第十七章流式細胞儀分析技術(shù)及應用-全文預覽
【正文】 傳遞復合染料 PEcy5 488 紅 670 易 不敏感 減少交叉，成本高 常用的幾類熒光染料 用化學法將兩種不同激發(fā)波長的染料結(jié)合在一起，在 488nm激發(fā)光照射下，通過一個熒光染料被激發(fā)后產(chǎn)生的發(fā)射波長再激發(fā)另一熒光染料產(chǎn)生熒光信號，從而檢測到該特定熒光信號。 （四）流式細胞儀的多參數(shù)分析 Gate設(shè)置：指在某一張選定參數(shù)的直方圖上，根據(jù)該圖的細胞群分布選定其中想要分析的特定細胞群，并要求該樣本所有其他參數(shù)組合的直方圖只體現(xiàn)這群細胞的分布情況。 ? 等高圖上每一條連續(xù)曲線上具有相同的細胞相對或絕對數(shù)，即 “ 等高 ” 。 （二）分選的技術(shù)要求 ? 參數(shù)： FS,SS,FL ? 數(shù)據(jù)顯示方式 （單參數(shù)直方圖 、雙參數(shù)散點圖 、二維等高圖 、假三維等高圖 、三參數(shù)散點圖 ） ? 設(shè)門分析技術(shù) 第二節(jié) 數(shù)據(jù)的顯示與分析 FS：反映顆粒的大小 SS：反映顆粒的內(nèi)部結(jié)構(gòu)復雜程度 FL：反映顆粒被染上的熒光數(shù)量多少 一、 參數(shù) ? 單參數(shù)直方圖 ? 雙參數(shù)直方圖 :點圖 二維等高圖 假三維等高圖 ? 三參數(shù)直方圖 ? 多參數(shù)分析 直分析方圖 設(shè)門分析 :REGION和 GATE設(shè)置 二、數(shù)據(jù)顯示方式 由一維參數(shù) (散射光或熒光 )與顆粒計數(shù)(COUNT)構(gòu)成，反映同樣散射光或熒光強度的顆粒數(shù)量的多少。 ? 分選收獲率： 實際收獲的分選細胞與設(shè)定通過測量點的分選細胞之間的比率。 ? 線性放大器和對數(shù)放大器 三、熒光測量 熒光染料的特性 ?激發(fā)波長 (EXCITING) ?發(fā)射波長 (EMISSION) 熒光補償 通過流式細胞儀進行細胞分選主要是在對具有某種特征的細胞需進一步培養(yǎng)和研究時進行的。 此為血細胞分類的基本原理，但不能分析表面分子。 )向前方散射的訊號用于檢測細胞等粒子的表面屬性，信號強弱與細胞體積大小成正比 。 （ 1）液流系統(tǒng) 噴嘴 Fluorescence signals Focused laser beam 鞘液 液流系統(tǒng)示意圖 FCM的液流系統(tǒng)（如何形成單個細胞流） 樣本管 鞘液管 ? 激光光源：氣冷式氬離子激光器 ? 分色反光鏡：反射長 /短波長，通過短 /長波長 ? 光束成形器：兩十字交叉放置的透鏡 ? 透鏡組：形成平行光，除去室內(nèi)光 ? 濾片：長通、短通、帶通 ? 光電倍增管： FS, SS（散射光）， FL1, FL2, FL3, FL4（熒光） （ 2）光學系統(tǒng) Flow Tip Laser SS and FL Detector FS Detector 光學系統(tǒng)示意圖 主要由計算機及其軟件組成 （ 3）數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) 基本工作原理 單細胞液柱 已標記的單細胞懸液和鞘液 硅化管 流動室 噴嘴 熒光檢測系統(tǒng)和 散射光感受系統(tǒng) 收集光信號 熒光染料被激發(fā)發(fā)光 光電倍增管 脈沖信號 計算機系統(tǒng)分析結(jié)果 放大 垂直相交 形成穩(wěn)態(tài) 水平激光與之 基本過程 區(qū)別 流式細胞儀 顯微鏡 光源 激光 自然光、燈光 對象 細胞、生物粒子
教學課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1