微生物的遺傳變異(文件)
【正文】 劑來說，可同時(shí)引起轉(zhuǎn)換與顛換，也可只具其中的一種功能。它們可與一個(gè)或幾個(gè)核苷酸發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，從而引起DNA復(fù)制時(shí)堿基配對的轉(zhuǎn)換，并進(jìn)一步使微生物發(fā)生變異。移碼突變 （ frameshift mutation）指誘變劑使DNA分子中的一個(gè)或少數(shù)幾個(gè)核苷酸的增添（插入）或缺失，從而使該部位后面的全部遺傳密碼發(fā)生轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)譯錯(cuò)誤的一類突變。丫啶類染料，如丫啶黃、丫啶橙和 α氨基丫啶等，都是移碼突變的有效誘變劑。染色體畸變（ chromosomal aberration）167。后，重新插入到原來染色體的位置上；易位則指斷裂下來的一小段染色體再順向或逆向地插入到同一條染色體的其它部位上。嘧啶的光化產(chǎn)物主要是二聚體和水合物，其中了解較清楚的是 胸腺嘧啶二聚體 的形成和消除。 背景輻射和環(huán)境中多因素低劑量的誘變效應(yīng)167。 一、原核生物的基因重組167。 結(jié)構(gòu)基因的單拷貝及 rRNA基因的多拷貝167。 沒有明顯的操縱子結(jié)構(gòu)167。167。167?！N的純化選優(yōu)↓誘變處理↓← 用簡單快捷的方法重復(fù)篩選1 篩選用培養(yǎng)基⑴ 基本培養(yǎng)基：凡是能滿足某種野生型菌株?duì)I養(yǎng)要求的最低成分的合成培養(yǎng)基，稱為基本培養(yǎng)基；常以 ‘ []’ 表示；⑵ 在基本培養(yǎng)基中加入一些富含氨基酸、維生素及含氮堿基之類的天然有機(jī)物質(zhì)如蛋白胨、酵母膏等，以滿足該微生物的各種營養(yǎng)缺陷型菌株都能生長繁殖的培養(yǎng)基，稱為完全培養(yǎng)基，常用 ‘ [+]’ 表示；⑶ 在基本培養(yǎng)基中只是有針對性地加入某一種或某幾種營養(yǎng)缺陷成分，以滿足相應(yīng)的營養(yǎng)缺陷型生長的培養(yǎng)基，稱為補(bǔ)充培養(yǎng)基，補(bǔ)充培養(yǎng)基可按所加入營養(yǎng)成分相應(yīng)地用 ‘ [A]’ 、 ‘ [B]’等來表示。（（ 1）誘變劑處理）誘變劑處理 （（ 2）淘汰野生型菌株）淘汰野生型菌株 ① 抗生素法抗生素法 ② 菌絲過濾法菌絲過濾法（（ 3）） 檢檢 出出 營營 養(yǎng)缺陷型養(yǎng)缺陷型 （（ 4）） 鑒鑒 定定 營營 養(yǎng)缺陷型養(yǎng)缺陷型 檢出營養(yǎng)缺陷型①① 夾層培養(yǎng)法夾層培養(yǎng)法 167。 原生質(zhì)體（ A+B— ） 167。 對作為載體的細(xì)菌質(zhì)?；蚴删w DNA可采用與處理目的基因同一種類的限制性核酸內(nèi)切酶進(jìn)行處理，使其形成并暴露出與目的基因相應(yīng)的粘性末端。而相鄰的核苷酸，在 DNA連接酶的作用下也能形成磷酸二酯鍵，這樣就完成了目的基因與質(zhì)粒 DNA（或噬菌體 DNA）的重組，得到的是一個(gè)完整的具有復(fù)制能力的環(huán)狀 DNA重組體，即 “ 雜種質(zhì)粒 ” （或雜種噬菌體）。載體必須具有自我復(fù)制的能力，一般可利用質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化作用或噬菌體的轉(zhuǎn)導(dǎo)作用，將供體基因帶入受體細(xì)胞內(nèi)。 6．篩選、繁殖 當(dāng)前，由于分離純凈的基因功能單位還很困難，所以通過重組后的 “ 雜種質(zhì)粒 ” 的性狀是否都符合原定的 “ 設(shè)計(jì)藍(lán)圖 ” ，以及它能否在受體細(xì)胞內(nèi)正常增殖和表達(dá)等，都還需要經(jīng)過仔細(xì)檢查，以便能在大量個(gè)體中設(shè)法篩選出所需要性狀的個(gè)體，然后才可加以繁殖和利用。 2．干燥保藏法 主要是指把菌種接種到適當(dāng)載體上，在干燥條件下進(jìn)行保藏。3．隔絕空氣保藏法 用固體石蠟密封試管口以隔絕空氣， 5．寄主保藏法 用常規(guī)方法保藏的動植物病原菌和病毒。 細(xì)菌芽胞用沙土管保藏；霉菌的孢子多用麩皮管保藏。 3～ 6個(gè)月； 用 20℃ 以下的超低溫冰箱或干冰、液氮（ 195℃ ）凍結(jié)保藏，長達(dá)數(shù)年。 5．復(fù)制、表達(dá) 在理想情況下，進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)的雜種質(zhì)粒（或雜種噬菌體），可通過自我復(fù)制到擴(kuò)增，并使受體細(xì)胞表達(dá)出作為供體細(xì)胞所固有的部分遺傳性狀，成為 “ 工程菌 ” 。 3．體外重組 將上述分別處理過的目的基因和細(xì)菌質(zhì)粒 DNA片段（或噬菌體核酸）放在試管中，在較低溫度（ 5～ 6℃ ）下混合 “ 退火 ” 。必要時(shí)這種粘性末端也可用人工方法合成。檢出重組子菌落（ A+B+）轉(zhuǎn)基因工程菌株的構(gòu)建167。原生質(zhì)體融合加融合劑原生質(zhì)體（ A— B+） 第一組 第二組
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