【正文】 四十九頁(yè)。 設(shè)計(jì)好的 shRNA插入序列 shRNA1 539。 Realtime PCR檢測(cè) CD147 mRNA表達(dá)水平 與 SGC7901相比， SGC7901/shRNA1和 SGC7901/shRNA2細(xì)胞中 CD147 mRNA相對(duì)表達(dá)量分別下降至 %和 % 。將 Matrigel鋪在 Transwell侵襲小室的多孔濾膜上，能形成與天然基底膜極為相似的基底膜結(jié)構(gòu)。 第四十七頁(yè)，共四十九頁(yè)。 下一步的研究方向 〔裸鼠移植瘤模型，體內(nèi)腫瘤細(xì)胞 侵襲實(shí)驗(yàn)〕； ； ； 。 明膠酶譜結(jié)果 MMP2 MMP9 1 2 3 Lane 1:SGC7901. Lane 2:SGC7901/shRNAcontrol. Lane 3:SGC7901/shRNA2 01MMP2 MMP9MMPs activity (% of untreated group)SGC7901SGC7901/shRNAcontrolSGC7901/shRNA2* * B SGC7901/shRNA2細(xì)胞上清液中 MMP2和 MMP9的活性明顯降低 第三十七頁(yè)，共四十九頁(yè)。篩選出的細(xì)胞克隆分別命名為 SGC7901/shRNA1，SGC7901/shRNA2和 SGC7901/shRNAcontrol。 第二十五頁(yè)，共四十九頁(yè)。 胃癌中 CD147的表達(dá) 日本 Toyama大學(xué)的 Zheng HC等研究說(shuō)明：在正常胃黏膜開(kāi)展為增生性或化生性胃黏膜 ， 最后開(kāi)展為胃癌的過(guò)程中 ， CD147的表達(dá)量是逐漸增加的 ， 并且CD147的表達(dá)與腫瘤大小 、 浸潤(rùn)深度 、 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及 MMPMMP9和 VEGF的表達(dá)呈正相關(guān) 。 只有HG形式能刺激 MMP的產(chǎn)生 。 MMP簡(jiǎn)介 腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，其中細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜的降解是腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中的重要步驟。 MMP是一個(gè)鋅離子依賴的蛋白酶家族 ， 目前已發(fā)現(xiàn) 26種。 第十一頁(yè)，共四十九頁(yè)。 二 . 研究目標(biāo) 第十八頁(yè)，共四十九頁(yè)。GATCCGTCGTCAGAACACATCAACTTCAAGAGAGTTGATGTGTTCTGACGACTTTTTTGGAAA3’ 539。 第三十一頁(yè)，共四十九頁(yè)。 第三十八頁(yè)，共四十九頁(yè)。 Thanks for your attention! 第四十八頁(yè)，共四十九頁(yè)。 第四十五頁(yè)，共四十九頁(yè)。 第三十六頁(yè)，共四十九頁(yè)。將抗 G418的陽(yáng)性細(xì)胞克隆用有限稀釋法別離出來(lái)并逐步擴(kuò)增以待進(jìn)一步分析。另外 ， 設(shè)計(jì)一個(gè)陰性對(duì)照 shRNAcontrol。 第十五頁(yè)，共四十九頁(yè)。 細(xì)胞內(nèi)的 CD147存在低糖基化 〔 low glycosylated CD147， LG〕 和高糖基化 〔high glycosylated CD147， HG〕 形式 ， 分子量分別是 32~44kDa、 45~65kDa。 第四頁(yè)，共四十九頁(yè)。 MMP的主要功能是 降解細(xì)胞外基質(zhì) 。 免疫組化實(shí)驗(yàn)證實(shí) CD147在多種惡性腫瘤中高表達(dá) ， 包括膀胱癌 、 皮膚癌 、 肺癌 、 乳腺癌 、 淋巴癌和胰腺癌等 。 本實(shí)驗(yàn)旨在運(yùn)用 RNA干擾技術(shù)抑制胃癌細(xì)胞株 SGC7901中 CD147基因的表達(dá) ， 研究該基因沉默后對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng) 、 侵襲