《劉寶dna甲基化》ppt課件-全文預(yù)覽
【正文】 雙層濾紙上，加入 15mL蒸餾水浸種 24h；（第一天）? (2)實(shí)驗(yàn)方法v 5’氮胞苷處理水稻幼苗： 26℃ ，暗培養(yǎng) %mM3xDNA， 37%甲醛， 400ul硫代硫酸鈉（ 10mg/ml） )。37%甲醛 )，顯影液 ? 銀染固定 /終止液 5‘GATCATGAGTCCTGCT3’ adapter:10I? 酶切 連接試劑： EcoRI5180。GACTGCGTACCAATTCAA(T,(5180。buffer， ddH2O，v PCR引物? 預(yù)擴(kuò)增引物：H/M+0:C: v bufferSorbitol， 紫外分析儀 nipponbare)v 實(shí)驗(yàn)材料? 水稻：日本晴 …GGCC…5’HpaG…PCRCCACCGAACGGGGAC II酶切 +接頭ATCC酶切 +接頭 CCTG……提取基因組 DNAGG 不切割 不切割Msp還可以進(jìn)一步對(duì)差異條帶進(jìn)行切膠回收、克隆、測(cè)序，以便得知發(fā)生甲基化變化的胞嘧啶的具體位置。測(cè)序? 此外，還有單核苷酸法，甲基化接受力的檢測(cè)法，CpG島分離法和基因活性測(cè)量法，基因芯片法等 v MSAP? 用途：v 最常用的大規(guī)模檢測(cè)基因組甲基化變異水平和位點(diǎn)的手段? 原理：v 利用對(duì) DNA甲基化敏感性不同的同裂酶分別切割 DNA，產(chǎn)生不同的酶切產(chǎn)物，同時(shí)將酶切產(chǎn)物添加接頭，然后進(jìn)行 PCR擴(kuò)增、 PAGE電泳、銀染，產(chǎn)生可見(jiàn)的具有不同酶切型式的譜帶，即可得知 DNA甲基化信息。測(cè)序 重亞硫酸鈉 Polymorphism)? 胞嘧啶轉(zhuǎn)化為其它堿基，然后對(duì)比測(cè)序：v重亞硫酸鹽測(cè)序 (MSAP,vMet1， DNMT1v在完全沒(méi)有甲基化的 DNA上加上甲基。胞嘧啶甲基化過(guò)程圖 2vDNA甲基化的方式? 胞嘧啶甲基化? 腺嘌呤甲基化DAMX－染色體失活、轉(zhuǎn)基因沉默、核仁顯性和基因組印記等方面。劉寶 DNA甲基化的影響 龐勁松 表觀遺傳學(xué)創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)5’氮胞苷處理水稻幼苗對(duì)基因組 ? 表觀遺傳變異包括 :分子腺嘌呤堿基或胞嘧啶堿基上，進(jìn)行 DNA修飾的過(guò)程。在此位置兩條鏈的腺嘌呤 N6位置上同時(shí)甲基化，同時(shí) SAM轉(zhuǎn)變?yōu)镾AH(S腺苷高半胱氨酸 )在 DMT(DNA甲基轉(zhuǎn)移酶）的作用下， CpG（ CNG,CCGG）位點(diǎn)胞嘧啶 C5被甲基化 DNA甲基化作用圖 1圖 3methylation)vDNMT3a， DNMT3bmethylation)兩種胞嘧啶甲基化方式 DNA胞嘧啶甲基化檢測(cè)方法? 使用對(duì)胞嘧啶 5’甲基化狀態(tài)敏感的限制性內(nèi)切酶進(jìn)行酶切處理，然后檢測(cè)多態(tài)性：v甲基化敏感擴(kuò)增多態(tài)性 AmplificationGCmTATTII酶切產(chǎn)物沒(méi)有擴(kuò)增帶的，說(shuō)明此處的序列是 CCmGG；若都有擴(kuò)增帶，說(shuō)明此處是 CCGG。甲基化敏感酶對(duì)不同甲基化狀態(tài) DNA的切割結(jié)果GG CCmIHapGGTGGCTTGCCmGGACTAGG… CC(m)G C(m)C…3’3’重亞硫酸鹽測(cè)序原理5’氮胞苷處理對(duì)水稻 DNA甲基化的影響v 實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 使用不同濃度的 5’氮胞苷溶液，處理生長(zhǎng)早期的水稻幼苗，使其基因組 DNA胞嘧啶甲基化水平發(fā)生顯著的可遺傳改變，使用MSAP方法檢測(cè) DNA胞嘧啶甲基化水平的改變；水稻幼苗因DNA甲基化水平改變而影響基因表達(dá)水平
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1