【正文】 圖 ? 優(yōu)點(diǎn)是易得，用法簡(jiǎn)單，融合效果穩(wěn)定。 ?淋巴細(xì)胞雜交瘤和單克隆抗體的制備。 細(xì)胞融合研究進(jìn)展 生物種類 細(xì)胞來(lái)源 成功年代 煙草兩個(gè)種間 苷藍(lán) —— 青菜 大豆 —— 馬唐草 矮牽牛 —— 龍面花 大麥 —— 花生 大麥 —— 大豆 小麥 —— 矮牽牛 油菜 —— 大豆 玉米 —— 大豆 大豆 —— 野豌豆 大麥 —— 蠶豆 大豆 —— 草香木犀 酵母菌 —— 雞 大豆 —— 煙草 大豆 —— 秋水仙 人 —— 胡蘿卜 番茄 —— 馬鈴薯 人 —— 小鼠 葉 —— 葉 葉 —— 根 愈傷組織 —— 葉 葉 —— 花瓣 種子 —— 種子 葉 —— 懸浮細(xì)胞 葉 —— 花瓣 葉 —— 懸浮細(xì)胞 葉 —— 懸浮細(xì)胞 懸浮細(xì)胞 —— 懸浮細(xì)胞 葉 —— 根 懸浮細(xì)胞 —— 葉 原生質(zhì)體 —— 血紅細(xì)胞 懸浮細(xì)胞 —— 葉 懸浮細(xì)胞 —— 葉 腹水癌細(xì)胞 —— 原生質(zhì)體 葉 —— 根尖 纖維肉瘤細(xì)胞 —— 畸胎瘤細(xì)胞 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 幾種細(xì)胞融合成功的例子 植物融合細(xì)胞成長(zhǎng)狀態(tài)對(duì)比 ,右瓶為地面融合的細(xì)胞，左瓶中為太空微重力環(huán)境下融合的細(xì)胞 動(dòng)物細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)使用的小白鼠 動(dòng)植物細(xì)胞的融合過(guò)程 植物細(xì)胞融合過(guò)程 人造小鼠培育過(guò)程示意圖 細(xì)胞融合的意義 ?理論上說(shuō)任何細(xì)胞，都有可能通過(guò)體細(xì)胞雜交而成為新的生物資源。 ?1958年日本學(xué)者岡田（ Okada）發(fā)現(xiàn)仙臺(tái)病毒具有觸發(fā)動(dòng)物細(xì)胞融合的效應(yīng)。 的條件 pH 應(yīng)該加入哪些物質(zhì)？這些物質(zhì)如何調(diào)配？ 在使用合成培養(yǎng)基時(shí)通常需加入血清、血漿等天然成分，目的是什么？ ? 蛋白質(zhì)生物制品的生產(chǎn) 如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體 ? 健康細(xì)胞培養(yǎng) 培養(yǎng)健康細(xì)胞用于燒傷病人皮膚移植 ? 細(xì)胞的生理、藥理、病理研究 用于篩選抗癌藥物 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù) 條件要求 : 工藝方式 :分批 流加式 半連續(xù)式 連續(xù)式 培養(yǎng)技術(shù) : 懸浮培養(yǎng)技術(shù) 貼壁培養(yǎng)技術(shù) 微載體培養(yǎng)技術(shù) 多孔載體培養(yǎng)技術(shù) 微囊化培養(yǎng)技術(shù) 中空纖維細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù) 植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較 比較項(xiàng)目 植物組織培養(yǎng) 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) 原理 培養(yǎng)基性質(zhì) 培養(yǎng)基特有成分 培養(yǎng)結(jié)果 培養(yǎng)目的 細(xì)胞的全能性 細(xì)胞增殖 固體培養(yǎng)基 液體培養(yǎng)基 蔗糖 植物激素 葡萄糖 動(dòng)物血清 植物體 細(xì)胞株、細(xì)胞系 快速繁殖、培育無(wú)病毒植株 獲得細(xì)胞或細(xì)胞分泌蛋白 思考： 為什么選用動(dòng)物胚胎或幼齡個(gè)體的器官或組織做動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)材料？ 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液的主要成分是什么？較植物組培培養(yǎng)基有何獨(dú)特之處？ 為什么培養(yǎng)前要將組織細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞？ 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個(gè)體？ 主要成分：葡萄糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素和動(dòng)物血清等。 ? 吸取營(yíng)養(yǎng)液后的吸管不能再經(jīng)火焰燒灼 ,否則會(huì)燒焦形成炭膜 ,再用時(shí)會(huì)將有害物質(zhì)帶入培養(yǎng)液。 ?洗手 操作時(shí)因整個(gè)前臂伸入工作臺(tái)內(nèi)，所以洗手一定要刷洗到肘部，然后用 %新潔爾滅或 75%的酒精棉球擦拭。 ?洗刷消毒間： 烤箱、消毒鍋、蒸餾水處理器及酸缸等。 過(guò)濾裝置 ?各種培養(yǎng)用液只能用過(guò)濾的方法進(jìn)行除菌消毒處理。 CO2培養(yǎng)箱的優(yōu)點(diǎn)在于能恒定地供應(yīng)一定量的 CO2,一般 5%即可 維持培養(yǎng)液 PH值穩(wěn)定 。風(fēng)淋室的板壁采用輕質(zhì)隔熱夾芯鋼板，吹淋板采用進(jìn)口不銹鋼制作，吹淋口方向可調(diào)，風(fēng)淋時(shí)間可在 3099秒間的調(diào)整。 細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室 準(zhǔn)備室 風(fēng)淋 培養(yǎng)室 ?專用于組織細(xì)胞培養(yǎng)的空間，應(yīng)包括更衣間、緩沖間、操作間。因此在進(jìn)行培養(yǎng)中，保持細(xì)胞生存環(huán)境無(wú)污染、代謝物及時(shí)清除等，是維持細(xì)胞生存的基本條件。 ?PH調(diào)整液： NaHCO3溶液、 HEPES溶液 （ 二羥乙基哌嗪乙烷磺酸 ） ?細(xì)胞消化液 : 胰蛋白酶溶液． EDTA溶液．膠原酶溶液 ?抗生素溶液： 1)青、鏈霉素 :每毫升培養(yǎng)液含 100U青霉素和100ug鏈霉素 . 2)卡那霉素：終濃度為 50ug/ml培養(yǎng)液。血清對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)很有效，但后期對(duì)培養(yǎng)產(chǎn)物的分離、提純以及檢測(cè)造會(huì)成一定困難。水解乳蛋白是乳白蛋白的水解產(chǎn)物，呈蛋黃色粉末狀，富含氨基酸。蛋白質(zhì)主要是白蛋白和球蛋白。與合成培養(yǎng)基合用，能使細(xì)胞碩利增殖生長(zhǎng)。 ? 血清是天然培養(yǎng)基中最有效和最常用的培養(yǎng)成分。但與天然培養(yǎng)基相比，有些天然的未知成分尚無(wú)法用已知的化學(xué)成分所替代，因此，細(xì)胞培養(yǎng)中使用的基礎(chǔ)合成培養(yǎng)基還必須加入一定量的天然培養(yǎng)基成分，以克服合成培養(yǎng)基的不足。 ? 動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)基一般分為天然、合成、無(wú)血清培養(yǎng)基幾種，此外細(xì)胞培養(yǎng)還需要一些常用的溶液。氧氣參與三羧酸循環(huán)，產(chǎn)生供給細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的能量和合成細(xì)胞生長(zhǎng)所需用的各種成分。低溫下會(huì)使細(xì)胞代謝速率降低 2） PH： ?當(dāng) PH低于 6或高于 ，甚至死亡。 1） 恒定的溫度 :37 ℃ ， ? 維持培養(yǎng)細(xì)胞旺盛生長(zhǎng)，必須有恒定適宜的溫度。 ? 根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞種類要求不同培養(yǎng)瓶的形態(tài)各異，用于細(xì)胞傳代培養(yǎng)的細(xì)胞要求瓶壁厚簿均勻，便于細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)和觀察，瓶口要大小一致，口徑一般不小于 1cm，允許吸管伸入瓶?jī)?nèi)任何部位。對(duì)環(huán)境適應(yīng)性差，對(duì)環(huán)境敏感，包括：PH、溶解氧、溫度、剪切力等比微生物要求更高。 有關(guān)概念 細(xì)胞株： 傳代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至 10代左右細(xì)胞生長(zhǎng)停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡，少數(shù)細(xì)胞存活到 40~50代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞株。此后，在許多科學(xué)家的不懈努力下，動(dòng)物組織培養(yǎng)不斷改進(jìn)并逐漸發(fā)展成為動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。生物學(xué)家們就這個(gè)問(wèn)題展開了激烈的爭(zhēng)論。值得一提的是，這只小白鼠的背上，竟長(zhǎng)著一只幾乎與身子一般大小的 “ 人耳 ” 。除此之外 ， 這些有機(jī)酸還能提高低密度接種的細(xì)胞和原生質(zhì)體的生長(zhǎng) 。 植物細(xì)胞培養(yǎng)基的組成 植物生長(zhǎng)激素 大多數(shù)植物細(xì)胞培養(yǎng)基中都含有天然的或合成的植物生長(zhǎng)激素 。 無(wú)機(jī)鹽類 包括： 無(wú)機(jī)鹽濃度一般為多少 ？ 微量元素主要包括碘 、 硼 、 錳 、 鋅 、 鉬 、 銅 、 鈷 、鐵等 。 細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn) 紅豆杉與紫杉醇 人參皂甘的生產(chǎn) 植物細(xì)胞培養(yǎng)是指在離體條件下將愈傷組織或其他易分散的組織置于液體培養(yǎng)基中 ， 將組織振蕩分散成游離的懸浮細(xì)胞 ， 通過(guò)繼代培養(yǎng)使細(xì)胞增殖來(lái)獲得大量細(xì)胞群體的方法 。 二、植物組織培養(yǎng) 2. 植物組織培養(yǎng)過(guò)程 相關(guān)問(wèn)題 在植物組培過(guò)程中，為什么要進(jìn)行一系列的消毒，滅菌，并且要求無(wú)菌操作？ 為什么切取胡蘿卜根的形成層，其他部分也能培養(yǎng)成小植株嗎？ 植物體細(xì)胞雜交的概念 將不同種植物的體細(xì)胞，在一定條件下融合成雜種細(xì)胞，并把雜種細(xì)胞培育成新的植物體的技術(shù)。嚴(yán)格控制無(wú)菌條件，這是獲得培養(yǎng)成功的重要一步。 在生物的個(gè)體發(fā)育中，由于基因在特定時(shí)間和空間下選擇性地表達(dá)而形成不同器官，因此，要實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的全能性，首先必須使生物體的細(xì)胞處于離體狀態(tài)。第五章 細(xì) 胞 工 程 及其在食品工業(yè)中的應(yīng)用 細(xì)胞工程 (cell engineering)是以細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)為基礎(chǔ)理論，采用原生質(zhì)體、細(xì)胞或組織培養(yǎng)等試驗(yàn)方法或技術(shù)，在細(xì)胞水平上研究改造生物遺傳特性，以獲得具有新的性狀的細(xì)胞系或生物體以及生物的次生代謝產(chǎn)物，并發(fā)展有關(guān)理論和技術(shù)方法的學(xué)科。 細(xì)胞的全能性 當(dāng)植物細(xì)胞脫離了原來(lái)所在植物體的器官或組織而處于離體狀態(tài)時(shí)，在一定的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、激素和其他外界條件的作用下，就可能表現(xiàn)出全能性，發(fā)育成完整的植株。 ②用一定的化學(xué)藥劑，最常用的有次氯酸鈉，升汞和酒精等對(duì)外植體表面消毒，建立無(wú)菌培養(yǎng)體系。 再分化 脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)又可以重新分化成根或芽等器官，這一過(guò)程稱為植物細(xì)胞的再分化。 異想天開 植物細(xì)胞工程的實(shí)際應(yīng)用 ?繁殖植物的新途徑 ? 微型育種 ? 作物脫毒 ? 人工種子 ?育種新方法 ? 單倍體育種 ? 誘導(dǎo)突變體 ?細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn) 概念： 應(yīng)用組織培養(yǎng)技術(shù)，快速繁殖植