【正文】 2 使用方法 2%噻蟲啉微囊懸浮劑使用方法防治適期：在松褐天牛羽化初期和第一次藥劑有效期末（約隔30日）各噴一次。但當(dāng)檢測樣品的CT值大于35或無CT值時，即可判斷檢測樣品中不含有松材線蟲。反應(yīng)程序50℃ 2min，95℃ 10min。（完成）。，為反應(yīng)孔選定探針。（本實驗中，taqMan探針選fam，TaqMan－Mgb探針選stdl）；。在Eppendorf管中依次加入下列成分： Master MIX （K液）5 ul； 10 umol/L TaqMan 探針（L液） ul； umol/L正向引物與負(fù)向引物（M） ul；（X液） ul；（C液） ul。4 鏡檢室內(nèi)用水將引誘管中瓊脂沖出，放置片刻，在顯微鏡下觀察線蟲形態(tài)，對松材線蟲加以鑒定。%，針葉紅褐色，無刻槽，無小蠹、白蟻危害：取樣部位為樹干2m附近。3 繁殖型松材線蟲取樣將α－蒎烯（Acros Organics，98%），β－蒎烯（Fluka Chemie AG，80%）和長葉烯（Acros Organics，99%），按照比例1∶∶ n－h(huán)exane溶解（Fisher Chemicals，99%）成濃度為130mg/40181。l引誘劑滴入到橡膠頭，待溶劑被揮發(fā)后，進(jìn)行取樣。 （北京Zohonice 科技有限發(fā)展公司，北京），內(nèi)裝引誘劑載體橡膠頭（通州順義塑料廠，北京），%瓊脂凝固在載體上方周圍。附錄：1．線蟲檢測管檢測松材線蟲技術(shù)2．松材線蟲實時PCR檢測技術(shù)3．噻蟲啉防治松褐天牛成蟲技術(shù)方法4．名松古樹打孔注藥保護(hù)技術(shù)5．松材線蟲病疫木熱處理技術(shù)（熱風(fēng)烘干箱處理）6．松材線蟲病疫木熱處理技術(shù)（熱風(fēng)干燥窯處理）7．松材線蟲病疫木微波處理技術(shù)（輥軸式）8．松材線蟲病疫木微波處理技術(shù)（隧道式）9．松材線蟲病疫木熏蒸處理技術(shù)附錄1線蟲檢測管檢測松材線蟲技術(shù)1 適用范圍松屬Pinus植物的活體及木材、木制品等。對松褐天牛蟲口密度較大的林分，要采取人工、化學(xué)等措施降低的蟲口密度?？刹捎玫奶幚泶胧┯校撼μ幚怼⒏淖冇猛?、退運處理、銷毀等。（四）以縣級行政區(qū)為單位，需要調(diào)入松木包裝材料的，調(diào)入單位或個人應(yīng)向當(dāng)?shù)赜嘘P(guān)植物檢疫機(jī)構(gòu)申報，經(jīng)審查后，視情況提出檢疫管理意見，同時向調(diào)出方森防檢疫機(jī)構(gòu)提出《檢疫要求書》。實施檢疫檢查的抽樣比例，苗木按一批貨物總件數(shù)的5%進(jìn)行抽樣、木材按總件數(shù)的10%進(jìn)行抽樣。有條件的地方應(yīng)開展疫木安全利用，以減少損失。9．林間就地套袋熏蒸：將砍伐的樹干及直徑1厘米以上的樹枝截成長度100厘米－150厘米的木段，投放56％磷化鋁藥片進(jìn)行熏蒸，用量每立方米體積20克，密封10 天－15天。7．燒毀處理：選取遠(yuǎn)離居民區(qū)、建筑物且交通方便的地點進(jìn)行燒毀。4．制板處理：在松褐天牛非羽化期，將疫木按照膠合板、刨花板、中密度纖維板生產(chǎn)工序，加工制作成膠合板、刨花板、中密度纖維板，并在加工制作過程中，將松材線蟲及其媒介昆蟲殺死，達(dá)到除害處理的目的。具體方法見附錄8。所有處理必須在松褐天牛非羽化期內(nèi)進(jìn)行。（3）發(fā)生小班：每個鄉(xiāng)鎮(zhèn)發(fā)病小班1個到3個的，全部檢查；每個鄉(xiāng)鎮(zhèn)有4個以上發(fā)病小班的，隨機(jī)抽取3個小班進(jìn)行檢查。3．抽查比例：（1）縣級疫情發(fā)生區(qū)：有基本根除任務(wù)的、或上年度新發(fā)生的、或疫情上升的、或縣級自查達(dá)到基本根除目標(biāo)的，應(yīng)該全部檢查。（5）注意事項在釋放花斑花絨寄甲的林分中，花斑花絨寄甲已寄生在死樹中松褐天牛上，不要將誘木和枯死樹清理出林地，可于松褐天牛羽化前砍伐集中起來，放在林中，用8目鐵絲網(wǎng)籠罩住，待花絨寄甲羽化遷飛后將誘木集中并燒毀。（3）直接在松林中釋放花斑花絨寄甲卵塊或成蟲防治——在松褐天牛種群數(shù)量較低的林分，每畝松林選擇松樹枯死木或有松褐天牛危害的松樹4株至5株，作為直接釋放花斑花絨寄甲卵或成蟲的受體，釋放量為卵2000粒／株或成蟲10對／株。放蜂時，根據(jù)平均每玻管含蜂量推算每個放蜂點放置蜂管數(shù)量，將蜂管棉塞打開后，蜂管平攤在靠近若干株松樹的地表中央，讓蜂自行在林間擴(kuò)散尋找寄主。放蜂時，在樹干上斜插一根大頭針，將蜂管棉塞打開后，蜂管倒插在大頭針上，管底略高于管口，以防止雨水浸入?；蛟谒珊痔炫Ｓg幼蟲期，對樹干噴灑16％喹硫磷2．化學(xué)藥劑防治適用范圍：所有松材線蟲病發(fā)生區(qū)。施藥量（毫升）大致與誘木樹干基部直徑（厘米）樹相當(dāng)。（三）松褐天牛防治1．設(shè)置誘木防治適用范圍：采用疫木清理措施的松林。4．伐樁處理病死木砍伐后伐樁可選擇如下方法之一進(jìn)行除害處理：——伐樁全部連根挖出后集中除害處理。在松褐天牛成蟲羽化前（松褐天牛一年一代的地區(qū)為10月至翌年4月；松褐天牛一年兩代的地區(qū)為7至8月和11月至翌年3月）由外向內(nèi)伐除包括病死松樹、疑似感病木、衰弱木、受壓木、風(fēng)折木、旱死木、雪壓木、當(dāng)年枯死或已經(jīng)萎蔫的側(cè)枝以及各種人為亂砍濫伐的松樹枝、干及伐樁等，所有伐除的松木及直徑超過1厘米的枝條均須作除害處理，并應(yīng)在松褐天牛成蟲羽化前完成；在操作允許的條件下，伐樁高度不得超過5厘米。作業(yè)要求：防治作業(yè)區(qū)以實際發(fā)生林份邊緣為基準(zhǔn)，向外至少延伸100米。3．防治作業(yè)區(qū)以實際發(fā)生林份邊緣為基準(zhǔn)，向外延伸一定范圍作為緩沖區(qū)。2．各縣級疫情發(fā)生區(qū)根據(jù)本?。▍^(qū)、市）松材線蟲病防治預(yù)案，結(jié)合本地松材線蟲病傳播規(guī)律、發(fā)生區(qū)的地理位置、林分用途、發(fā)生面積、危害程度等因素，以縣級行政區(qū)為單位，進(jìn)行防治作業(yè)設(shè)計。（四）疫情撤銷1．當(dāng)疫情發(fā)生區(qū)通過有效手段根除疫情后，由國家林業(yè)局以公告或新聞發(fā)布會等形式宣布該地解除疫情。實行定期除治（集中在秋季普查后至翌年松褐天牛羽化前開展疫木除治）的，每月報送一次；實行常年除治的，每季度報送一次。二、疫情報告、公布與撤銷（一）疫情確認(rèn)1．新發(fā)現(xiàn)疫情的省（區(qū)、市），疫情鑒定以國家林業(yè)局全國危險性林業(yè)有害生物檢驗鑒定技術(shù)培訓(xùn)中心或國家林業(yè)局林業(yè)有害生物檢驗鑒定中心鑒定結(jié)論為準(zhǔn)，由國家林業(yè)局最后確認(rèn)。在封片蠟圈上放置蓋玻片，轉(zhuǎn)移至控溫電熱平板上，保持75℃使蠟完全融化，取下并自然冷卻后用透明指甲油加封一次。吸去上部清水并保留底部3－4毫升線蟲液，置于53℃熱水中15 分鐘殺死線蟲，待冷卻后，加入等體積的TAF液固定48小時以上。用細(xì)針挑取，或用毛細(xì)滴管吸取線蟲置于載玻片的水滴中，并使之沉底。無菌條件下將多毛孢或鐮刀孢或灰葡萄孢接種在PDA平板上，置于25℃－28℃恒溫培養(yǎng)4－5天，菌絲長滿平板時接種線蟲。將分離液體收集到試管或燒杯中，通過自然沉淀或離心后進(jìn)行鏡檢。若需長期保存，要經(jīng)常在樣品上噴水（一般在半個月至1個月內(nèi)完成分離鑒定）。———抽取樣品要及時并重點抽取尚未完全枯死或剛枯死的優(yōu)勢木（針葉呈黃綠或黃褐色，尚未完全枯萎，樹皮尚未脫落，材質(zhì)尚未腐朽）。（4）取樣時應(yīng)考慮以下因素：——松材線蟲病發(fā)病高峰期一般在9－10月，從表現(xiàn)出針葉變黃、樹脂分泌減少甚至停止至死亡約1個月至1個半月。如外部表現(xiàn)癥狀明顯的可在胸高處取樣。（4）航空遙感監(jiān)測對地面不易調(diào)查的高山密林地區(qū)，采用航空遙感技術(shù)進(jìn)行監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)枯死樹后，再根據(jù)全球定位系統(tǒng)指示位置開展實地調(diào)查。禁止在疫情發(fā)生林分邊緣使用，防止疫情向外擴(kuò)散蔓延。（2）誘捕器監(jiān)測于松褐天牛羽化期在林間設(shè)置誘捕器誘捕松褐天?；铙w進(jìn)行監(jiān)測。3．其他輔助監(jiān)測技術(shù)（1）打孔流脂監(jiān)測在松材線蟲病發(fā)生區(qū)或其邊緣，選擇外觀正常、針葉無明顯變色的松樹，用直徑1厘米－（孔位盡量選擇垂直位置），觀察打孔后松脂流出情況，初步判別健康樹和疑似罹病樹。（2）詳查。重點區(qū)域每年普查工作至少2次，除在秋季開展普查外，在春季還應(yīng)開展疫情普查工作。2．普查內(nèi)容（1）疫情發(fā)生區(qū)查清發(fā)生分布范圍、發(fā)生面積（以小班面積為準(zhǔn)，孤立松林以實際面積統(tǒng)計）和病死樹數(shù)量，繪制發(fā)生分布圖表（省級到縣級、縣級到小班），計算病死樹株率和經(jīng)濟(jì)損失，掌握疫情發(fā)生情況，為制定年度防治計劃提供依據(jù)。松材線蟲病防治技術(shù)方案（修訂版）此件為國家林業(yè)局關(guān)于印發(fā)《松材線蟲病防治技術(shù)方案（修訂版）》的通知》（林造發(fā)[2010]35號）的附件，請結(jié)合當(dāng)?shù)貙嶋H貫徹落實。重點是與疫區(qū)毗鄰地帶、交通沿線、港口、風(fēng)景區(qū)、松木制品生產(chǎn)和使用單位、建筑工地、倉庫、駐軍營房、城鎮(zhèn)、木材集散地、移動通訊站、電視發(fā)射臺、高壓線塔、電纜線路、光纜線路及高壓線路等地區(qū)附近的松林。在松褐天牛一年兩代的地區(qū)普查時間為9－10月份；松褐天牛一年一代的地區(qū)普查時間為8－10月份。根據(jù)當(dāng)?shù)厮闪址植嫉奶攸c，設(shè)計出便于觀察全部林分的踏查路線；沿踏查路線用目測方法或借用望遠(yuǎn)鏡查找有無當(dāng)年枯死樹，或針葉褪色，或針葉黃化，或針葉枯萎，或針葉呈紅褐色等癥狀的松樹，選擇取樣對象。2．定點監(jiān)測在發(fā)生區(qū)邊緣地帶設(shè)置固定監(jiān)測點，定期調(diào)查，發(fā)現(xiàn)松樹枯死立即取樣分離鑒定，確定是否有松材線蟲。要注意松樹樹種之間的流脂差異，馬尾松要較黑松表現(xiàn)遲緩。一旦發(fā)現(xiàn)松褐天牛攜帶松材線蟲，則在誘捕點周圍100米范圍內(nèi)對枯死松樹和瀕死松樹進(jìn)行取樣分離鑒定，確定疫情發(fā)生地點。具體技術(shù)操作規(guī)程參見附錄1。如僅部分枝條表現(xiàn)癥狀的，要在樹干上部和死亡的枝條上取樣。（3）取樣時應(yīng)排除人畜破壞、森林火災(zāi)、其他病蟲害等原因造成的枯死樹。這種癥狀在混交林中表現(xiàn)尤其明顯。3．樣品的保存與處理取回的樣品應(yīng)及時分離鑒定，若需要保存可采取以下方法：將木片裝入塑料袋內(nèi)，扎緊袋口，在袋上扎幾個小孔（也可直接保存木段、圓盤），放入4℃冰箱。（四）分離鑒定1．線蟲分離將取回的樣品在室內(nèi)采用貝爾曼漏斗法或淺盤法進(jìn)行線蟲分離，分離時間一般需12小時以上。用盤多毛孢（Pestalotia spp.）或鐮刀孢（Fusarium spp.）或灰葡萄孢（Botrytis cinerea）培養(yǎng)線蟲。3．玻片的制作（1）臨時水玻片的制作：在潔凈的載玻片中央滴一水滴，水滴的量以加蓋玻片后恰好充滿蓋玻片下的空間為好。（2）半永久玻片的制作：將分離所得的線蟲液，轉(zhuǎn)移至離心管中，2000轉(zhuǎn)/分離心3分鐘。解剖鏡下挑取脫水后的目標(biāo)線蟲于甘油中，使其沉底并位于甘油滴中心位置。所需儀器和試劑可與國家林業(yè)局危險性林業(yè)有害生物檢驗鑒定技術(shù)培訓(xùn)中心聯(lián)系。2．月報告：各?。▍^(qū)、市）森防機(jī)構(gòu)定期以電子郵件和書面形式同時向國家林業(yè)局森防總站報送松材線蟲病除治工作進(jìn)展情況。（三）疫情公布國家林業(yè)局根據(jù)全國松材線蟲病疫情調(diào)查結(jié)果，每年正式以公告或新聞發(fā)布會等形式公布松材線蟲病疫情信息。三、防治措施（一）規(guī)劃設(shè)計1．各?。▍^(qū)、市）林業(yè)主管部門根據(jù)國家林業(yè)局的總體部署和本?。▍^(qū)、市）松材線蟲病秋季普查結(jié)