cd147在胃癌細(xì)胞sgc7901增殖(文件)
【正文】 ，共四十九頁(yè)。 Transwell結(jié)果 穿過(guò) Transfer侵襲小室的染成紫色的細(xì)胞〔 400〕 SGC7901 SGC7901/shRNAcontrol SGC7901/shRNA2 第三十九頁(yè)，共四十九頁(yè)。 本實(shí)驗(yàn)中使用的順鉑濃度為：， ， 10PPC。 ? 成功構(gòu)建了靶向 CD147的 shRNA真核表達(dá)載體； ? 成功轉(zhuǎn)染了人胃癌細(xì)胞 SGC7901，并獲得了穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株，經(jīng) Realtime PCR、 Western Blot檢測(cè)， CD147在 mRNA和蛋白水平均被顯著抑制； ? CD147表達(dá)沉默后 SGC7901的增殖能力明顯降低，細(xì)胞的 MMP2和MMP9的活性明顯降低，細(xì)胞的體外侵襲能力明顯降低，細(xì)胞對(duì)化療藥物順鉑的敏感性增強(qiáng)。 下一步的研究方向 〔裸鼠移植瘤模型，體內(nèi)腫瘤細(xì)胞 侵襲實(shí)驗(yàn)〕； ； ； 。 內(nèi)容總結(jié) RNA干擾抑制 CD147表達(dá)對(duì)人胃癌細(xì)胞 SGC7901增殖、侵襲和順鉑敏感性的影響。細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率〔 %〕 =[1OD(cisplatin＋〕 /OD(cisplatin－ )] 100% 第四十九頁(yè)，共四十九頁(yè)。轉(zhuǎn)染 SGC7901細(xì)胞，篩選穩(wěn)定表達(dá)干擾載體的 SGC7901細(xì)胞株。 第四十七頁(yè)，共四十九頁(yè)。 我們的研究說(shuō)明： CD147在胃癌細(xì)胞 SGC7901增殖、侵襲和化療藥物敏感性中發(fā)揮重要作用； CD147可能是胃癌治療的一個(gè)有效的靶點(diǎn)。 與 SGC7901和 SGC7901/shRNAcontrol相比 ， 順鉑對(duì) SGC7901/shRNA2的抑制率顯著增加 3 30D r u g dos e ( μ g / m l)Inhibition ratioSGC7901SGC7901/shRNAcontrolSGC7901/shRNA2* * * 第四十二頁(yè)，共四十九頁(yè)。 順鉑敏感性實(shí)驗(yàn) 抗腫瘤藥物順鉑的使用濃度以血漿峰濃度 〔 Peak Plasma Concentration， PPC) 為標(biāo)準(zhǔn) 。將 Matrigel鋪在 Transwell侵襲小室的多孔濾膜上，能形成與天然基底膜極為相似的基底膜結(jié)構(gòu)。 收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液 ， 用 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳法可將這兩種明膠酶按分子量大小分開 ， 顯示兩條負(fù)染條帶 ， 根據(jù)條帶的面積和亮度可判定明膠酶的活性 。 明膠酶譜法檢測(cè)細(xì)胞上清中 MMP2和 MMP9的活性 明膠酶包括 72 kDa的明膠酶 A〔基質(zhì)金屬蛋白酶 2， MMP2〕和92 kDa的明膠酶 B (基質(zhì)金屬蛋白酶 9， MMP9)。 第三十二頁(yè)，共四十九頁(yè)。 Realtime PCR檢測(cè) CD147 mRNA表達(dá)水平 與 SGC7901相比， SGC7901/shRNA1和 SGC7901/shRNA2細(xì)胞中 CD147 mRNA相對(duì)表達(dá)量分別下降至 %和 % 。 轉(zhuǎn)染及篩選 脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染 48h后用含 篩選 2周，然后改為半量維持。 CD147 shRNA表達(dá)載體的構(gòu)建： 將合成的三對(duì)片段分別用水浴中加熱后退火備用 ， 與經(jīng) BamH I和 Hind III雙酶切的 ， 構(gòu)建成 CD147 shRNA表達(dá)載體 ， 重組質(zhì)粒分別命名為 pSilencershRNA1， pSilencershRNA2 和 pSilencershRNAcontrol 。GATCCGTGACAAAGGC
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