分子遺傳學(xué)8章基因操作技術(shù)及其應(yīng)用-全文預(yù)覽
【正文】 lⅡ 雙酶切 GCTT AAATCT AGAATTCGGATCTAT4 DNA連接酶 15186。 可感染大腸桿菌 。 進(jìn)入宿主細(xì)胞后不久 ， COS序列堿基配對環(huán)化 。 ? 插入載體 – 裂解途徑 DNA在宿主細(xì)胞中復(fù)制，然后包裝成噬菌體，裂解宿主，釋放噬菌體。 表達(dá)載體 (expression vector) 為使插入的外源 DNA序列可轉(zhuǎn)錄翻譯成多肽鏈而特意設(shè)計的載體稱為表達(dá)載體 。應(yīng)用于限制性片段多態(tài)性分析。因此可將不同種屬的 DNA重組。 限制酶（“基因剪刀”） 根據(jù)其來源命名。 (一 )、獲得目的基因的方法： (二 )、限制酶的發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用則是 DNA重組的關(guān)鍵 限制性內(nèi)切核酸酶 (restrictive endonucleases)，又稱限制酶。 重組 DNA操作一般步驟 ： （ 1） 直接從生物體中提取總 DNA， 構(gòu)建基因組 DNA文庫 ，從中釣取目的基因 。第八章 基因操作技術(shù)及其應(yīng)用 一、重組 DNA技術(shù) 二 、 PCR技術(shù) 三、基因文庫及分子雜交技術(shù) ??? 克隆 (clone)無性繁殖 ??? 分子克隆 –DNA的無性繁殖技術(shù) ??? 重組 DNA技術(shù)的重大突破帶動了現(xiàn)代生物技術(shù)的興起，并很快產(chǎn)生了許多生命科學(xué)的高技術(shù)產(chǎn)業(yè)二、重組DNA技術(shù)是基因工程的核心技術(shù) 一、重組 DNA技術(shù) 重組 DNA技術(shù)，又稱為基因克隆或分子克隆技術(shù)。 DNA克隆定義 （ 1）獲得目的基因； （ 2）與克隆載體連接，形成新的重組 DNA分子； （ 3）用重組 DNA分子轉(zhuǎn)化受體細(xì)胞，并能在受體細(xì)胞中復(fù)制和遺傳； （ 4）對轉(zhuǎn)化子篩選和鑒定； （ 5）對獲得外源基因的細(xì)胞或生物體通過培養(yǎng)，獲得所需的遺傳性狀或表達(dá)出所需要的產(chǎn)物。 （ 4） 直接化學(xué)合成 。是重組 DNA技術(shù)和基因診斷中重要的一類工具酶。（回文結(jié)構(gòu)） 如： Hare III 5’GGCC 3’ 3’CCGG 5’ Bam HI 5’GGATCC3` 3’CCTAGG5’ 平末端 (blunt end) 對稱軸切，連接效果差 切割形式 粘性末端（ sticky end）交錯切 切割形式 ? 不論 DNA的來源如何，同一種限制酶切割后產(chǎn)生的粘性末端容易重新連接。 ? Gene突變改變酶切位點的消失或新產(chǎn)生將改變酶切片段長度。 克隆載體 (cloning vector) 為使插入的外源 DNA序列被擴(kuò)增而特意設(shè)計的載體稱為克隆載體 ?？煽寺?23kb的外源 DNA。 λ噬菌體 DNA是線狀雙鏈 DNA分子 ， 全長約 50kb， 每條鏈各帶 12bp長的單鏈互補(bǔ)末端 粘末端 (COS序列 )。 改建后的粘粒含有 λ噬菌體的復(fù)制起點和cos末端 ， 全長 8kb。 4. 其他載體：大片段 DNA克隆載體 細(xì)菌人工染色體 (bacterial artificial chromosome, BAC) 約 300kb 噬菌體 PI人工染色體 （ PI artificial chromosome, PAC） 約 100kb 酵母人工染色體 (yeast arti
環(huán)評公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1