牛奶中酪蛋白的分離與鑒定(文件)
【正文】 斷的回流提取，一般視含油量高低提取 6— 12小時，至抽提完全為止（用濾紙?jiān)嚕? ? 方法二 脂肪 (％ )＝ (m3m7) / m4 100 m3—— 未抽提濾紙包的質(zhì)量， g； m7—— 抽提后濾紙包的質(zhì)量， g； m4—— 樣品的質(zhì)量 (如為測定水分 后的 樣品質(zhì)量計 )， g。 過氧化物會導(dǎo)致脂肪氧化 ， 在烘干時也有引起爆炸的危險 。它還含有胱氨酸和蛋氨酸這兩種含硫氨基酸，但不含半胱氨酸。 三 儀器、原料和試劑 ? 儀器：溫度計、布氏漏斗、 pH試紙、抽濾瓶、水浴鍋、燒杯、 量筒、表面皿、天平、離心機(jī)等 ? 原料：市售全脂牛奶 ? 試劑 ：無水乙醇、無水乙醚 乙醇、乙醚混合液：乙醇 :乙醚 =1:1（體積比） 四 實(shí)驗(yàn)步驟 ? 酪蛋白等電點(diǎn)沉淀 將 100mL牛乳放到 500mL燒杯中，加熱到 40℃ ，加入到同樣 40℃的乙酸鈉緩沖液中，調(diào) pH達(dá) 。 ? 去脂 將粗制品中加入 10ml無水乙醇，攪拌片刻，將全部懸濁液轉(zhuǎn)移至布氏漏斗中，用乙醚 乙醇混合液洗滌沉淀兩次，最后用乙醚洗沉淀 2次，抽干。它是生化實(shí)驗(yàn)中提取、分離、純化的常用設(shè)備，操作的關(guān)鍵環(huán)節(jié)是平衡。考馬斯亮藍(lán) G250的磷酸溶液呈棕紅色，最大吸收峰在 465nm。 2. 酪蛋白濃度的測定 稱取一定量的酪蛋白 ， 用 %NaCl溶液溶解定容至一定體積 （ 使其測定值在標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線范圍內(nèi) ） 。 測定完后可用乙醇將藍(lán)色的比色杯洗干凈 。 （ 2） 開啟電源開關(guān)，指示燈亮，選擇開關(guān)置于“ T”，調(diào)節(jié)透光率[100%T]旋鈕使數(shù)字顯示 []左右，預(yù)熱 20min . 2．校正 （ 1）打開吸收池暗室蓋（光門自動關(guān)閉），調(diào)節(jié) [0% T]旋鈕，使數(shù)字顯示為“ ”，蓋上吸收池蓋，將參比溶液置于光路，使光電管受光，調(diào)節(jié)透光率 [100%T]旋鈕，使數(shù)學(xué)顯示為“ ”。 3．測定 （１） 吸光度Ａ的測量。 4．結(jié)束 測量完畢，關(guān)閉電源，將各調(diào)節(jié)旋鈕恢復(fù)至初始位置。 （ 3） 儀器左側(cè)下角有一只干燥劑筒，應(yīng)保持其干燥，發(fā)現(xiàn)干燥劑變色應(yīng)立即更新或烘干后再用。 注意事項(xiàng) ： （ 1） 儀器接地要良好，否則顯示數(shù)字不穩(wěn)定。 （２） 濃度 c的測量。當(dāng)改變靈敏度 后必須重新校正“ 0”和“ 100”。 六 722型分光光度計使用方法 1．調(diào)整 （ 1） 將靈敏度旋鈕調(diào)至“ 1”檔（放大倍率最小）。 五 注意事項(xiàng) （ 1） 如果測定要求很嚴(yán)格 ， 可以在試劑加入后的 520 min內(nèi)測定光吸收
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