【正文】 分泌型的 BsAb。由于它具有這種雙特異性，因此在應用上有更大的優(yōu)越性。噬菌體抗體 利用基因工程的方法將全套人抗體重鏈和輕鏈 V區(qū)基因克隆出來，通過噬菌體外表呈現(xiàn)技術，將抗體分子 Fab段或 scFv段表達在噬菌體膜外表，經(jīng)篩選后獲得特異性抗體，即噬菌體抗體。 根本原理 該技術以噬菌體為載體，將抗體基因 (Fab或 scFv基因等 )與噬菌體編碼的外殼蛋白 Ⅲ (CPⅢ )或 Ⅷ 〔 CPⅧ 〕相連，在噬菌體外表以抗體－外殼蛋白融合蛋白的形式表達，經(jīng)輔助病毒感染后，借助 CPⅢ 的信號肽穿膜作用，進入宿主外周基質，在正確折疊后被包裝于噬菌體尾部，隨著攜帶有表達載體的宿主菌就會釋放出帶有抗體的噬菌體。構建噬菌體抗體庫n 從外周血或脾、淋巴結等組織中別離 B淋巴細胞，提取 mRNA并逆轉錄為cDNA；n 應用抗體輕鏈和重鏈引物，根據(jù)建庫的需要通過 PCR技術擴增不同的 Ig基因片段；n 構建噬菌體載體。根本原理 優(yōu)點抗體文庫可以到達或超過 1011庫容 ,能包含 B細胞全部克隆建庫的外源基因來自人體多克隆細胞的總 mRNA通用引物具有人的種屬普遍性抗體的 VH和 VL基因的隨機重組也增加了抗體的多樣性方法簡單易行，節(jié)省時間?！惨弧逞芯抗ぞ? 單抗只與抗原分子上某一個決定簇相結合，作為探針可從分子、細胞和器官的不同水平上研究各種抗原物質的結構與功能的關系。將層析柱充分洗脫后，改變洗脫液的離子強度或 pH，欲別離的抗原與抗體解離，收集洗脫液便可得到欲純化的抗原?？贵w性藥物主要用途 1．器官移植排斥反響的逆轉；2．腫瘤免疫診斷；3．腫瘤免疫顯像；4．腫瘤導向治療；5．哮喘、牛皮癬、類風濕性關節(jié)炎、紅斑狼瘡、急性心梗、膿 毒癥、多發(fā)性硬化癥及其他自身免疫性疾??；6．抗獨特型抗體作為分子瘤苗治療腫瘤；7．多功能抗體〔雙特異抗體、三特異抗體、抗體細胞因子融合 蛋白、抗體酶等〕的特殊用途。n 第一個被美國批準用于人腫瘤治療的基因工程抗體－ Rituxan〔 r〕最初被用于非何杰金氏淋巴瘤，總有效率達 60％，現(xiàn)在正在探索用于治療艾滋病相關淋巴瘤和中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤。 “ 生物導彈〞，即將各種毒素、放射性同位素、化療藥物與識別腫瘤特異抗原或偶聯(lián)腫瘤相關的抗原后，能夠特異殺傷腫瘤細胞的一類藥物。n 抗體與化療藥物分子的的交聯(lián)物，又稱免疫交聯(lián)物(immunoconjugate)。n 抗腫瘤血管生成抗體治療腫瘤的研究最近也取得了很大的進展。內容 總結分子生物學 實 用技 術 。 連 接 肽 〔 約 1525個氨基酸〕 連 接而成的重。在 動 物模型中用抗血管生成因子、抗體封 閉 血管內皮生 長 因子取得了抑制 腫 瘤生 長 作用。 “快融〞：取出立即浸入37℃ ～ 40℃ 水浴中，使其迅速融化、。第一百二十一 頁 ，共一百二十三 頁 。n 這些偶聯(lián)物對結腸癌、肝癌、胃癌、黑色素瘤、腎癌、卵巢癌、宮頸癌、乳癌、肺癌、骨肉瘤等有一定的抗癌效應。放射性同位素與抗體的偶聯(lián)物在體內能將前者運至藥靶部位，并通過其放射性活性殺傷靶細胞，還可通過 X射線照相機拍攝核素放射線圖像，用于體內治療和定位診斷。n 目前在臨床中使用的腫瘤治療藥物多數(shù)存在 “ 敵我不分〞的問題，即在殺死腫瘤細胞的同時，也破壞了人體正常細胞。n 根據(jù)美國藥物研究和生產(chǎn)者協(xié)會〔 PhRMA〕的調查報告，癌癥是威脅人類健康的主要疾病之一，預防和治療癌癥是研究和開發(fā)抗體藥物的主要目標之一?！捕吃\斷試劑、抗體的檢測、酶、藥物等生物活性物質第一百一十五 頁 ，共一百二十三 頁 。將抗體吸附在一個惰性的固相基質上，并制備成層析柱?？贵w庫的大容量抗體庫極高的篩選效率3. 可獲得高親和力的人源化抗體VH和 VL基因的隨機重組模擬了體內抗體親和力成熟的過程所用的抗體基因又來自人體 第一百一十二 頁 ，共一百二十三 頁 。主要特點 ：n 基因型和表型相統(tǒng)一n 選擇能力和再擴增能力相結合融合蛋白PIII基因型 表達型第一百一十 頁 ，共一百二十三 頁 。通過多輪的抗原親合吸附 洗脫 擴增，最終篩選出抗原特異的抗體克隆。因此可以采用類似于親和層析原理從噬菌體抗體庫中篩選出特異性抗體。所構建的抗體庫稱為全套抗體庫 (repertoire antibody)或組合抗體庫(binatorial antibody library)。 另一類是含 Fc段的抗體融合蛋白，它是利用 Fc段所特有的生物學功能與某些有黏附或結合功能的蛋白融合而成?？贵w融合蛋白微型雙特異性抗體 diabody 它是將同一抗體的 VH和 VL區(qū)分布在不同的肽鏈上，構成兩種交聯(lián)的 ScFv，即 VLALinkerVHB和 VLBLinkerVHA。多倍雜交瘤細胞的穩(wěn)定性差， BsAb的產(chǎn)量少且活性低，費時費力，臨床應用時存在人抗鼠抗體免疫反響 (HAMA)，因此不適用于臨床。第一百零一 頁 ，共一百二十三 頁 ?；瘜W交聯(lián) BsAb小分子抗體的主要應用領域n 靶向載體n 構建其它工程抗體n 細胞內抗體 (intrabody)：將小分子抗體基因導入細胞內，使其在細胞內特定部位表達，通過與靶抗原的結合影響其生物學活性。完整抗體 scFv第九十六 頁 ，共一百二十三 頁 。第九十四 頁 ，共一百二十三 頁 。小分子抗體n Fabn 單鏈抗體n 單域抗體n 最小結合單位第九十一 頁 ，共一百二十三 頁 。輕鏈 FR1中有一種序列只有一個殘基不同，重鏈 FR3中有一種序列只有兩個殘基不一致。如果這氨基酸殘基在人、鼠間不同，那么一致改為鼠的殘基。構建改形抗體的一般性原那么1. VH和 VL的序列均應盡可能選自人的同一種 Ig，以減少兩條鏈裝配的不親和性。antibody〕。第八十六 頁 ，共一百二十三 頁 。 第八十四 頁 ，共一百二十三 頁 。根本類型小分子抗體噬菌體抗體催化抗體抗原化抗體雙特異性抗體抗體融合蛋白胞內抗體第八十 頁 ，共一百二十三 頁 ?？贵w基因的表達與篩選鑒定第七十九 頁 ，共一百二十三 頁 ?？贵w基因的修飾及表達載體的構建Ig可變區(qū)基因的克隆根據(jù)治療的需要，制備新型抗體。 這一技術是將對 Ig基因結構與功能的了解與 DNA重組技術相結合，根據(jù)研究者的意圖采用基因工程方法，在基因水平對 Ig分子進行切割、拼接或修飾，甚至是人工全合成后導入受體細胞表達，產(chǎn)生新型抗體，也稱為第三代抗體。、 SephacrylS300等?！?3〕可能含有病毒第七十四 頁 ，共一百二十三 頁 ?！?5〕效價高缺點：〔 1〕太單一，對熱、 pH不穩(wěn)定〔 3〕可重復性優(yōu)缺點優(yōu)點：〔 1〕特異性高pH610穩(wěn)定30min(1)理化性質第六十九 頁 ，共一百二十三 頁 。710天，小鼠腹部脹大，用注射器抽取腹水， C.5B.第六十八 頁 ，共一百二十三 頁 。人 鼠： 525ug/ml(1)決定抗體產(chǎn)生的因素污染的微生物主要有：牛血清， 50%～ 60%細胞凍存 防止細胞密度過高而死亡第六十五 頁 ，共一百二十三 頁 。防止屢次傳代發(fā)生