【正文】 （ A）及胸腺嘧啶核苷（ T）的一種選擇性培養(yǎng)基。 B 淋巴細(xì)胞具有產(chǎn)生單一抗體的能力，但不能在體外增殖；骨髓瘤細(xì)胞是一種癌細(xì)胞，它能在體外培養(yǎng)條件下無限增殖，但不能產(chǎn)生抗體。誘導(dǎo)離體的植物組織形成具有生根發(fā)芽能力的胚狀結(jié)構(gòu)，包裹上人造種皮．制成人工種子可以解決有些作物品種繁殖能力差、結(jié)子困難或發(fā)芽率低等問題。當(dāng)細(xì)胞分裂素與生長素共同使用時(shí)，能強(qiáng)烈促進(jìn)愈傷組織的形成，而兩者不同的濃度配比在再分化過程中，分別對(duì)誘導(dǎo)根或芽的產(chǎn)生起關(guān)鍵作用。 3．表現(xiàn)全能性的基礎(chǔ)和條件 基礎(chǔ)： 生物體的每一個(gè)細(xì)胞都包含有該物種所特有的全套遺傳信息，都有發(fā)育成為完整個(gè)體所必需的全部基因，從理論上講，生物體的每一個(gè)活細(xì)胞都應(yīng)該具有全能性。原因是生物體的每一個(gè)細(xì)胞都要包含有該物種所特有的全套遺傳物質(zhì)。 即：在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中補(bǔ)充各種必需因子，如激素、生長因子 、結(jié)合蛋白 、貼壁和擴(kuò)展因子等。 ： 是將花粉從花藥中分離出來 ,接種到人工培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，以形成花粉胚或愈傷組織進(jìn)而分化成植株的過程。 19．細(xì)胞工程的技術(shù)手段包括 細(xì)胞融合 技術(shù)、 細(xì)胞拆合 技術(shù)、 染色體導(dǎo)入 技術(shù)、 基因轉(zhuǎn)移 技術(shù)、 細(xì)胞器移植 技術(shù)、 胚胎移植 技術(shù)、 細(xì)胞與組織培養(yǎng) 技術(shù)。 ， 骨髓瘤細(xì)胞還應(yīng)滿足兩個(gè)獨(dú)特的性質(zhì)： ①為了避免雜交瘤細(xì)胞分泌的抗體不純，骨髓瘤細(xì)胞系自身不能具有產(chǎn)生抗體的能力；②用于融合的骨髓瘤細(xì)胞體內(nèi)嘌呤核苷酸合成的補(bǔ)救途徑必須喪失，即磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶或嘧啶核苷酸激酶的活力喪失。（ √ ） 三、填空題： A、 B 兩種細(xì)胞人工融合成 C 細(xì)胞的過程中，常用 PEG(聚乙二醇 )(或滅活的病毒 ) 作為誘導(dǎo)劑。（ ） （ √ ） 5. 組織的形成是離體植物細(xì)胞愈傷脫分化的結(jié)果（ ） 11. 細(xì)胞工程操作主要對(duì)象是細(xì)胞（ √ ） 12．細(xì)胞工程研究 的目的是改變細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)或獲得細(xì)胞產(chǎn)品。 A、親緣關(guān)系遠(yuǎn) B、生殖隔離 C、地理隔離 D、組織分化 ： ( C ) A、去掉細(xì)胞壁 ,分離出有活力的原生質(zhì)體 B、將雜種細(xì)胞培育成植株 C、讓雜種植物按照人們的需 要表現(xiàn)出親代的優(yōu)良性 D、尚未培育出屬間雜種植物 ： ( D ) A、振動(dòng) B、電刺激、 C、 PEG 試劑、 D、重壓 ， 又可以分化形成根、芽等器官，這一過程稱為： ( C ) A、脫分化 B、去分化 C、再分化 D、脫分化或去分化 ，下列有可能使其表現(xiàn)出全能性，發(fā)育成完整的植株的是（ D ） A、細(xì)胞分裂素 B、生長素 C、一定的營養(yǎng)物質(zhì) D、以上三者均是 11 。其原因是 （ D ） A．在體外培養(yǎng)條件下 B 淋巴細(xì)胞可以無限 增殖 B．在動(dòng)物體內(nèi) B 淋巴細(xì)胞可產(chǎn)生多達(dá)百萬種以上的抗體 C．每一個(gè) B 淋巴細(xì)胞都參與特異性免疫反應(yīng) D．每一個(gè) B 淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體 ，下列敘述不正確的是（ D ） A、可以制成診斷盒．用于疾病的珍斷 B、可以與藥物結(jié)合，用于病變細(xì)胞的定向治療 C、可以利用基因工程技術(shù)生產(chǎn) D、可以在生物體內(nèi)生產(chǎn)，不能體外生產(chǎn) 8. 以下不屬于生長素的是 (D) A IAA B NAA C 2,4D D 6BA (D) A 細(xì)胞質(zhì) B 線粒體 C 內(nèi)質(zhì)網(wǎng) D 葉綠體 (B) A 原核細(xì)胞 B 動(dòng)物細(xì)胞 C 植物細(xì)胞 D 真核細(xì)胞 (A) A T 淋巴細(xì)胞 B B 淋巴細(xì)胞 C C 淋巴細(xì)胞 D G 淋巴細(xì)胞 DNA 的過程叫 (B) A 轉(zhuǎn)導(dǎo) B 轉(zhuǎn)化 C 轉(zhuǎn)移 D 轉(zhuǎn)入 (C) A 牛 B 人 C 羊 D 雞 (A) A 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基 B 植物細(xì)胞培養(yǎng)基 C 愈傷組織培養(yǎng)基 D 微生物培養(yǎng)基 (D) A 干擾素 B 單克隆抗體 C 病毒疫苗 D 人工胚乳 (B) A 對(duì)稱分裂 B 無限增殖 C 緩慢性 D 自穩(wěn)性 ，除了 (B) A 貼壁依賴型 B 瓶底依賴型 C 兼性貼壁細(xì)胞 D 懸浮型 10 （ A ） A 產(chǎn)生新的細(xì)胞壁 B 細(xì)胞質(zhì)發(fā)生融合 C 細(xì)胞膜 發(fā)生融合 D 細(xì)胞核發(fā)生融合 ，需要下列哪項(xiàng)步驟（ A ） A 分離原生質(zhì)體 誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合 組織培養(yǎng) 得到雜種植株 B 分離原生質(zhì)體 原生質(zhì)體融合 雜種植株 C 獲取細(xì)胞 原生質(zhì)融合 組織培養(yǎng) 雜種植株 D 獲取細(xì)胞 原生質(zhì)直接融合 組織培養(yǎng) C ） A 去掉細(xì)胞壁，分離出有活力的原生質(zhì)體 B 將雜種細(xì)胞培育成植株 C 讓雜種細(xì)胞按照人們的需求表現(xiàn)出親代 的優(yōu)良性狀 D 尚未培育出屬間雜種植物 ： ( A ) A．培養(yǎng)基不同； B．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)不需要在無菌條件下進(jìn)行； C．動(dòng)物細(xì)胞可以傳代培養(yǎng)，而植物細(xì)胞不能； D．動(dòng)物細(xì)胞能夠大量培養(yǎng)，而植物細(xì)胞只能培養(yǎng)成植株。 ？ 1）相同點(diǎn)： 都是由能夠編碼蛋白質(zhì)的編碼區(qū)和具有調(diào)控作用的非編碼區(qū)組成。 缺點(diǎn)：在通常情況下，細(xì)菌的 RNA 聚合酶不能識(shí)別真核的啟動(dòng)子；許多真核基因的蛋白質(zhì)產(chǎn)物需要經(jīng)過翻譯后的加工修飾，如正確的折疊和組裝，而細(xì)菌中通常并沒有這樣的修飾機(jī)制，從而可能導(dǎo)致真核基因在大腸桿菌中的翻譯產(chǎn)物無法產(chǎn)生有活性的蛋白；外源真核基因所表 達(dá)的蛋白質(zhì)分子往往能夠被細(xì)菌的蛋白酶識(shí)別，并被當(dāng)做“異已分子”降解掉。通過比較可初步判斷重組子中是否插入外源基因片段。 7 ？ 根據(jù)插入基因的遺傳性狀進(jìn)行篩選 只有當(dāng)已知需克隆基因所編碼蛋白質(zhì)的功能 , 且該蛋白質(zhì)又為細(xì)菌的生命活動(dòng)所必需時(shí) , 即可用該方法篩選。 （ 1） T4DNA 連接酶法 連接平末端 DNA 分子的方法有 2 種，一種是直接用 T4連接酶連接，另一種是先用末端核苷酸轉(zhuǎn)移酶給平末端 DNA 分子加上同聚物尾巴之后再用 DNA 連接酶進(jìn)行連接。若構(gòu)建表達(dá) DNA 重組體選用雙酶切切割目的基因和載體，可使目的基因與載體的連接發(fā)生定向連接重組 , 以便定向克隆。 ？ 目的基因片斷與載體由相同的單一限制性核酸內(nèi)切酶（如 EcoRI）消化酶切后 , 兩者的兩端均具有相同的粘性末端 , 稱為單酶切點(diǎn)的粘性末端 , 又稱全同源性粘性末端 ⑴ 高背景 載體經(jīng)單一限制性核酸內(nèi)切酶切割后 , 載體分子易于自我環(huán)化 , 既不利于目的基因的重組連接 , 大大降低陽性克隆效率 , 又可使非重組性載體造成高背景。 是在生物體外，通過對(duì) DNA 分子進(jìn)行人工“剪切” 和“拼接”，對(duì)生物的基因進(jìn)行改造和重新組合，然后導(dǎo)入受體細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行無性繁殖，使重組基因在受體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，產(chǎn)生出人類所需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品 (objective gene)：又叫靶基因 (target gene)，是指根據(jù)基因工程的目的 ,設(shè)計(jì)的所需要的某些 DNA 分子片段，它含有一種或幾種遺傳信息的全套密碼 (code) 11. 基因表達(dá) 基因表達(dá) (gene expression)是指細(xì)胞在生命過程中 ,把儲(chǔ)存在 DNA順序中遺傳信息經(jīng)過轉(zhuǎn)錄和翻譯 ,轉(zhuǎn)變成具有生物活性的蛋白質(zhì)分子 .生物體內(nèi)的各種功能蛋白質(zhì)和酶都是同相應(yīng)的結(jié)構(gòu)基因編碼的 . 12. 雙功能抗體 將識(shí)別效應(yīng)細(xì)胞的抗體和識(shí)別靶細(xì)胞的抗體聯(lián)結(jié)在一起 ,制成雙功能性抗體 ,稱為雙特異性抗體 .如由識(shí)別腫瘤抗原的抗體和識(shí)別細(xì)胞毒性免疫效應(yīng)細(xì)胞 ( CTL 細(xì)胞 , NK 細(xì) 胞 , LAK 細(xì)胞 )表面分子的抗體 ( CD3 抗體或 CD16 抗體 )制成的雙特異性抗體 ,有利于免疫效應(yīng)細(xì)胞發(fā)揮抗腫瘤作用 . 五 問答題 ，能否在原核細(xì)胞中表達(dá)？能，為什么？不能， 6 為什么？ 不能，因?yàn)樵思?xì)胞缺乏對(duì)真核基因中內(nèi)含子的剪接功能和轉(zhuǎn)錄后加工系統(tǒng)。 ： 指一類由人工構(gòu)建的具有兩種不同復(fù)制起點(diǎn)的選擇標(biāo)記，因而可在兩種不同宿主細(xì)胞中存活和復(fù)制的質(zhì)粒載體。 四、 名詞解釋 某些限制性內(nèi)切酶識(shí)別的堿基順序不同，但酶切后產(chǎn)生同樣粘性末端的兩種酶 （ C0S）質(zhì)粒 帶有λ噬菌體的 COS 位點(diǎn)和整 個(gè) pBR322的 DNA 順序的大腸桿菌質(zhì)粒。 利用 PCR 技術(shù)擴(kuò)增目的基因 ① 概念： PCR 全稱為 _____聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) __________，是一項(xiàng) 在生物 __體外 __復(fù)制 ____特定 DNA 片段 ___的核酸合成技術(shù) 5 ②原理： __ DNA 復(fù)制 ________ ③條件： _____已知基因的核苷酸序 列 ___四種脫氧核苷酸 ___一對(duì)引物 ______、 _____ DNA 聚合酶 ： ④方式：以 _指數(shù) ____方式擴(kuò)增，即 __ 2n__（ n 為擴(kuò)增循 環(huán)的次數(shù)） ⑤結(jié)果使目的基因的片段在短時(shí)間內(nèi)成百萬倍地?cái)U(kuò)增 11． PCR 技術(shù)擴(kuò)增過程 a、 DNA 變性（ 90℃ 95℃）：雙鏈 DNA 模板 在熱作用下， 氫鍵 斷裂，形成 ____單鏈 DNA b、復(fù)性（ 55℃ 60℃）：系統(tǒng)溫度降低，引物 與 DNA 模板結(jié)合，形成局部 __雙鏈 ______。 末 端核苷酸轉(zhuǎn)移酶加同聚物尾巴后 ， 再用 DNA 連接酶進(jìn)行連接；化學(xué)合成銜接物后連接 DNA 分子。 理想的質(zhì)?？寺≥d體應(yīng)具備以下基本條件，如 能自主復(fù)制 、一種或多種限制酶的酶切位點(diǎn) 、 篩選標(biāo)記 、 分子量小易拷貝 。（ √ ） 3．基因的“剪刀”是限制性內(nèi)切酶（ √ ） 4．基因的“針線” 是 DNA 連接酶（ √ ） 5．基因的“運(yùn)輸工具” 是載體（ √ ） 6．基因的“剪刀”是 DNA 連接酶（ ） 7．基因的“針線” 是限制性內(nèi)切酶（ ） 8．將目的基因與載體連接過程是由限制性內(nèi)切酶來完成。（ ） 入噬菌體的插入型載體只有一個(gè)單一限制酶切點(diǎn)，替換型載體有 2 個(gè)成對(duì)的限制性酶切點(diǎn)。 P 9. 載體的功能是 (I 運(yùn)送外源基因高效進(jìn)入受體細(xì)胞 II 為外 源基因提供復(fù)制能力 III 為外源基因提供整合能力 ) （ D） A. I B. I + III C. II + III D. I + II + III (I 增殖外源基因拷貝 II 表達(dá)標(biāo)記基因 III 表達(dá)外源基因 ) （ D） A. I + II B. I + III C. II + III D. I + II + III 2 11. 下列各組用于外源基因表達(dá)的受體細(xì)胞及其特點(diǎn)的對(duì)應(yīng)關(guān)系中，錯(cuò)誤的是（ C） A. 大腸桿菌－繁殖迅速 B. 枯草桿菌－分泌 機(jī)制健全 C. 鏈霉菌－遺傳穩(wěn)定 D. 酵母菌－表達(dá)產(chǎn)物具有真核性 （ cosmid）是一種（ B） A. 天然質(zhì)粒載體 B. 由λ DNA 的 cos 區(qū)與一質(zhì)粒重組而成的載體 C. 具有溶原性質(zhì)的載體 D. 能在受體細(xì)胞內(nèi)復(fù)制并包裝的載體 13. 某一重組 DNA （ kb ） 的載體部分有兩個(gè) SmaI 酶切位點(diǎn)。 P C. 339。 末端 4 堿基突出的載體質(zhì)粒上，又必須保證連接區(qū)域的堿基對(duì)數(shù)目既不增加也不減少，則需用的工具酶是（ D） I T 4 DNA 聚合酶 II Klenow III T 4 DNA 連接酶 IV 堿性磷酸單酯酶 A. III B. I + III C. II + III D. I + II + III ，錯(cuò)誤的是（ A） A. 連接反應(yīng)的最佳溫度為 37 ℃ B. 連接反應(yīng)緩沖體系的甘油濃度應(yīng)低于 10% C. 連接反應(yīng)緩沖體系的 ATP 濃度不能高于 1mM D. 連接酶通常應(yīng)過量 25 倍 8. T 4 DNA 連接酶是通過形成磷酸二酯鍵將兩段 DNA 片段連接在一起，其底物的關(guān)鍵基團(tuán)是（ D） A. 239。 末端 4 堿基突出的外源 DNA 片段插入到含有 339。 OH 和 339。 OH 和 339。 （ ） ，在瓊脂糖電泳出現(xiàn)一條帶時(shí)說明質(zhì)粒提取純度高，當(dāng)為三條帶時(shí)為純度不高。（ X ） 1．基因工程可改變生物或其分子的遺傳物質(zhì)（ √ ） 2．通過限制性核酸內(nèi)切酶和 DNA 連接酶等作用，在體外將不同來源的 DNA 片斷重新組合成新的