植物基因工程育種(文件)
【正文】 室用肉眼直接觀察熒光，或覆蓋 X光 膠片曝光，也也用熒光光度計(jì)定量 檢測(cè) . 轉(zhuǎn)化體的鑒定和證實(shí)的必要性 為了驗(yàn)證外源基因整合到染色體 . 我們采用 PCR技術(shù) . Southern雜交技術(shù) . 為了驗(yàn)證外源基因是否表達(dá) . 我們采用 RTPCR技術(shù) .Northern雜交技術(shù) . Western雜交技術(shù) . PCR檢驗(yàn)外源基因的整和 在轉(zhuǎn)基因個(gè)體的檢測(cè)中 ,通過(guò)設(shè)計(jì)外源基因兩端的特異引物 ,采用 PCR基因可以使外源基因得到大量擴(kuò)增 ,然后通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)特意擴(kuò)增帶的有無(wú) ,從而判斷外源基因是否整合到受體植物的基因組 . 優(yōu)點(diǎn) :由于對(duì)模板 DNA的要求少 ,適合與轉(zhuǎn)基因體的早期檢測(cè) . 缺點(diǎn) :容易受到外界因素的干擾 . Southern雜交檢測(cè)外源基因的整合 ? 原理 :來(lái)源不同但具有互補(bǔ)序列的兩條多核苷酸鏈通過(guò) WastonCrick堿基配對(duì)原則形成穩(wěn)定的結(jié)構(gòu) .其中一條被標(biāo)記成為探針 ,探針與互補(bǔ)的核苷酸序列雜交 ,通過(guò)放射自顯影技術(shù)可以被檢測(cè)出來(lái) . ? 雜交方式 :Southern斑點(diǎn)雜交 Southern印記雜交 (最常用 ) Southern原位雜交 RT雜交檢測(cè)外源基因的整合 ? 適用范圍 :外源基因在受體細(xì)胞是否轉(zhuǎn)錄的初步檢測(cè) . ? 原理 :以轉(zhuǎn)基因個(gè)體總 RNA或 mRNA為模板進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄 ,然后 PCR擴(kuò)增 ,如果可以獲得特意的 cRNA擴(kuò)增條帶 ,則表明外源基因?qū)崿F(xiàn)了轉(zhuǎn)錄 . ? 優(yōu)點(diǎn) :簡(jiǎn)單 快速 對(duì) mRNA抽提的數(shù)量和質(zhì)量都要求不高 . Northern雜交檢測(cè)外源基因的表達(dá) ? 與 Southern 的不同是 :固體膜上轉(zhuǎn)移固定的是 總 RNA或 RNA形成RNADNA雜交雙鏈 .通過(guò)放射自顯影的強(qiáng)度可以判斷外源基因的表達(dá)水平 . ? 分類(lèi) : 斑點(diǎn)雜交 (假陽(yáng)性率高 .不常用 ) 印跡雜交 (比較常用 ) Western雜交檢測(cè)外源基因表達(dá)的產(chǎn)物 ? 適用范圍 :檢測(cè)外源基因在蛋白質(zhì)水平上的表達(dá) . ? 原理 :從轉(zhuǎn)基因材料中提取總蛋白或者目的蛋白 ,經(jīng) SDS聚丙稀酰胺凝膠電泳把蛋白質(zhì)按分子大小分離 ,在轉(zhuǎn)移到固體膜上 ,然后加入特異抗體 .膜上的目的蛋白與一抗結(jié)合 ,再加入帶標(biāo)記的二抗 ,最后通過(guò)二抗上的標(biāo)記物的性質(zhì)進(jìn)行檢測(cè) . 植物遺傳轉(zhuǎn)化流程 適宜外植體的選擇及再生體系的建立 抗生素篩選壓的確定及農(nóng)桿菌菌株的選擇 遺傳轉(zhuǎn)化操作 ? 載體介導(dǎo)的 轉(zhuǎn)化方法 ? DNA直接導(dǎo)入法 ? 種質(zhì)系統(tǒng)法 選擇培養(yǎng) 轉(zhuǎn)基因植株鑒定 獲得再生植株 轉(zhuǎn)化質(zhì)粒的構(gòu)建 轉(zhuǎn)基因植株的繁殖與應(yīng)用 利用報(bào)告基因 Southern 雜交 Northern 雜交 Western 雜交 植物基因工程研究的應(yīng)用 ? 一 抗性基因工程 ? 二 植物品質(zhì)改良基因工程 ? 三 植物雜種優(yōu)勢(shì)的利用 ? 四 植物代謝工程 一 抗性基因工程 研究最早、技術(shù)最為成熟、應(yīng)用規(guī)模最大的植物轉(zhuǎn)基因技術(shù) ? ? ? ? 二 植物代謝工程 ? 植物代謝工程的研究發(fā)展方向?yàn)檎陂_(kāi)展的第二代植物基因工程。⑷將與脂類(lèi)合成有關(guān)的基因?qū)胫参?. 2 果品的成熟品質(zhì)改良 果品的貨架存放期直接影響商業(yè)價(jià)值 ,人們可以通過(guò)這個(gè)技術(shù)來(lái)改變果品成熟后的品質(zhì) . 3 觀賞園藝植物的品質(zhì)改良 四 植物雜種優(yōu)勢(shì)的利用 ? 關(guān)鍵 :選育穩(wěn)定遺傳的雄性不育系及其保持系和恢復(fù)系 ? 傳統(tǒng)育種 :在自然群體中鑒定 . ? 基因工程方法 :采用特異性啟動(dòng)子與 RNA酶基因構(gòu)建嵌合基因 . 五、基因工程的安全性 （一）安全問(wèn)題的考慮 ? 工程菌株的處理 ? 轉(zhuǎn)基因植物的釋放 ? 轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的安全 ； 級(jí)雜草； ； ； ，使生物多樣性受到威脅； ； 7. 其它一些不可預(yù)計(jì)的風(fēng)險(xiǎn)。 1993年，在原國(guó)家科學(xué)技術(shù)委員會(huì)領(lǐng)導(dǎo)下成立了國(guó)家生物遺傳工程安全委員會(huì)，由來(lái)自衛(wèi)生部、農(nóng)業(yè)部、輕工業(yè)部的專(zhuān)家組成，負(fù)責(zé)醫(yī)
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