【正文】 2 使用方法 2%噻蟲(chóng)啉微囊懸浮劑使用方法防治適期：在松褐天牛羽化初期和第一次藥劑有效期末（約隔30日）各噴一次。但當(dāng)檢測(cè)樣品的CT值大于35或無(wú)CT值時(shí)，即可判斷檢測(cè)樣品中不含有松材線(xiàn)蟲(chóng)。反應(yīng)程序50℃ 2min，95℃ 10min。（完成）。，為反應(yīng)孔選定探針。（本實(shí)驗(yàn)中，taqMan探針選fam，TaqMan－Mgb探針選stdl）；。在Eppendorf管中依次加入下列成分： Master MIX （K液）5 ul； 10 umol/L TaqMan 探針（L液） ul； umol/L正向引物與負(fù)向引物（M） ul；（X液） ul；（C液） ul。4 鏡檢室內(nèi)用水將引誘管中瓊脂沖出，放置片刻，在顯微鏡下觀(guān)察線(xiàn)蟲(chóng)形態(tài)，對(duì)松材線(xiàn)蟲(chóng)加以鑒定。%，針葉紅褐色，無(wú)刻槽，無(wú)小蠹、白蟻危害：取樣部位為樹(shù)干2m附近。3 繁殖型松材線(xiàn)蟲(chóng)取樣將α－蒎烯（Acros Organics，98%），β－蒎烯（Fluka Chemie AG，80%）和長(zhǎng)葉烯（Acros Organics，99%），按照比例1∶∶ n－h(huán)exane溶解（Fisher Chemicals，99%）成濃度為130mg/40181。l引誘劑滴入到橡膠頭，待溶劑被揮發(fā)后，進(jìn)行取樣。 （北京Zohonice 科技有限發(fā)展公司，北京），內(nèi)裝引誘劑載體橡膠頭（通州順義塑料廠(chǎng)，北京），%瓊脂凝固在載體上方周?chē)?。附錄?．線(xiàn)蟲(chóng)檢測(cè)管檢測(cè)松材線(xiàn)蟲(chóng)技術(shù)2．松材線(xiàn)蟲(chóng)實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)技術(shù)3．噻蟲(chóng)啉防治松褐天牛成蟲(chóng)技術(shù)方法4．名松古樹(shù)打孔注藥保護(hù)技術(shù)5．松材線(xiàn)蟲(chóng)病疫木熱處理技術(shù)（熱風(fēng)烘干箱處理）6．松材線(xiàn)蟲(chóng)病疫木熱處理技術(shù)（熱風(fēng)干燥窯處理）7．松材線(xiàn)蟲(chóng)病疫木微波處理技術(shù)（輥軸式）8．松材線(xiàn)蟲(chóng)病疫木微波處理技術(shù)（隧道式）9．松材線(xiàn)蟲(chóng)病疫木熏蒸處理技術(shù)附錄1線(xiàn)蟲(chóng)檢測(cè)管檢測(cè)松材線(xiàn)蟲(chóng)技術(shù)1 適用范圍松屬Pinus植物的活體及木材、木制品等。對(duì)松褐天牛蟲(chóng)口密度較大的林分，要采取人工、化學(xué)等措施降低的蟲(chóng)口密度?？刹捎玫奶幚泶胧┯校撼μ幚?、改變用途、退運(yùn)處理、銷(xiāo)毀等。（四）以縣級(jí)行政區(qū)為單位，需要調(diào)入松木包裝材料的，調(diào)入單位或個(gè)人應(yīng)向當(dāng)?shù)赜嘘P(guān)植物檢疫機(jī)構(gòu)申報(bào)，經(jīng)審查后，視情況提出檢疫管理意見(jiàn)，同時(shí)向調(diào)出方森防檢疫機(jī)構(gòu)提出《檢疫要求書(shū)》。實(shí)施檢疫檢查的抽樣比例，苗木按一批貨物總件數(shù)的5%進(jìn)行抽樣、木材按總件數(shù)的10%進(jìn)行抽樣。有條件的地方應(yīng)開(kāi)展疫木安全利用，以減少損失。9．林間就地套袋熏蒸：將砍伐的樹(shù)干及直徑1厘米以上的樹(shù)枝截成長(zhǎng)度100厘米－150厘米的木段，投放56％磷化鋁藥片進(jìn)行熏蒸，用量每立方米體積20克，密封10 天－15天。7．燒毀處理：選取遠(yuǎn)離居民區(qū)、建筑物且交通方便的地點(diǎn)進(jìn)行燒毀。4．制板處理：在松褐天牛非羽化期，將疫木按照膠合板、刨花板、中密度纖維板生產(chǎn)工序，加工制作成膠合板、刨花板、中密度纖維板，并在加工制作過(guò)程中，將松材線(xiàn)蟲(chóng)及其媒介昆蟲(chóng)殺死，達(dá)到除害處理的目的。具體方法見(jiàn)附錄8。所有處理必須在松褐天牛非羽化期內(nèi)進(jìn)行。（3）發(fā)生小班：每個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)發(fā)病小班1個(gè)到3個(gè)的，全部檢查；每個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)有4個(gè)以上發(fā)病小班的，隨機(jī)抽取3個(gè)小班進(jìn)行檢查。3．抽查比例：（1）縣級(jí)疫情發(fā)生區(qū)：有基本根除任務(wù)的、或上年度新發(fā)生的、或疫情上升的、或縣級(jí)自查達(dá)到基本根除目標(biāo)的，應(yīng)該全部檢查。（5）注意事項(xiàng)在釋放花斑花絨寄甲的林分中，花斑花絨寄甲已寄生在死樹(shù)中松褐天牛上，不要將誘木和枯死樹(shù)清理出林地，可于松褐天牛羽化前砍伐集中起來(lái)，放在林中，用8目鐵絲網(wǎng)籠罩住，待花絨寄甲羽化遷飛后將誘木集中并燒毀。（3）直接在松林中釋放花斑花絨寄甲卵塊或成蟲(chóng)防治——在松褐天牛種群數(shù)量較低的林分，每畝松林選擇松樹(shù)枯死木或有松褐天牛危害的松樹(shù)4株至5株，作為直接釋放花斑花絨寄甲卵或成蟲(chóng)的受體，釋放量為卵2000粒／株或成蟲(chóng)10對(duì)／株。放蜂時(shí)，根據(jù)平均每玻管含蜂量推算每個(gè)放蜂點(diǎn)放置蜂管數(shù)量，將蜂管棉塞打開(kāi)后，蜂管平攤在靠近若干株松樹(shù)的地表中央，讓蜂自行在林間擴(kuò)散尋找寄主。放蜂時(shí)，在樹(shù)干上斜插一根大頭針，將蜂管棉塞打開(kāi)后，蜂管倒插在大頭針上，管底略高于管口，以防止雨水浸入。或在松褐天牛幼齡幼蟲(chóng)期，對(duì)樹(shù)干噴灑16％喹硫磷2．化學(xué)藥劑防治適用范圍：所有松材線(xiàn)蟲(chóng)病發(fā)生區(qū)。施藥量（毫升）大致與誘木樹(shù)干基部直徑（厘米）樹(shù)相當(dāng)。（三）松褐天牛防治1．設(shè)置誘木防治適用范圍：采用疫木清理措施的松林。4．伐樁處理病死木砍伐后伐樁可選擇如下方法之一進(jìn)行除害處理：——伐樁全部連根挖出后集中除害處理。在松褐天牛成蟲(chóng)羽化前（松褐天牛一年一代的地區(qū)為10月至翌年4月；松褐天牛一年兩代的地區(qū)為7至8月和11月至翌年3月）由外向內(nèi)伐除包括病死松樹(shù)、疑似感病木、衰弱木、受壓木、風(fēng)折木、旱死木、雪壓木、當(dāng)年枯死或已經(jīng)萎蔫的側(cè)枝以及各種人為亂砍濫伐的松樹(shù)枝、干及伐樁等，所有伐除的松木及直徑超過(guò)1厘米的枝條均須作除害處理，并應(yīng)在松褐天牛成蟲(chóng)羽化前完成；在操作允許的條件下，伐樁高度不得超過(guò)5厘米。作業(yè)要求：防治作業(yè)區(qū)以實(shí)際發(fā)生林份邊緣為基準(zhǔn)，向外至少延伸100米。3．防治作業(yè)區(qū)以實(shí)際發(fā)生林份邊緣為基準(zhǔn)，向外延伸一定范圍作為緩沖區(qū)。2．各縣級(jí)疫情發(fā)生區(qū)根據(jù)本?。▍^(qū)、市）松材線(xiàn)蟲(chóng)病防治預(yù)案，結(jié)合本地松材線(xiàn)蟲(chóng)病傳播規(guī)律、發(fā)生區(qū)的地理位置、林分用途、發(fā)生面積、危害程度等因素，以縣級(jí)行政區(qū)為單位，進(jìn)行防治作業(yè)設(shè)計(jì)。（四）疫情撤銷(xiāo)1．當(dāng)疫情發(fā)生區(qū)通過(guò)有效手段根除疫情后，由國(guó)家林業(yè)局以公告或新聞發(fā)布會(huì)等形式宣布該地解除疫情。實(shí)行定期除治（集中在秋季普查后至翌年松褐天牛羽化前開(kāi)展疫木除治）的，每月報(bào)送一次；實(shí)行常年除治的，每季度報(bào)送一次。二、疫情報(bào)告、公布與撤銷(xiāo)（一）疫情確認(rèn)1．新發(fā)現(xiàn)疫情的省（區(qū)、市），疫情鑒定以國(guó)家林業(yè)局全國(guó)危險(xiǎn)性林業(yè)有害生物檢驗(yàn)鑒定技術(shù)培訓(xùn)中心或國(guó)家林業(yè)局林業(yè)有害生物檢驗(yàn)鑒定中心鑒定結(jié)論為準(zhǔn)，由國(guó)家林業(yè)局最后確認(rèn)。在封片蠟圈上放置蓋玻片，轉(zhuǎn)移至控溫電熱平板上，保持75℃使蠟完全融化，取下并自然冷卻后用透明指甲油加封一次。吸去上部清水并保留底部3－4毫升線(xiàn)蟲(chóng)液，置于53℃熱水中15 分鐘殺死線(xiàn)蟲(chóng)，待冷卻后，加入等體積的TAF液固定48小時(shí)以上。用細(xì)針挑取，或用毛細(xì)滴管吸取線(xiàn)蟲(chóng)置于載玻片的水滴中，并使之沉底。無(wú)菌條件下將多毛孢或鐮刀孢或灰葡萄孢接種在PDA平板上，置于25℃－28℃恒溫培養(yǎng)4－5天，菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)平板時(shí)接種線(xiàn)蟲(chóng)。將分離液體收集到試管或燒杯中，通過(guò)自然沉淀或離心后進(jìn)行鏡檢。若需長(zhǎng)期保存，要經(jīng)常在樣品上噴水（一般在半個(gè)月至1個(gè)月內(nèi)完成分離鑒定）。———抽取樣品要及時(shí)并重點(diǎn)抽取尚未完全枯死或剛枯死的優(yōu)勢(shì)木（針葉呈黃綠或黃褐色，尚未完全枯萎，樹(shù)皮尚未脫落，材質(zhì)尚未腐朽）。（4）取樣時(shí)應(yīng)考慮以下因素：——松材線(xiàn)蟲(chóng)病發(fā)病高峰期一般在9－10月，從表現(xiàn)出針葉變黃、樹(shù)脂分泌減少甚至停止至死亡約1個(gè)月至1個(gè)半月。如外部表現(xiàn)癥狀明顯的可在胸高處取樣。（4）航空遙感監(jiān)測(cè)對(duì)地面不易調(diào)查的高山密林地區(qū)，采用航空遙感技術(shù)進(jìn)行監(jiān)測(cè)，發(fā)現(xiàn)枯死樹(shù)后，再根據(jù)全球定位系統(tǒng)指示位置開(kāi)展實(shí)地調(diào)查。禁止在疫情發(fā)生林分邊緣使用，防止疫情向外擴(kuò)散蔓延。（2）誘捕器監(jiān)測(cè)于松褐天牛羽化期在林間設(shè)置誘捕器誘捕松褐天?；铙w進(jìn)行監(jiān)測(cè)。3．其他輔助監(jiān)測(cè)技術(shù)（1）打孔流脂監(jiān)測(cè)在松材線(xiàn)蟲(chóng)病發(fā)生區(qū)或其邊緣，選擇外觀(guān)正常、針葉無(wú)明顯變色的松樹(shù)，用直徑1厘米－（孔位盡量選擇垂直位置），觀(guān)察打孔后松脂流出情況，初步判別健康樹(shù)和疑似罹病樹(shù)。（2）詳查。重點(diǎn)區(qū)域每年普查工作至少2次，除在秋季開(kāi)展普查外，在春季還應(yīng)開(kāi)展疫情普查工作。2．普查內(nèi)容（1）疫情發(fā)生區(qū)查清發(fā)生分布范圍、發(fā)生面積（以小班面積為準(zhǔn)，孤立松林以實(shí)際面積統(tǒng)計(jì)）和病死樹(shù)數(shù)量，繪制發(fā)生分布圖表（省級(jí)到縣級(jí)、縣級(jí)到小班），計(jì)算病死樹(shù)株率和經(jīng)濟(jì)損失，掌握疫情發(fā)生情況，為制定年度防治計(jì)劃提供依據(jù)。松材線(xiàn)蟲(chóng)病防治技術(shù)方案（修訂版）此件為國(guó)家林業(yè)局關(guān)于印發(fā)《松材線(xiàn)蟲(chóng)病防治技術(shù)方案（修訂版）》的通知》（林造發(fā)[2010]35號(hào)）的附件，請(qǐng)結(jié)合當(dāng)?shù)貙?shí)際貫徹落實(shí)。重點(diǎn)是與疫區(qū)毗鄰地帶、交通沿線(xiàn)、港口、風(fēng)景區(qū)、松木制品生產(chǎn)和使用單位、建筑工地、倉(cāng)庫(kù)、駐軍營(yíng)房、城鎮(zhèn)、木材集散地、移動(dòng)通訊站、電視發(fā)射臺(tái)、高壓線(xiàn)塔、電纜線(xiàn)路、光纜線(xiàn)路及高壓線(xiàn)路等地區(qū)附近的松林。在松褐天牛一年兩代的地區(qū)普查時(shí)間為9－10月份；松褐天牛一年一代的地區(qū)普查時(shí)間為8－10月份。根據(jù)當(dāng)?shù)厮闪址植嫉奶攸c(diǎn)，設(shè)計(jì)出便于觀(guān)察全部林分的踏查路線(xiàn)；沿踏查路線(xiàn)用目測(cè)方法或借用望遠(yuǎn)鏡查找有無(wú)當(dāng)年枯死樹(shù)，或針葉褪色，或針葉黃化，或針葉枯萎，或針葉呈紅褐色等癥狀的松樹(shù)，選擇取樣對(duì)象。2．定點(diǎn)監(jiān)測(cè)在發(fā)生區(qū)邊緣地帶設(shè)置固定監(jiān)測(cè)點(diǎn)，定期調(diào)查，發(fā)現(xiàn)松樹(shù)枯死立即取樣分離鑒定，確定是否有松材線(xiàn)蟲(chóng)。要注意松樹(shù)樹(shù)種之間的流脂差異，馬尾松要較黑松表現(xiàn)遲緩。一旦發(fā)現(xiàn)松褐天牛攜帶松材線(xiàn)蟲(chóng)，則在誘捕點(diǎn)周?chē)?00米范圍內(nèi)對(duì)枯死松樹(shù)和瀕死松樹(shù)進(jìn)行取樣分離鑒定，確定疫情發(fā)生地點(diǎn)。具體技術(shù)操作規(guī)程參見(jiàn)附錄1。如僅部分枝條表現(xiàn)癥狀的，要在樹(shù)干上部和死亡的枝條上取樣。（3）取樣時(shí)應(yīng)排除人畜破壞、森林火災(zāi)、其他病蟲(chóng)害等原因造成的枯死樹(shù)。這種癥狀在混交林中表現(xiàn)尤其明顯。3．樣品的保存與處理取回的樣品應(yīng)及時(shí)分離鑒定，若需要保存可采取以下方法：將木片裝入塑料袋內(nèi)，扎緊袋口，在袋上扎幾個(gè)小孔（也可直接保存木段、圓盤(pán)），放入4℃冰箱。（四）分離鑒定1．線(xiàn)蟲(chóng)分離將取回的樣品在室內(nèi)采用貝爾曼漏斗法或淺盤(pán)法進(jìn)行線(xiàn)蟲(chóng)分離，分離時(shí)間一般需12小時(shí)以上。用盤(pán)多毛孢（Pestalotia spp.）或鐮刀孢（Fusarium spp.）或灰葡萄孢（Botrytis cinerea）培養(yǎng)線(xiàn)蟲(chóng)。3．玻片的制作（1）臨時(shí)水玻片的制作：在潔凈的載玻片中央滴一水滴，水滴的量以加蓋玻片后恰好充滿(mǎn)蓋玻片下的空間為好。（2）半永久玻片的制作：將分離所得的線(xiàn)蟲(chóng)液，轉(zhuǎn)移至離心管中，2000轉(zhuǎn)/分離心3分鐘。解剖鏡下挑取脫水后的目標(biāo)線(xiàn)蟲(chóng)于甘油中，使其沉底并位于甘油滴中心位置。所需儀器和試劑可與國(guó)家林業(yè)局危險(xiǎn)性林業(yè)有害生物檢驗(yàn)鑒定技術(shù)培訓(xùn)中心聯(lián)系。2．月報(bào)告：各省（區(qū)、市）森防機(jī)構(gòu)定期以電子郵件和書(shū)面形式同時(shí)向國(guó)家林業(yè)局森防總站報(bào)送松材線(xiàn)蟲(chóng)病除治工作進(jìn)展情況。（三）疫情公布國(guó)家林業(yè)局根據(jù)全國(guó)松材線(xiàn)蟲(chóng)病疫情調(diào)查結(jié)果，每年正式以公告或新聞發(fā)布會(huì)等形式公布松材線(xiàn)蟲(chóng)病疫情信息。三、防治措施（一）規(guī)劃設(shè)計(jì)1．各?。▍^(qū)、市）林業(yè)主管部門(mén)根據(jù)國(guó)家林業(yè)局的總體部署和本?。▍^(qū)、市）松材線(xiàn)蟲(chóng)病秋季普查結(jié)