【正文】 ，三葉青提取物中乙酸乙酯溶部分對人肝癌細胞HepG2 活性具有較強的抑制作用正丁醇部分也有一定的作用，有力支持和驗證了以上研究結(jié)果。伍昭龍等同時開展了三葉青水煎液對 CCl4 致大鼠急性肝損傷的保護作用研究，研究結(jié)果表明，該中藥 除能降低肝損傷大鼠血清 ALT、 AST 及 MDA 水平外，還能降低 ALP (堿性磷酸酶 ) 水平； 而 SOD水平明顯升高。 本項目的研究旨在為擴大野生三葉青的資源，加速三葉青栽培和開發(fā)提供新技術(shù)；本研究還為開展該物種遺傳育種和保護 生物學(xué)等方面的研究提供了良好的試驗基礎(chǔ)，具有廣泛的應(yīng)用前景；利用快繁技術(shù)繁殖三葉青，可以 提高土地利用率開辟了新的途經(jīng)，對農(nóng)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整和貧困山區(qū)的經(jīng)濟發(fā)展 具 有重要的現(xiàn)實意義和長遠的歷史意義 ；還可以保持自然界生物多樣性向人們提供豐富的三葉青種質(zhì)資源，解決三葉青藥材來源匱乏的問題，滿足人民用藥需要，可實現(xiàn)可持續(xù)性發(fā)展。三葉青主要生長在蔭蔽度較高的山谷、灌叢林間等腐殖質(zhì)較高的地方，在陽光直射的地方偶有生長，但生長不良，其生長環(huán)境要求相對嚴格。在長江以南地區(qū)，即使在室外越冬，也可完全不用任何防寒措施，室內(nèi)盆栽則可在江北地區(qū)廣泛應(yīng)用。 另外，三 葉青可塑性強，三葉青是四季常綠的藤本植物，葉片細小、繁密、光亮，可根據(jù)環(huán)境和觀賞要求進行多樣化栽培和造型。用三葉青研制出的一種創(chuàng)新中藥，有抑制和清除乙肝病毒，調(diào)整機體免疫、保護肝細胞、阻斷肝纖維化等作用。劉東（ 1999）從其地上部分的石油醚萃取物中分離到 4 個化合物：蒲公英萜酮、蒲公英萜醇、β 谷甾醇和麥角甾醇?；絷浚?2020）在三葉青塊根乙醚提取物中共分離出 21 個化合物，檢測出 18 個組分，其中含量較高的是亞油酸、棕櫚酸、油酸、二苯胺、 亞麻酸甲酯和硬脂酸。研究藥用瀕危植物的栽培技術(shù)能正確處理自然資源利用 和經(jīng)濟發(fā)展之間的關(guān)系 ，是實現(xiàn)可持續(xù)性發(fā)展的重要途徑。而研究野生植物的馴化和生態(tài)栽培技術(shù)是維護生物多樣性、維持生態(tài)環(huán)境平衡、 挽救瀕于滅絕的植物 、保存野生植物種質(zhì)資源與開發(fā)利用的根本保證。 通過本項目建設(shè)，以公司為龍頭，聯(lián)結(jié)廣大農(nóng)戶，通過“公司 +基地 +農(nóng)戶”的模式發(fā)展優(yōu)質(zhì)三葉青產(chǎn)業(yè)，全面利用高新技術(shù)和新品種與人工栽培生產(chǎn)新工藝等，勞動生產(chǎn)效率和資源的有效利用明顯提高，從而進一步提高三葉青產(chǎn)品的附價值。 2．確定三葉青有效成分總黃酮提取工藝并建立快速檢測技術(shù)。 能周年生產(chǎn)三葉青，向人們提供豐富的三葉青藥材，滿足人民用藥需要，同時也為花卉市場提供插花材料和觀葉的盆花，豐富花卉市場的種類。經(jīng)過篩選的種質(zhì)進行組織培養(yǎng)擴繁，培育優(yōu)質(zhì)種苗。 一、主要研究內(nèi)容 1．三葉青生態(tài)栽培技術(shù)研究與示范推廣 研究三葉青引種馴化栽培、種源繁殖、肥料使用、病蟲害防治、采收與加工等標準化栽培技術(shù)規(guī)程。 余杭區(qū) 2020年度農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新項目 項目名稱： 野生三葉青馴化栽培、種質(zhì)篩選及開發(fā)利用 承擔(dān)單位： 杭州鴻越生態(tài)農(nóng)業(yè)科技有限公司 合作單位： 杭州職業(yè)技術(shù)學(xué)院 、浙江大學(xué) 申報日期： 2020年 7月 13日 目 錄 一、 項目 申請表 二、 項目可行性研究報告 三、承諾書 余杭區(qū) 2020年度農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新及社會發(fā)展項目申報表 申 報 單 位 杭州鴻越生態(tài)農(nóng)業(yè)科 技有限公司 項 目 主持人 鄔錫偉 項 目 名 稱 野生三葉青的馴化栽培、種質(zhì)篩選及 開發(fā)利用 起止年限 20200530——20200530 聯(lián) 系 電 話 13306811628 項目類別 農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新項目 項目擬投入經(jīng)費 50 萬元 項目申報單位上年度 銷售收入 0 萬元 技術(shù)依托單位 杭州職業(yè)技術(shù)學(xué)院、浙江大學(xué) 上繳稅收 0 萬元 技術(shù)開發(fā)費 0 萬元 項目主要研究內(nèi)容及預(yù)期經(jīng)濟效益： 三葉青是我國獨有的、極其稀少而珍貴的中草藥，具有抗病毒、抗炎、鎮(zhèn)痛與解熱、保肝等作用且毒副作用小，是西藥無法代替的 植物抗生素；加上抗瘤藥用價值發(fā)現(xiàn)與應(yīng)用，臨床上已廣泛用于抗癌、抗腫瘤及抗艾滋病毒等疾病。 本項目的研究旨在為擴大野生三葉青的資源 ,加速三葉青栽培和開發(fā)提供新技術(shù)，重點進行該物種的遺傳育種和保護生物學(xué)研究，并針對三葉青馴化栽培技術(shù)、生態(tài)復(fù)合間混種及不同 條件下的活性成分分析和優(yōu)質(zhì)種質(zhì)篩選與高效栽培進行研究與應(yīng)用示范。在系統(tǒng)調(diào)査研究基礎(chǔ)上，在我省主要分布區(qū)域收集三葉青種質(zhì)資源。 篩選出適合三葉青組 織培養(yǎng)的培養(yǎng)基，培養(yǎng)小苗的過程中，采用愈傷組織培養(yǎng)及最佳培養(yǎng)基配方的技術(shù)，整個過程時間縮短了 6 個月，組培苗移栽成活率達 90%以上。 三、主要經(jīng)濟指標、社會效益及成果 1．制定《三葉青生態(tài)栽培技術(shù)標準》，建立三葉青試驗、示范基地 20 畝，推廣 300畝，投產(chǎn)后年增產(chǎn)值 2020 萬元，年增利潤 400 萬元，年增稅收 80 萬元。 5．發(fā)表學(xué)術(shù)論文 2 篇，申請專利 1 項。同時，在社會經(jīng)濟迅速發(fā)展的今天，大量野生植物資源的破壞和野蠻的采集，使野生植物種類和數(shù)量急劇下降，最終導(dǎo)致生態(tài)平衡的破壞，直接威脅著人類的生存與發(fā)展。積極建設(shè) “ 綠色浙江 ” ，推行以資源節(jié)約型、科技先導(dǎo)型、質(zhì)量效益型和清潔生產(chǎn)為特征的可持續(xù)發(fā)展戰(zhàn)略， 在全國率先建立符合可持續(xù)發(fā)展要求的良性生態(tài)環(huán)境系統(tǒng)已成為浙江省各級政府的一項重要戰(zhàn)略任務(wù)。 三葉青因其藥效顯著，開發(fā)潛力巨大。 Liu D（ 2020）報道從三葉青中得到一種新的黃酮碳苷。按《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》（ 2020版）“食品安全性毒理學(xué)評價試驗”載：“三葉青無毒，無致突變 性”，其提取物對人肝癌細胞 HepG2 有較強的抑制作用。鑒于三葉青的良好藥用價值，其進一步開發(fā)利用具有十分廣闊的前景。三葉青庭園栽培表現(xiàn)抗病、少蟲害，十分耐寒。因此三葉青的馴化栽培是保障三葉青產(chǎn)業(yè)持續(xù)發(fā)展的必然途徑。因此在加強三葉青野生資源種質(zhì)保護的同時進行三葉青馴化栽培、育種、野生撫育等方面的研究，在廣大農(nóng)村地區(qū)進行推廣種植，有利于三葉青資源的持續(xù)利用。 二 、 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢 目前國內(nèi)外對三葉青的研究主要集中在化學(xué)成分、藥理以及生藥鑒定等方面，鐘曉明等 通過研究三葉青提取物（包括總黃酮、總氨基酸及多糖成分）對 CCl4 致急性肝損傷小鼠的保護作用，發(fā)現(xiàn)其能夠明顯降低肝損傷小鼠 ALT (谷丙轉(zhuǎn)氨酶 )、 AST (谷草轉(zhuǎn)氨酶 ) 的增高，減輕肝細胞變性，炎癥浸潤及壞死等病變；降低肝中 MDA (丙二醛 ) 生成量。惡性腫瘤的治療目前在醫(yī)學(xué)界尚無理想的藥物和方法，且此類疾病藥物耐受性明顯增高，但同時中醫(yī)中藥及有關(guān)營養(yǎng)支持療法為治療惡性腫瘤開辟了新途徑。同時發(fā)現(xiàn)，國內(nèi)外對三葉青的生物學(xué)和栽培繁殖特性上研究的比較少，目前只有沈宗根 、戴雅娟、呂洪飛 等人研究了不同遮蔭處理對三葉青光合作用，葉綠素?zé)晒庖约叭~綠素含量的影響，對于三葉青人工繁殖和生態(tài)栽培技術(shù)的研究卻很少報道，國內(nèi)學(xué)者只研究了用三葉青進行人工繁殖技術(shù)，但成活率低，產(chǎn)量不高，尚未見其三葉青種質(zhì)篩選方面的報道。本世紀初也有學(xué)者開始研究了三葉青生長發(fā)育與光照強度、溫度、激素、 pH值的關(guān)系和三葉青的 人工繁殖技術(shù)。 主要參考文獻： [１ ] 國家中藥管理局《中華本草》編委會． 中華本草 [Ｍ ]．第１３卷上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社， 1999：296298． [２ ] 李瑛琦，陸文超，于治國，等．三葉青的化學(xué)成分研究［ J］．中草藥， 2020 (11) : 34. [３ ] 丁剛強，鄭軍獻，魏克民，等．三葉青提取物對肝癌細胞 HepG 2 及原代大鼠肝細胞的體外毒性作用研究 ［ J］．浙江預(yù) 防醫(yī)學(xué)， 2020， 17(9): 122. [4] 程偉 ,陸曙梅．三葉青提取物對肺癌 A549 細胞的體外抑制作用 [Ｊ ]．中國實驗方劑學(xué)