《dna操作技術(shù)》ppt課件-全文預覽
【正文】 別順序中的第三位腺嘌呤上，從而使免受切割。GATC339。 polynucleotide kinase: 來自于 T4侵染的大腸桿菌，在 5’端增加磷酸基團。 E. coli DNA連接酶 –連接粘性末端（主要用于 cDNA第二鏈的合成） T4RNA連接酶 聚合酶 依賴 DNA的 DNA聚合酶 不依賴 DNA的 DNA聚合酶（末端轉(zhuǎn)移酶） 依賴 RNA的 DNA聚合酶（反轉(zhuǎn)錄酶） 依賴 DNA的 RNA聚合酶 不依賴 DNA的 RNA聚合酶 聚合酶 DNA聚合酶 I –5’3’聚合酶活性 –3’5’外切酶活性 –5’3’外切酶活性 –核酸內(nèi)切酶活性 可以被枯草桿菌蛋白酶水解成：Klenow片段和 N端具 5’3’外切酶活性的分子。 核酸酶 RNase H（ E. coli） –降解 RNA:DNA雜交分子中的 RNA。 第四章 DNA操作技術(shù) 學習內(nèi)容： DNA操作酶 – 核酸酶 – 連接酶 – 聚合酶 – DNA修飾酶 限制性內(nèi)切酶 – 分類和命名 – 酶切體系、反應條件、結(jié)果鑒定 – 定位酶切位點 連接 1. DNA操作酶 核酸酶：剪切、縮短、降解核酸 – Bal31 – E. coli外切酶 III – S1 內(nèi)切酶 – DNase I – RNase H 連接酶：連接核酸分子 聚合酶：復制 修飾酶：增加或去除化學基團 拓撲異構(gòu)酶：引入或去除超螺旋的閉合環(huán)狀 DNA 核酸酶 作用：降解 磷酸二酯鍵 分為： 外切酶 內(nèi)切酶 核酸酶 Bal 31(來自于細菌 Alteromonas espejiana) 單鏈特異的核酸內(nèi)切酶活性，雙鏈特異的內(nèi)切酶活性。 ,Zn2+ 用途： 分析內(nèi)元的位置 獲得平端 dsDNA 酶量大時， 降解雙鏈 DNA 核酸酶 來自于牛胰腺的 DNase I既可以降解單鏈也可以降解雙鏈，沒有特異性，產(chǎn)生單核苷酸或短鏈。 連接酶 T4DNA連接酶 –連接粘性末端、平端 –修復雙鏈 DNA或 RNADNA雜交雙鏈上的缺口。 T7 DNA聚合酶 –測序酶 Taq DNA聚合酶 聚合酶 逆轉(zhuǎn)錄酶 ：將 mRNA轉(zhuǎn)錄成 cDNA –AMV逆轉(zhuǎn)錄酶（鳥類成髓細胞性白血病病毒） DNA聚合酶活性 RNase H活性 DNA內(nèi)切酶活性 核酸結(jié)合活性 –MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶（ Moloney鼠白血病病毒） DNA修飾酶 堿性磷酸酯酶 （來自于大腸桿菌或小牛腸道）可以去掉 DNA分子的 5‘端的磷酸基團。 DNA修飾酶 甲基化酶 : – 大腸桿菌中的甲基化酶 dam甲基化酶 在 539。的限制性內(nèi)切酶不能切割來自大腸桿菌的 DNA如 BclI（ TGATCA），但 BamHI（ GGATAA）則不會因為 N6A的甲基化而失去活性。 不同來源的 DNA具有不同的酶切位點以及不同的位點排列順序，因此各種生物的DNA均呈現(xiàn)特征性的限制性酶切圖譜。 1968年 Smith等人從流感嗜血桿菌株中分離出兩個類內(nèi)切酶， HindII和 HindIII，為基因工程技術(shù)的誕生奠定基礎 限制性內(nèi)切酶分類 限制性核酸內(nèi)切酶可分為三大類： – I類 –II類 * –III類 I 類限制性內(nèi)切酶 能識別專一的核苷酸順序，并在
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