【正文】 人參皂苷對照品，加乙醇定容至 5mL，配置成 1mg/mL 皂苷溶液。采用考馬斯亮藍法測蛋白含量 [25] 測得濃度為 34μg/mL，取料液比 1: 30，調(diào) pH 至 ，溫度 60℃ ，加入 %的木瓜蛋白酶水解 2h， 100℃ ，5min 終止水解。 大豆多肽的制備（堿溶酸沉協(xié)同酶解法） 取 大豆粉，按料液比 1: 10 加入蒸餾水，用 NaOH 調(diào) pH 值為 ，水浴50℃ 振蕩 30min，冷卻，離心。 三七皂苷粗提物提取（醇提法） 將三七放置在燒杯中，用蒸餾水浸泡 48 小時，粉碎成細小塊狀，過濾，濾渣放置烘箱中烘干， 將 濾液蒸發(fā)濃縮。 大棗多糖提?。ㄎ⒉ㄝo助法） 干大棗切碎，在 60℃ 鼓風(fēng)干燥箱中干燥至恒重， 粉碎后過 60 目篩。香菇溶液預(yù)熱至 55℃ ，加入酶液，恒溫振蕩。 試劑 木瓜蛋白酶 酶活 2020U/mg 杰輝生物技術(shù)有限公司 纖維素酶 酶活 15U/mg 上海博奧生物科技有限公司 無水乙醇 分析純 天津市天力化學(xué)試劑有限公司 抗壞血酸（ Vc） 分析純 天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司 鹽酸 分析純 萊陽康德化工有限公司 冰乙酸 分析純 萊陽康德化工有限公司 高氯酸 分析純 萊陽康德化工有限公司 DPPH（二苯代苦味?；杂苫? 分析純 美 國 Sigma 公司 青島農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文 香菇多糖抗氧化增效劑的研究 5 鐵氰化鉀 分析純 天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司 鄰二氮菲 亞鐵 分析純 天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司 硫酸亞鐵 分析純 天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司 雙氧水 分析純 洛陽市昊華化學(xué)試劑有限公司 磷酸二氫鈉 分析純 天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司 磷酸氫二鈉 分析純 天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司 Tris 分析純 瑞士 Roche 公司 EDTA 分析純 瑞士 Roche 公司 鄰苯三酚 分析純 天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司 二硫蘇糖醇（ DTT） 分析純 天津市科密歐化學(xué)試劑有限公 司 三氯乙酸（ TCA） 分析純 天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司 苯酚 分析純 天津市天力化學(xué)試劑有限公司 儀器 方法 多糖、多肽、皂苷等活性物質(zhì)的提取及制備 香菇多糖提?。ǔ暡▍f(xié)同復(fù)合酶法） 新鮮香菇切碎，在 60℃ 下干燥至恒重， 粉碎后過 60 目篩。實驗得到在乙醇與堿水體積比為 8:2 混合提取時提取物達到最佳抗氧化效果，檸檬酸對其有很好的增效作用。得到各種增效劑均可明顯增加 TBHQ 的抗氧化能力，不同增效劑對不同抗氧化劑的增效作用不同。結(jié)果表明菜籽多酚在菜籽油中抗氧化與維持低酸價 的最佳添加量為 %。OH 都不呈劑量 效應(yīng)關(guān)系。劉宇等 [18]以鷹嘴豆為原料，利用堿性蛋白酶水解，制得了抗氧化能力強于鷹嘴豆蛋白和大豆蛋白的鷹嘴豆肽。劉秀紅等 [14]以大豆為原料，利用木瓜蛋白酶進行水解，制備了大豆抗氧化肽 。OH)的清除率達到 %。 抗氧化皂苷 周琳，曾英等 [11]通過正交實驗得到提取三七總皂苷 的 最佳方法 為 超聲復(fù)合酶法 。 結(jié)果表明：兩種多糖提取物都具有體外抗氧化性能 ， 香菇多糖提取物的抗活性氧自由基能力和清除 NO2的能力優(yōu)于雞腿菇多糖提取物。滕利榮等 [7]研究了熱水法及復(fù)合酶法提取百合多糖 (LBP)的最佳條件 ， 發(fā)現(xiàn)復(fù)合酶法提取的多糖在體外 的 抗氧化活性均顯著高于熱水法提取的多糖 ， 對超氧陰 離子及羥自由基有 抑制作用 。 的清除作用以及對 H2O2 誘導(dǎo)的紅細胞氧化溶血和大鼠肝勻漿脂質(zhì)過氧化的保護作用。 能力測定）研究大豆多肽、大棗多糖及三七皂苷對香菇多糖抗氧化的協(xié)同作用，以期為食品資源的開發(fā)利用提供更多的理論依據(jù)。 據(jù)現(xiàn)代化學(xué)和藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)在抗氧化損傷、抗衰老、提高機體免疫力等方面的藥理作用顯著優(yōu)于人參總皂苷，對腦血管缺血缺氧損傷、腦缺血再灌注損傷有保護作用，對腦神經(jīng)細胞凋亡有抑制作用 [4]。大棗富含糖類、纖維素、維生素、氨基酸、蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)等營養(yǎng)成分，特別是含有多糖、蘆丁、環(huán)磷酸腺苷 (cAMP)等活性成分，這些成分使紅棗具有多種生物保健功能。研究表明，香菇多糖具有抗腫瘤、抗病毒、調(diào)節(jié)免疫、抗氧化和刺激干擾素形成等功能并且對正常細胞不產(chǎn)生毒副作用 [1]。 panax notoginseng saponins(PNS)。OH: PNS Len JDP peptides. The synergistic effect experiments demonstrated that JDP and PNS both have good synergistic effect, but JDP unmonly increased the Len39。OH) and pared these abilities of the mixture which are mixed with Lentinan, respectively. Then choose the best antioxidant mixture and adjust the proportion of them in antioxidant activity experiment. And Lentinan (Len) was obtained by posite enzymatic method, Jujuba polysaccharide (JDP) was extracted by the microwave method, soybean peptides was made by acid precipitation and the posite enzymatic method, panax notoginseng saponins (PNS) was extracted by alcohol precipitation method. The results demonstrated that the reducing power: PNSLenJDPpeptides。在香菇多糖和大棗多糖的質(zhì)量比為 7: 3 時協(xié)同抗氧化能力最強。結(jié)果表明，還原能力：三七皂苷 香菇多糖 大棗多糖 大豆多肽， DPPH將大豆多肽、大棗多糖、三七皂苷與香菇多糖分別進行體外還原能力，清除 清除能力實驗 ................................... 11 三種提取物與香菇多糖復(fù)配物 能力測定 ..................................................................... 9 四種提取物清除羥自由基活性結(jié)果 ................................................................... 9 三種提取物對香菇多糖的抗氧化增效實驗 ....................................................... 11 三種提取物與香菇多糖復(fù)配物還原能力測定結(jié)果 ......................................... 11 三種提取物與香菇多糖復(fù)配物 DPPH采用復(fù)合酶法制備香菇多糖，微波輔助提取大棗多糖、堿溶酸沉協(xié)同酶解法制備大豆多肽、醇提法制備三七皂苷。再按照一定的比例分別與香菇多糖復(fù)配后進行上述三種活性測定，得到最佳的協(xié)同抗氧化增效劑?？寡趸瘏f(xié)同實驗結(jié)果表明：大棗多糖和三七皂苷對香菇多糖有協(xié)同增效作用，其中大棗多糖的增效作用最強，基本上能提高 10%左右。 and the ability of scavenging soybean peptides。 香菇（ Lentinus edodes）是側(cè)耳科（ Pleara taco）的擔(dān)子菌，含有多種有效藥用成分，其中香菇多糖（ Lentinan， LNT）是目前研究很熱門的話題。大棗為鼠李科植物的成熟果實，可藥食兩用。三七總皂苷（ Panax notoginseng saponins， PNS）是三七的活性 成分。 OH 和 DPPH張全斌等 [6]采用體外實驗研究海帶褐藻多糖硫酸酯對 超氧陰離子 自由基、羥自由基、 DPPH 的作用很弱。 利用Fenton 反應(yīng)檢測 其 對羥自由基的清除作用 ， 對超氧陰離子自由基的清除作用以及在模擬胃液條件下清除 NO2的作用 。 ～ mg/mL 大棗多糖對羥自由基最大清除率為 ％（微波法）。，對羥基自由基 (大豆蛋白是目前研究地 最多 的 植物抗氧化肽原料。程云輝等 [17]以麥胚為原料，通過堿性蛋白酶水解，發(fā)現(xiàn)其蛋白水解液具有很強的超氧陰離子自由基清除能力。、 嚴(yán)奉偉等 [20]以過氧化值 （ POV） 與酸價 （ AV） 為指標(biāo)，采用 Schaal烘箱法研究菜籽多酚在菜籽油中的抗氧化效果，及其與 BHA 在菜籽油中的抗氧化協(xié)同增效作用。莫樹平等 [22]以熱帶水果荔枝、龍眼、芒果為研究對象，選取叔丁基羥基茴香醚 (BHA)、沒食子酸丙酯 (PG)、特丁基對苯二酚 (TBHO)、二丁基羥基甲苯 (BHT)及茶多酚 等作為抗氧化劑，檸檬酸、蘋果酸、磷酸、葡萄糖酸鈣、 EDTA 等作為抗氧化增效劑，進行單體和復(fù)合抗氧化劑抗氧化試驗。張燕平等 [24]從紫蘇莖葉中提取抗氧化活性成分，并與茶多酚、維生素 E 比較。 2 材料與方法 材料 原料 香菇、大豆粉、和田大棗，均購自青島城陽大潤發(fā)超市；三七，購自青島城陽中藥店。稱取適量復(fù)合酶（木瓜蛋 白酶：纖維素酶 =2： 1），加入 5mL 蒸餾水溶解。 冷凍干燥得香菇多糖粉末，低溫保藏。冷凍干燥得大棗多糖粉末，低溫保藏待用。 濃縮液干燥至恒重，密封保存?zhèn)溆?。真空冷凍干?，低溫 保存。 皂苷含量測定 比色法測定總皂苷含量 [27]。 含量測定：吸取樣品溶液 ，依照標(biāo)準(zhǔn)曲線操作步驟測定。在 562nm處測定吸光值。 OH） 清除能力，分別得到清除率曲線并計算出四種物質(zhì)的 IC50 值，比較它們抗氧化能力的大小。過氧化氫與亞鐵體系通過 Fenton 反應(yīng)產(chǎn)生 和 清除能力及羥自由基清除能力大小，研究其增效作用。OH 能力實驗，綜合得到最佳配比。在相同的還原能力下，選定 A700為 時，各提取物濃度如下：大豆多肽 12