中 CONFIDENTIAL Rev. 05/07/02 44 嗜異性抗體反應(yīng) ? 假陰性 較少見(jiàn) ? 嗜異性抗體爭(zhēng)奪捕捉或檢測(cè)抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn) ,出現(xiàn)在單克隆 /多克隆分析方式中 CONFIDENTIAL Rev. 05/07/02 45 稀釋液 ? 封閉劑（稀釋液）可以加在反應(yīng)基質(zhì)中或整合在試劑盒內(nèi) ? 動(dòng)物蛋白（鼠，兔，羊等） ? 各個(gè)廠家生產(chǎn)的分析試劑都有可能會(huì)不同程度的受到任何一個(gè)病人血清的影響！ CONFIDENTIAL Rev. 05/07/02 46 定標(biāo)程序 ? 廠家產(chǎn)生的主定標(biāo)曲線(xiàn) ? 感覺(jué)節(jié)省的校正型 2 點(diǎn)定標(biāo) ? 會(huì)增加定標(biāo)的頻率 ? 對(duì)非線(xiàn)性的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)可能會(huì)有問(wèn)題 (大多數(shù)的免疫分
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