《酶分子修飾》ppt課件 (2)-全文預(yù)覽
【正文】 ：正突變頻率高，進(jìn)化速度快。 ? 注意：控制好基因突變頻率。 易錯 PCR：從酶的 單一基因 出發(fā)，在 改變反應(yīng)條件 的情況下進(jìn)行 聚合酶鏈反應(yīng) ，使擴(kuò)增得到的基因出現(xiàn)堿基配對錯誤，從而引起基因突變的技術(shù)過程。 定向進(jìn)化的原理 ? 以很低的比率向目的基因中 隨機(jī)引入突變 ，構(gòu)建突變庫，憑借 定向的選擇方法 ，選出所需性質(zhì)的優(yōu)化酶 (或蛋白質(zhì) )，從而排除其他突變體。 ? 共價鍵與副鍵 酶分子修飾的應(yīng)用 ? 理論研究 ? 醫(yī)學(xué)和工業(yè)應(yīng)用 ? 酶的作用機(jī)制研究 ? 親和標(biāo)記法和差示標(biāo)記法 ? 有機(jī)介質(zhì)酶催化反應(yīng)中的應(yīng)用 酶分子的修飾方法 ? 金屬離子置換修飾 ? 大分子結(jié)合修飾 ? 側(cè)鏈基團(tuán)修飾 ? 肽鏈有限水解修飾 ? 氨基酸置換修飾 ? 酶分子的物理修飾 氨基的修飾 羧基的修飾 巰基的修飾 精氨酸胍基的修飾 酪氨酸酚基的修飾 組氨酸咪唑基的修飾 色氨酸吲哚基的修飾 分子內(nèi)交聯(lián)修飾 酶的定向進(jìn)化 ? 定向進(jìn)化：模擬自然進(jìn)化的過程，進(jìn)行 人工隨機(jī)突變 ，并在特定的環(huán)境條件下進(jìn)行 選擇 ，使進(jìn)化朝著 人們所需方向 發(fā)展的技術(shù)過程。 2. 確定突變基因堿基序列 酶 RNA→ 互補(bǔ)原則 → DNA序列 酶蛋白 → 遺傳密碼 → mRNA →DNA 3. 獲得突變基因 寡核苷酸誘導(dǎo)的定位突變。 結(jié)果：酶活力保持不變，但酶對熱的穩(wěn)定性大大提高。 如：酪氨酸 RNA合成酶 ?反應(yīng)：催化酪氨酸與其對應(yīng)的 tRNA反應(yīng)生成酪氨酰 tRNA ?置換：將 51位的 蘇氨酸 換為 脯氨酸 ?結(jié)果：酶對 ATP的親和性提高近 100倍，酶活力提高 25倍。 3）主鏈切斷有利于酶活性中心的形成，使酶分子顯示其催化功能，使酶活力提高。 ? 主鏈的 切斷 修飾 1）主鏈的切斷引起酶活性中心的破壞，酶將喪失其活性。 ? 增強(qiáng)酶的穩(wěn)定性（熱穩(wěn)定性、體內(nèi)半衰期）。 概述 酶分子修飾的原因 ? 細(xì)胞外穩(wěn)定性差； ? 酶活性不夠高； ? 具有抗原性。 ?酶改性的技術(shù) ? 酶分子的修飾 ? 酶固定化 ? 酶的非水相催化 ? 酶的定向進(jìn)化 ? …… 酶分子修飾 通過各種方法使 酶分子的結(jié)構(gòu)發(fā)生某些改變 ，從而改變酶的某些特性和功能的技術(shù)過程稱為酶分子修飾。（ 70年代末之后） ? 提高酶的生物活性（酶活力）。 酶分子的修飾方法 ?
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