【正文】 為： D=4 σ /P （ 2）水流量法：將濾膜以蒸餾水完全 潤濕，裝于濾器中，下接抽氣瓶。包括一定的強(qiáng)度和柔韌度，不易破裂，有良好的再生性能，便于多次重復(fù)使用。由于介質(zhì)一般為水，所以膜材料應(yīng)具有親水性，它只允許小分子溶質(zhì)通過。所得的沉淀物只具有相對(duì)純度而不具有絕對(duì)均一性。無壁效應(yīng)，適用于大量樣品的密度梯度及等密度梯度離心。 差分離心的特點(diǎn)、用途。 速度區(qū)帶離心的特點(diǎn)及其用 途：離心操作時(shí)將樣品液置于連續(xù)或不連續(xù)線形或非線形密度梯度液上，控制離心時(shí)間，使所需組分通過部分梯度液，形成的分離區(qū)帶在達(dá)到其等密度區(qū)之前即停止離心。結(jié)構(gòu)簡單，低速時(shí)加樣，高速時(shí)排出清夜。 （ 4）垂直管轉(zhuǎn)子：特殊類型的定角轉(zhuǎn)子。對(duì)流作用小，“壁效應(yīng)”弱。用符號(hào)“ g” 或 “ g” 表示。 親和錯(cuò)流過濾： (affinity cross flow filtration)ACFF 將親和層析與超濾技術(shù)結(jié)合，高分子底物經(jīng)專一可逆的親和反應(yīng)后，用膜進(jìn)行錯(cuò)流過濾，兼有親和層析與膜過濾的優(yōu)點(diǎn)。正洗脫：吸附提取物中的有效成分。 9 術(shù)語： 親和力：配基對(duì)互補(bǔ)分子間的作用力，是制備高效親和柱的重要參數(shù)。 親和膜分離原理及特點(diǎn)：親和膜利用親和配基修飾的微濾膜為親和吸附介質(zhì)親和純化目標(biāo)蛋白質(zhì)，是 固定床親和層析的變型。微環(huán)境的影響，包括載體及手臂的電性、極性、次級(jí)鍵對(duì)配基親和力的影響。為了將親和配體和其他物質(zhì)分開，在實(shí)際親和層析時(shí)，通常需要阻流值≥ 10。 由于酶的活性中心常是埋藏在其結(jié)構(gòu)的內(nèi)部，它們與介質(zhì)的空間障礙影響其與親和配基的結(jié)合作用。對(duì)設(shè)備要求不高，操作簡便，使用范圍廣，特異性強(qiáng)，分離速度快，分離效果好，分離條件溫和。 蛇籠樹脂：由丙烯酸或甲基丙烯酸在季胺型陰離子交換樹脂中聚合而成的一類樹脂。 大孔型強(qiáng)酸型離子交換樹脂 大孔型弱酸型離子交換樹脂 大孔型弱堿型離子交換樹脂 甲基磺酸纖維素 乙基磺酸纖維素 二乙基氨基乙基纖維素 芐基化的 DEAE 纖維素 術(shù)語： CMC：羧甲基纖維素。加上相同的第二個(gè)樣品，它將以洗脫液移動(dòng)的速度下降，直到追到正在慢移的第一個(gè)樣品成分處（聚焦）。堿性蛋白質(zhì)（等電點(diǎn)約 pH8）作為一個(gè)陽離子，用羧甲基纖維素層析可在 pH3.~ 進(jìn)行。 酸性蛋白質(zhì)（等電點(diǎn)約 pH5），作為一個(gè)陰離子，它的 DEAE纖維素柱層析可在 pH5。 離子交換纖維素為開放的長鏈骨架，大分子物質(zhì)能自由地在其中擴(kuò)散和交換，親水性強(qiáng)，表面積大，易吸附大分子；交換基團(tuán)稀疏，對(duì)分子的實(shí)際交換容量大；吸附力弱，交換和洗脫條件緩和，不易引起變性；分辨率強(qiáng)，能分離復(fù)雜的生物大分子混合物。 2孔徑大，不受環(huán)境條件的影響，動(dòng)力學(xué)性能好，抗污染能力強(qiáng)，交換速度快。 氫型樹脂：由于氨基酸的解離度低，被取代之氫離子為羧基所固定，使被吸附的氨基酸不能形成偶極，故與樹脂磺酸基沒有排斥力。 樹脂骨架：（ 1）苯乙烯型離子交換樹脂 （ 2）丙烯酸型陽離子交換樹脂 （ 3）多乙烯多胺 —— 環(huán)氧氯 丙烷樹脂 （ 4）聚乙烯砒啶系離子交換樹脂 （ 5）其他離子交換樹脂 蛇籠樹脂 選擇性離子交換樹脂 熱再生離子交換樹脂 離子交換的選擇性的因素：一、離子化合價(jià)與水合半徑的影響 二、離子化合價(jià)與離子濃度的影響 三 |、交換環(huán)境的影響 （ 1）溶液的 pH （ 2）離子強(qiáng)度 （ 3）有機(jī)溶劑 四、樹脂結(jié)構(gòu)的影響 （ 1）樹脂載體交聯(lián)度 （ 2）輔助力 （ 3）其他結(jié)合力 五、偶極離子排斥作用。 樹脂命名編號(hào)：強(qiáng)酸類 1~100號(hào)，弱酸類 101~200號(hào)，強(qiáng)堿類 201~300號(hào)，弱堿類 301~400號(hào)，中強(qiáng)酸 401~500。 第 8 章 離子交換 離子交換常用洗脫方法： 從樹脂上洗脫目的物的方法主要有兩種： （ 1） 調(diào)節(jié)洗脫液的 pH，使目的物粒子在此 pH 下失去電荷，甚至帶相反電荷，從 而喪失與原離子交換樹脂的結(jié)合力而被洗脫下來。類分離：分開樣品分子中分子量懸殊較大的兩類物質(zhì)，并不要求分離分子量相近的組分。以 Ve 作縱坐標(biāo)， lgM 作橫坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。 溶液在柱外產(chǎn)生的峰加寬：（ 1）連接管路（ 2）檢測池 利用凝膠層析測量蛋白質(zhì)的分子量。 （ 3）流動(dòng)相中傳質(zhì)阻力造成的色譜峰加寬。進(jìn)膠過程必須連續(xù)、均勻，不要中斷，并在不斷攪拌下使膠粒均勻沉降，使不發(fā)生凝膠分層和膠面傾斜。在裝柱時(shí)，連續(xù)攪拌下小心裝柱。對(duì)于類分離，柱床體積一般微樣品溶液體積的 5倍或略微多一些就夠了，柱比 5： 1 或 10： 1，對(duì)于分級(jí)分離，要求柱床體積大于樣品體積 25 倍以上，柱比在 25~100 之間。 常用凝膠的名稱、特點(diǎn)及用途。 Ve —— 淋出體積 Vo —— 粒尖體積 Vi —— 填料的孔體積 Kd—— 排阻系數(shù)或分配系數(shù) 凝膠層析原理：平衡排除理論 一個(gè)高聚物分子的流出體積是由在宏觀的流動(dòng)相和微觀的孔體積中的平衡分配系數(shù)所決定的。 6術(shù)語： 正吸附：吸附提取液中的有效成分。 白陶土： 活性物質(zhì)分離純化的吸附劑，也可作為助濾劑與去除熱原的吸附劑。 人造沸石： 人工合成的無機(jī)陽離子交換劑。 4兩種以上常用吸附劑的性質(zhì)，用途。 吸附劑用量及吸附劑濃度對(duì)于吸附效果的影響： 一般吸附物濃度大時(shí)，吸附量也大?；瘜W(xué)吸附的選擇性強(qiáng)，即一種吸附劑只對(duì)某種或特定幾種物質(zhì) 有吸附作用，只能形成單分子層吸附，吸附后較穩(wěn)定，不易解吸，平衡慢。 第六章 吸附法 化學(xué)吸附與物理吸附的區(qū)別： 當(dāng)吸附劑和吸附物之間作用力是通過分子間引力（范德華力）產(chǎn)生的吸附稱為物理吸附，最常見的一種吸附現(xiàn)象。 β鹽析：在一定離子強(qiáng)度下僅改變 pH和溫度進(jìn)行鹽析。應(yīng)用：胰島素純化時(shí)，在 pH8。經(jīng)驗(yàn)表明，攪拌速度愈快，晶體愈細(xì)。 二、中性鹽的親水性比蛋白質(zhì)大，鹽離子在水中發(fā)生水化而使蛋白質(zhì)脫去了水化膜，暴露出疏水區(qū)域，疏水區(qū)相互作用，使其沉淀。 反膠束萃?。罕砻婊钚詣┤苡诜菢O性溶劑中，并使其濃度超過臨界膠束濃度，在有機(jī)溶劑內(nèi)形成聚集體，其中表面活性劑的非極性基團(tuán)在外，與非極性的溶劑接觸，而極性基團(tuán)在外，形成極性核，從而能夠溶解極性物質(zhì)，進(jìn)行萃取。 破壞乳化劑的方法： （ 1）、加入表面活性劑 （ 2）離心 （ 3）加電解質(zhì) （ 4）加熱 （ 5）吸附法破乳 （ 6）高壓電破乳 （ 7）稀釋法 （ 8）其他途徑 ：超濾、反應(yīng)萃取、中性磷萃取、脂肪類萃取劑 影響乳化劑類型的因素有： （ 1）乳化和破乳化 （ 2） pH 的影響 （ 3）溫度和萃取時(shí)間的影響 （ 4）鹽析作用的影響 （ 5）溶劑種類、用量及萃取方式的選擇 影響雙水相萃取的因素： （ 1）成相高聚物的分子量 （ 2）成相高聚物濃度 —— 界面張力 （ 3）電化學(xué)分配 —— 鹽類的影響 （ 4）疏水效應(yīng) （ 5）溫度及其他因素 影響超臨界流體萃取的因素：（ 1）壓力的影響 （ 2）溫度的影響 （ 3）助溶劑 （ 4）物料性質(zhì)的影響 8 術(shù)語 雙水相萃?。翰煌母叻肿尤芤合嗷セ旌峡僧a(chǎn)生兩相或多相系統(tǒng)，利用物質(zhì)在互不相溶的兩水相分配系數(shù)的差異來進(jìn)行萃取的方法。 乳化劑能使乳化液穩(wěn)定：（ 1）、界面膜形成表面活性劑分子聚集在界面上，形成緊密吸附層，在分散相表面形成保護(hù)層。另外，抗生素在不同 pH 條件下，可以有不同的化學(xué)狀態(tài)（如游離態(tài)酸、堿或成鹽），其分配系數(shù)亦有差別，若適度改變 pH，可將抗生素自有機(jī)相再轉(zhuǎn)入水相，這樣反復(fù)萃取，可以達(dá)到濃縮和提純的目的。 絮凝作用：（ flocculation）是指在膠體懸浮液中加入絮凝劑后，膠?？蓮?qiáng)烈吸附在絮凝劑表面的功能團(tuán)上，而且一個(gè)高分子聚合物的許多鏈節(jié)分別吸附在不同顆粒的表面上，產(chǎn)生架橋聯(lián)接，形成粗大的絮凝團(tuán)沉淀的過程。當(dāng)超聲波在液體中傳播時(shí)，液體中的某一小區(qū)域交替重復(fù)地產(chǎn)生巨大的壓力和拉力。 蛋白質(zhì)工程：在基因 水平上設(shè)計(jì)表達(dá)新功能蛋白。純培養(yǎng)最重要的是在于微生物的生理研究，方法是依靠滅菌和分離，是由巴斯德（ L． Pasteur）和柯赫（ R． Koch）建立起來的。中試放大的方法有經(jīng)驗(yàn)放大法，相似放大法和數(shù)學(xué)模型放大法。 （ 3） 哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)：中國倉鼠卵巢細(xì)胞（ CHO）和猴腎細(xì)胞（ COS）優(yōu)點(diǎn)是能識(shí)別和剪切外源基因的內(nèi)含子并加工成為成熟的 m ，成本高，研究與生產(chǎn)周期長。目前使用最廣泛、最成功的表達(dá)系統(tǒng)。 6 DNA 重組體有主要有哪幾種表達(dá)系統(tǒng)？各有什么特點(diǎn)？ 基因工程包括轉(zhuǎn)錄、翻譯及翻譯后加工等過程。一般把菌株的生活力、產(chǎn)孢子能力的衰退和特殊產(chǎn)物產(chǎn)量的下降統(tǒng)稱 為退化。 第二章生物制藥工藝學(xué)技術(shù)基礎(chǔ) 生物活性物質(zhì) 的濃縮與干燥的方法： 生物活性物質(zhì)的濃縮：（ 1）鹽析濃縮 （ 2）有機(jī)溶劑沉淀濃縮 （ 3）用葡聚糖凝膠（ Sephadex）濃縮 （ 4）用聚乙二醇（ PEG）濃縮 （ 5）超濾濃縮 （ 6）真空減壓濃縮與薄膜濃縮 生物活性物質(zhì)的干燥：（ 1）減壓干燥 （ 2）噴霧干燥 （ 3）冷凍干燥 2 簡述生物活性物質(zhì)分離純化的主要原理： 根據(jù)混合物中的不同組分分配率的差別，把它們分配于可用機(jī)械方法分離的兩個(gè)或幾個(gè)物相中，或者將混合物置于某一相中，外加一定作用力，使多組分分配于不同區(qū)域，從而達(dá)到分離的目的。 基因藥物：以基因物質(zhì)（ RNA 和 DNA 及其衍生物）作為治療的物質(zhì)基礎(chǔ)，包括基因治療用的重組目的 DNA片段、重組疫苗、反義藥物和核酸等。 藥品根據(jù)其來源可分兩大類：天然藥物即植物藥、動(dòng)物藥和礦物藥；合成藥包括化學(xué)合成藥與微生物合成藥。（ 3）造血系統(tǒng)生長因子類：粒細(xì)胞集落刺 激因子（ GCSF）、巨噬細(xì)胞集落刺激因子（ MCSF）、巨噬細(xì)胞粒細(xì)胞集落刺激因子（ GMCSF）、促紅細(xì)胞生成素（ EPO）、促血小板生成素（ TPO） 干細(xì)胞生長因子（ SCF）（ 4）生長因子類：胰島素樣生長因子（ IGF）、表皮生長因子（ EGF）、血小板衍生生長因子（ PDFD）、轉(zhuǎn)化生長因子（ TGFα 和 TGF β）、神經(jīng)生長因子 及各種神經(jīng)營養(yǎng)因子。（ 2）生物活性物質(zhì)組成結(jié)構(gòu)復(fù)雜、穩(wěn)定性差。 生物藥物的作用特點(diǎn)：藥理學(xué)特性：（ 1）藥理活性高 （ 2）治療的針對(duì)性強(qiáng)，治療的生理、生化機(jī)制合理， 療效可靠。 DNA 重組藥物和基因藥物的區(qū)別： DNA 重組藥物即應(yīng)用重組 DNA 技術(shù)（包括基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)）制造的重組多肽、蛋白質(zhì)類藥物和疫苗、單克隆抗體與細(xì)胞因子等； 基因藥物即以基因物質(zhì)（ DNA 或 RNA）為基礎(chǔ)，研究而成的基因治療劑、基因疫苗、反義藥物和核酶等。 理化特性：（ 1）生物材料中的有效物質(zhì)含量低，雜質(zhì)種類多且含量相對(duì)較高。 3． DNA 重組藥物有：（ 1）細(xì)胞因子干擾素類：α 干擾素、β 干擾素、γ 干擾素（ 2）細(xì)胞因子白介素類和腫瘤壞死因子：白介素 2（ IL2）和突變型白介素 2（ Ser125IL2）腫瘤壞死因子類主要有 TNFα和TNFα受體。 藥品：是指用于預(yù)防、治療、診斷人體疾病，有目的地調(diào)節(jié)人體生理功能并規(guī)定有適應(yīng)證或者功能主治、用法和用量的物質(zhì)，包括中藥材、中藥飲片、中成藥、化學(xué)原料藥及其制劑、抗 生素、生化藥品、放射性藥品、血清、疫苗、血液制品和診斷藥品等。 DNA 重組藥物：即應(yīng)用重組 DNA 技術(shù)（包 括基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)）制造的重組多肽、蛋白質(zhì)類藥物和疫苗、單克隆抗體與細(xì)胞因子等。 核酸疫苗：將編碼某種抗原蛋白的外源基因（ DNA 或 RNA）直接導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)，并通過宿主細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)合成抗原蛋白質(zhì)，誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生對(duì)該抗原蛋白質(zhì)的免疫應(yīng)答以達(dá)到防病治病的目的。 菌種的退化意味著隨時(shí)間的推移菌種的一個(gè)或多個(gè)特性逐步減退或消失，最終導(dǎo)致營養(yǎng)細(xì)胞的死亡。常見的基因載體有：鏈霉菌質(zhì)粒、芽孢桿菌載體、質(zhì)粒、噬菌體（ phage）、黏粒 (cosmid)、病毒載體等。 （ 1） 大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)：遺傳背景比較清楚 ，使用安全、技術(shù)操作簡便，繁殖力強(qiáng)（ 20~30min 即可繁殖一代），便于大規(guī)模培養(yǎng)，成本較低，表達(dá)水平較高（可達(dá)總蛋白的 5%~6%），下游技術(shù)成熟、易于控制。③ 培養(yǎng)成本低； ④ 適用高密度發(fā)酵； ⑤ 雜蛋白少，產(chǎn)物易 純化。這些研究工作都是圍繞著如何提高收率，改進(jìn)操作，提高質(zhì)量，形成批量生產(chǎn)等方面進(jìn)行。所有微生物、植物和動(dòng)物都可以進(jìn)行這種培養(yǎng)，高等植物或動(dòng)物的無菌培養(yǎng) （無菌飼養(yǎng)）也可說是一種純培養(yǎng)。誘變育種主要包括出發(fā)菌株的選擇、誘變處理和篩選突變株 3個(gè)部分。 4細(xì)胞破碎： 方法 原理 特點(diǎn) 機(jī)械法 勻漿法 基于液相的剪切力 適用面廣，處理量大，速度快，工業(yè)廣泛使用，不適用某些高度分支微生物，產(chǎn)熱大，可能會(huì)生物活性物質(zhì)失活 珠磨法 研磨作用破碎 適用面廣，處理量大，工業(yè)廣泛使用，產(chǎn)熱大，可能會(huì)生物活性物質(zhì)失活 超聲波 超聲波的空穴作用破碎 產(chǎn)熱大，散熱不易，成本高，適用小量樣品破碎 物理