分光光度計(jì)基本原理與結(jié)構(gòu)(文件)
【正文】 u－ 8800型，島津公司的UV－ 265型，日立公司的 U－ 3200／ U－ 3400型，Varian公司的 2200／ 2300系列等。以后 AmincoBowman公司、日立公司和島津公司等先后研制設(shè)計(jì)了各種類型的雙波長分光光度計(jì)，如 156型、 365型、 556型和 557型； UV300型、 UV3000型等。 41 42 ? 如圖 4－ 9所示，設(shè)在雙波長測(cè)定中，入射到試樣池的兩束光強(qiáng)度相同，對(duì)應(yīng)波長分別為 λ1和 λ2，其中 AS為背景吸收，則有 ? Aλ1＝ K1CL ＋ AS1 ? Aλ2＝ K2CL ＋ AS2 ? 若 λ1和 λ2選擇適當(dāng)，則可認(rèn)為 AS1= AS2= AS，即背景吸收相同，這樣透過試樣池的兩束光的吸光度差值為 ? ? ⊿ A= Aλ1－ Aλ2=（ K1－ K2） ? 下面以吸收點(diǎn)法測(cè)定二組分混合物中單個(gè)組分的含量為例，說明雙波長分光測(cè)定的特點(diǎn)。 ? 這里必須指出：根據(jù)吸收曲線選擇 λ1和λ2時(shí)，應(yīng)滿足以下兩個(gè)基本條件，即干擾組分在這兩個(gè)波長應(yīng)具有相同的吸光度，使干擾組分濃度的變化不影響測(cè)量值。對(duì)于生物材料、醫(yī)藥、食品等試樣的分析具有特殊重要意義。 45 ? 從上述分析可看出，雙波長分光光度計(jì)有很多優(yōu)點(diǎn)。選擇 A組分顯示相等吸光度的兩個(gè)波長 λ1和 λ2，則不管 A組分濃度如何變化 44 ? ⊿ A= Aλ1－ Aλ2=0 ? 因此測(cè)定混合物 C在 λ1和 λ2的吸光度差值，實(shí)際上就是 B組分在 λ1和 λ2的吸光度差。CL ? 從上式可看出： ⊿ A與被測(cè)組分的濃度 C成正比。經(jīng)過光電倍增管和電子控制系統(tǒng)，在記錄器上顯示出兩束光（ λ1和λ2）的吸光度差 ⊿ A，即 ⊿ A=Aλ1－ Aλ。為此提出了雙波長測(cè)定法，用雙波長分光光度計(jì)來測(cè)定高濃度試樣的混濁試樣以及多組分混合物的定量分析具有很大的優(yōu)越性，提高了靈敏度和準(zhǔn)確度。日本島津公司的 UV－ 260，日立公司的U－ 1000/2022， Unicam公司的 Pu8600型，Varian公司的 DMS系列， Perkin－ elmer公司的 1 17型等。后者便于在相同測(cè)定條件下對(duì)一些數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，雙光束方式測(cè)定程序大大簡(jiǎn)化，不僅可直接讀數(shù)、記錄結(jié)果和數(shù)字顯示，而且可進(jìn)行“全波段自動(dòng)掃描”，實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化分析，直接打印出分析結(jié)果，再加上附件的設(shè)置，更加擴(kuò)展了它的使用范圍。差別在于雙光束分光光度計(jì)的單色器的出射狹縫和樣品室之間加了一個(gè)光束分裂器或斬波器，它的作用是以一定頻率把一個(gè)光束交替分成兩路。 33 ? （二）雙光束光學(xué)系統(tǒng)：?jiǎn)喂馐止夤舛扔?jì)雖簡(jiǎn)單價(jià)廉，但有如下缺陷：即它要求在整個(gè)測(cè)定過程中光源必須穩(wěn)定不變；另外光電轉(zhuǎn)換器和放大器如有不規(guī)則的特性會(huì)給測(cè)量結(jié)果帶來誤差。結(jié)構(gòu)如圖 4－ 6所示。它的特點(diǎn)是只有一條光束。點(diǎn)光源發(fā)出的光，經(jīng)聚光鏡后，變成平行光，然后再進(jìn)入棱鏡（或光柵）色散系統(tǒng)。在可見光區(qū)，鋁膜外面常常再鍍上一層SiO2保護(hù)層。此法可以將光柵上的臟物去掉。所以在維護(hù)時(shí)嚴(yán)禁用任何擦拭物擦拭，更不能用手去觸摸，否則，會(huì)造成永久損壞。 26 ? 光柵的分辨能力取決于它的 mN值， N是光柵上總溝紋數(shù)或總條數(shù)。當(dāng)它不是波長的整數(shù)倍時(shí)，光線被抵消，沒有反射現(xiàn)象。溝紋排列異常密集，每英寸長度上有 15000或 30000條。 23 24 ? 實(shí)驗(yàn)證明，棱鏡的色散具有非線性，即①譜線彎曲；②不同波長區(qū)域色散效果不同，紅端色散差，紫端色散較好。即使使用同一種光學(xué)材料，以相同的人射角照射，若波長不同，得到的折射角也不一樣。單色
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