【正文】 延長時間，因為高溫下菌絲體的生理代謝旺盛，它不但要大量消耗堆肥中的養(yǎng)分，同時還會加快自身的衰老速度。2. 二級種(原種) 無感染病蟲雜菌、菌絲潔白,粗壯濃密,均勻布滿瓶周或管周，外觀顏色一致,無不均勻斑，培養(yǎng)基由棕黑色轉(zhuǎn)為淡棕黃色，有蘑菇特有香味，菌絲不萎縮，不發(fā)黃，接種后應在4060天長滿瓶，菌齡掌握在菌絲長滿瓶10天左右使用。除上述菌種標準外，優(yōu)質(zhì)菌種（圖版22）在種瓶中隨機挖取一塊菌種，成塊而有韌性，不松散?？刂频闹饕胧┦?，提高堆肥堆制發(fā)酵質(zhì)量，改善培養(yǎng)基營養(yǎng)組分。（二）“吐黃水”的原因 蘑菇菌種堆肥發(fā)酵過熱，含水量過高，菌齡長或菌種培養(yǎng)時長時間處于高溫環(huán)境，初期會造成菌種收縮變形，呈塌肩狀，后期菌種軟癱呈水漬狀，并有黃色水溶物出現(xiàn)，稱“吐黃水”現(xiàn)象（圖版23）。控制的主要措施:堆肥發(fā)酵切忌過腐，特別是采用稻草作基質(zhì)時，料內(nèi)含水量切忌偏高；用麥粒作基質(zhì)時更要注意掌握好菌種生產(chǎn)季節(jié)，避免菌齡過長；菌種培養(yǎng)期間要防止長時間高溫影響，越夏菌種要做好降溫措施。若待蘑菇菌絲長滿基質(zhì)或基質(zhì)被完全污染后再查找原因，往往主次原因混淆，真假難以斷定，同時也不利于及時采取相對應的控制措施。種源本身帶有雜菌，對菌種的危害極大。那么這類污染多屬于無菌操作不嚴，接種時將外界的雜菌帶入而造成的。滅菌裝置設(shè)計不合格，種瓶滅菌時排放不合理，均能造成滅菌時產(chǎn)生低溫死角等，即使滅菌過程符合常規(guī)要求，還可能造成少數(shù)培養(yǎng)基出現(xiàn)滅菌不徹底的現(xiàn)象。實際生產(chǎn)中，由于缺乏制種經(jīng)驗或培養(yǎng)條件不善，或制種后污染率高等原因，會造成菌種生產(chǎn)時間來不及，即制種時間拖擱遲誤的情況，此時可采用以下方法進行補救。 原種和栽培種由常規(guī)的滿瓶培養(yǎng)基制種，改為裝半瓶培養(yǎng)基制種，以縮短逐級繁殖所需的時間。 即由常規(guī)的一點接種方式，改為多點接種，以增加接種量，加快菌絲繁殖速度，縮短制種時間。九、菌種的退化及減緩方法（一）菌種的退化 退化(degeneration)指蘑菇菌種原有優(yōu)良性狀、典型性和一致性大部分喪失的現(xiàn)象，如產(chǎn)量下降、品質(zhì)變劣、抗性降低、整齊度變差等。（二）退化的原因 菌種的退化可能源于一個細胞發(fā)生的有害變異（variety），或一個基因的瞬時突變（Mutation），菌種呈現(xiàn)群體退化現(xiàn)象需要較長的時間。因而，退化指一群個體變劣，變異則指某一個體的突變，例如某菌種產(chǎn)生的子實體群體中有少數(shù)子實體與親代不同，不能算做退化，而是自然變異，例如蘑菇的白色品種就是源于其褐色品種的白化變異。此時轉(zhuǎn)管擴繁的菌種，則全部是退化的菌種。對于微生物中的細菌、酵母而言，其菌種是由大量單細胞個體組成，因而也可通過單細胞或單菌落分離而提純復壯。2．控制轉(zhuǎn)管次數(shù) 引進一個優(yōu)良菌種后，不要立即將該菌種擴大繁殖的首批母種全部用完，而應將其妥善保藏。確證已感染病毒，尤其是病毒粒子含量大、子實體性狀已受到嚴重影響的菌種，應及時淘汰。菌種保藏的方法多種多樣，有的雖然保藏效果好，但投資高或操作繁雜。Kneebne(1965)和Fritsche(1966)亦證實了上述結(jié)果。一般而言，對母種進行長期保存，對原種進行短期保存。具體做法是:菌絲長滿斜面后，放在0～5℃保存。在長期保存過程中，要防棉塞受潮滋生雜菌。因此大都采用營養(yǎng)不怎么豐富的馬鈴薯葡萄糖瓊脂斜面（PDA）。通過更換培養(yǎng)基，特別是天然營養(yǎng)物質(zhì)的更換能改變碳、氮、礦質(zhì)元素成分，恢復菌絲活力。Stoller(1962)觀察到，如果在小米培養(yǎng)基中加入石膏，就可抑止絨毛狀菌絲和扇變角菌落的出現(xiàn)。另外，多種化合物，主要是芳香族化合物也誘導絨毛狀菌絲和扇狀變異菌落的形成。營養(yǎng)生長正常并不意味著該菌種沒有發(fā)生退化。（五）石蠟隔氧封藏 將液態(tài)石蠟分裝入三角瓶內(nèi)，裝量達瓶空間的l/3，塞好棉塞，于121℃滅菌2小時，然后置40℃溫箱中，使其水分蒸發(fā)，或置于干燥器內(nèi)數(shù)日以除去水分，石蠟呈透明狀為宜。移植時不必倒出石蠟，用接種鉤取一塊菌絲即可。地面光潔有下水道，墻壁用防水涂料或油漆刷白，便于沖洗消毒。圖46 接種室；；；；；；；紫外線燈用于空氣消毒，既干凈又無污染，是一種很好的消毒方法，因而長期被廣泛地采用。紫外線燈一般在最初使用的100小時中很快降低功率，故需在使用100小時后測定其強度(用紫外線光度計測)?？捎酶蓛糗洸蓟蚓凭珴櫇襁^的棉花輕輕擦，要避免在玻璃上產(chǎn)生痕跡，禁止用有油或有臘的布擦，裝卸燈管要避兔用手直接接觸燈管表面，以防燈管發(fā)生失透現(xiàn)象。 細菌多數(shù)依附在灰塵上，而紫外線穿透力較弱，對灰塵上的(特別是較大顆粒)細菌，滅活效果并不徹底，而無菌通風是移除灰塵必不可少的措施。理想的通風設(shè)備應有加熱或和冷卻空氣的裝置。接種室內(nèi)也可設(shè)置超凈工作臺（圖47），利用其過濾除菌的原理，先將空氣過濾到無菌，然后將無菌空氣從風洞處朝一個方向吹出，使工作臺面成為局部無菌狀態(tài)。潔凈度基本達到100級（國際標準：空氣中≥≤，即達到100級）。實驗證明，經(jīng)過以上方法消毒的接種室，在接種過程中由于人的活動，空氣中的菌類總數(shù)會達到消毒剛結(jié)束時的9倍多?？諝庵械木愄幱谡x子的包圍之中，使細胞迅速獲得飽和電量。工業(yè)靜電除塵器具有100多年的應用歷史。2．接種室空氣潔凈的必要性 塵粒不僅是菌類的依存條件，也是菌類的繁殖條件，并且塵粒還起傳播、擴散菌類的作用。3．層 3．傳統(tǒng)潔凈設(shè)備的局限性 高效空氣過濾器（HEPA），雖然可以在有人操作的場合持續(xù)除菌除塵，但其結(jié)構(gòu)復雜、體積大、費用高（雙人工作臺價格約7000元）。4．MKJ空氣消毒潔凈器的特點 （1）無毒副作用 能在有人的場所持續(xù)除菌除塵，對人體無毒、副作用。（4）高效去除可吸入顆粒物 能高效去除空氣中的可吸入顆粒物，達到l～10萬級潔凈度。（三）接種箱 在資金與場地條件都不充裕的情況下，可用接種箱因陋就簡進行接種。圖48 雙人接種箱 (單位:厘米)（四）培養(yǎng)室 接種后的種瓶需要在適溫條件下培養(yǎng)。架上鋪以木板或塑料板，以便擺放菌種瓶。床架的層數(shù)視菇房高度而定,一般5～6層，,頂層距屋頂至少1米。蘑菇菌種最好避光培養(yǎng)，檢查時采用手持式照明燈較為方便。高壓高溫（～2㎏/㎡，125℃以上）滅菌罐，其價格在2～10萬元之間，價格高低取決于容積大小與建造水平。打開排氣閥，隨著罐內(nèi)溫度上升。當壓力指針回到0位時，打開罐蓋1/4開度，利用余熱烘烤棉塞，防止驟冷產(chǎn)生冷凝水。此外，畜棚禽舍內(nèi)的墊草(廄肥)，沼氣渣以及種過草菇、平菇等食用菌的下腳料也可以作為堆料時的主料。（一）草料 蘑菇菌絲不能固定空氣中的二氧化（CO2），因而堆肥中的草料是蘑菇生長所需碳素的主要來源。干玉米秸應無霉變，將其鍘成20～30厘米長的段并經(jīng)碾壓，便于吸水發(fā)酵。若在曝曬時遭雨淋，應及時翻曬，力求干透。曬干的麥秸最好貯放在能避雨的通風良好的場棚內(nèi)。也可采用濕糞貯藏法，事先選好高地挖出糞塘，將隨時收集的濕糞倒入糞塘內(nèi)，用薄膜覆蓋好以防雨淋。1頭成年牛的全年糞便，大約可栽培50平方。但馬糞含氮量比牛、豬糞低，%，使用時增加些餅肥或含氮化肥以提高其營養(yǎng)成分。（二）畜禽糞 蘑菇堆料所用畜禽糞需周年收集，鮮牛糞含水75%左右，通常400～420千克濕牛糞，才能曬出100千克干糞。這種麥秸堆制發(fā)酵時，產(chǎn)熱量大，養(yǎng)分損失小。軟爛霉變的草料不能用。以麥秸為例，1畝小麥約產(chǎn)麥秸400千克，（相當于碳銨12千克），（）。不論采用那一種原料作為基本材料，都必需充分考慮其保水性和通氣性是否合適，僅以營養(yǎng)合適為指標是不行的。第五章 蘑菇堆肥配方與發(fā)酵第一節(jié) 原料與配方一、堆肥主料 蘑菇堆肥所用的主料是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的副產(chǎn)物，如稻草、麥秸、玉米秸、高梁秸、甘薯藤，花生藤等秸稈都可以用來種蘑菇。當有大量蒸汽從排氣閥中排出時，再關(guān)閉排氣閥。表42 高壓滅菌設(shè)備及其有關(guān)數(shù)據(jù)設(shè) 備 參考價 消耗能源 用 途 生 產(chǎn) 效 率手提高壓滅菌器 800元 2千瓦/小時 母種制備 100支/2小時臥式圓形滅菌罐 2萬元 高壓鍋爐 制栽培種 1200瓶/4小時臥式方形滅菌柜 6萬元 高壓鍋爐 制栽培種 800瓶/4小時利用高壓蒸氣設(shè)備滅菌時，應注意兩點：一是滅菌罐內(nèi)的菌種瓶排列密度須適當，使蒸汽暢通，無死角。需要指出，蘑菇菌種的生產(chǎn)時間一般處于7～8月份高溫高濕季節(jié)，因而要求采用高壓高溫滅菌設(shè)備。否則菌絲容易老化變黃。中間擺放的床架，～。架數(shù)、層次、層距等的設(shè)計除考慮培養(yǎng)空間的利用率外,還應顧及擺放種瓶及檢查的方便性。箱底部兩側(cè)箱壁上各有兩孔，孔上裝袖套，接種時手由袖套伸入箱內(nèi)操作。（6）能消除空氣中有害氣體與異味 由于組合式靜電場裝置的阻力小，因此在設(shè)備內(nèi)可以設(shè)置較大吸附容量的活性炭過濾器。實驗測試報告證明，該產(chǎn)品工作10分鐘，%；工作15分鐘，%。有人采用紫外線燈對過濾材料照射的方法來殺滅濾網(wǎng)上的菌類，這樣設(shè)備就更顯復雜，成本更高。只有有效地拉制空氣中的可吸入顆粒物，才能達到消毒的較高要求。其發(fā)表的報告表明，靜電除塵器用以空氣除菌可以達到100%的效率。由于快速的能量釋放，菌類細胞壁遭受嚴重的破壞，正離子與菌細胞表面接觸，放出電荷，吸收相反的電荷。此外，傳統(tǒng)的空氣消毒方法無法在有人活動的條件下持續(xù)消毒。與傳統(tǒng)的空氣消毒設(shè)備比較，MKJ空氣消毒潔凈器能在有人現(xiàn)場操作的過程中除菌除塵，對人體無害，室內(nèi)空氣可達到10萬級～100萬級潔凈度，因而特別適合接種室進行動態(tài)消毒除塵。接種室或超凈工作臺的潔凈效果如何，可用簡便方法檢驗：在接種工作臺上，以平均間隔位置擺放平皿3個,每個皿內(nèi)裝營養(yǎng)豐富并經(jīng)滅菌的牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基約20毫升。標準接種室的氣壓應保持正壓，～，這樣就防止了外界不潔空氣的反流。條件允許時，應安裝空氣過濾裝置，以濾除雜菌灰塵。接種室單獨使用紫外線照射，而不同時進行無菌通風，是不能達到無菌要求的，其原因是: 紫外線雖有很強的表面殺菌效果，但有效輻射面積有限，即使在應用合理的情況下，也不能殺死空氣中全部細菌。若不即時更換，不但沒有殺菌效力，這個能量還會有利于細菌生長?！?。緩沖室墻頂也裝紫外線燈和日光燈各l盞，壁上有掛衣架。第三節(jié) 制種設(shè)施及設(shè)備菌種生產(chǎn)是蘑菇生產(chǎn)的重要環(huán)節(jié)，所需設(shè)施如下：一、接種設(shè)施設(shè)備（一）接種室 接種室為高度潔凈的無菌區(qū)，一般長寬各2米左右。塞上無菌橡皮塞，豎直保存。草腐菌采用以糞草為主料的培養(yǎng)基。Fritsche(1981)報道了另一種蓬松的絨毛狀菌絲，在瓊脂培養(yǎng)基中呈現(xiàn)扇形濃密菌絲，這種菌絲的大量出現(xiàn)將會影響產(chǎn)量。Fritsche(1968)認為，多種瓊脂培養(yǎng)基如燕麥粉瓊脂能誘導絨毛狀菌絲的形成，而堆料＋瓊脂培養(yǎng)基則不會誘導絨毛狀菌絲的形成。如在膠塞上鉆孔，再用棉花封孔口來協(xié)調(diào)保水與通氣的矛盾，菌種貯藏9～12個月后仍能成活80%以上。因此，蘑菇斜面菌種輪用貧、富培養(yǎng)基保藏，有利于其優(yōu)良種性的保持和復壯。增加瓊脂用量（～3%）可減緩水分蒸發(fā)，還要防止菌種管的標簽脫落而造成種系混雜。轉(zhuǎn)管保存不能長期用PDA培養(yǎng)基，否則種性易退化。因此保存方法應具備取材容易，操作方便，菌種不易退化，長期保存不污染雜菌等優(yōu)點。然而，目前國內(nèi)絕大部分菌種生產(chǎn)單位或個人沒有這種條件，常用的是斜面低溫傳代保藏(冰箱保種)，這種保種方法常引起菌種老化或生理退化。保持菌種活力最簡單的方法是在適宜的培養(yǎng)基中經(jīng)常進行繼代培養(yǎng)，并把它們存放在3～5℃的冰箱中。以上措施雖有助于延緩菌種退化的速率，但是由于造成退化的因素具有相當程度的普遍性和隨機性，因此任何一個菌種都不可能永久保持其優(yōu)良性狀，需要適時對菌種進行更新?lián)Q代。這樣每批栽培種制作時的轉(zhuǎn)接次數(shù)不致太多，既可使菌種的生活力較強，又可降低因細胞分裂而產(chǎn)生有害突變的機率。但是據(jù)許襄中(1994)初步研究，采用挑取尖端菌絲(取染毒菌落尖端3～4mm細嫩菌絲)及高溫培養(yǎng)(32～34℃)相結(jié)合的方法，有一定脫病毒的效果。 在自然栽培條件下，不同蘑菇品種間的孢子隨風散播，造成一定頻率的天然雜交，也是引起品種混雜退化的原因之一。一般認為引起蘑菇菌種退化和變異的原因如下: 一般說來，一個正常菌株僅是經(jīng)過轉(zhuǎn)管移植，因為是無性繁殖，不會導致遺傳性狀的改變。 Sinden(1953)指出，如果菌種長時間在同一種瓊脂培養(yǎng)基中，其菌絲就會出現(xiàn)褐變，生長緩慢生命力不強，而且緊貼在培養(yǎng)基的表面。這里必須明確，退化是因遺傳性變異引起的，而因環(huán)境改變使菌種生產(chǎn)性能下降的非遺傳變異不能算退化。上述方法可單獨采用，也可綜合使用，使用時應結(jié)合制種時間來考慮。4. 換料制種 更換培養(yǎng)基成分，菌種培養(yǎng)時間也可以縮短。 即由常規(guī)逐步繁殖制種改為母種多轉(zhuǎn)擴l次后直接越級制作栽培種，省去原種繁殖這一級，也可以理解為原種當栽培種使用。其具體特征是污染區(qū)的始發(fā)部位都是從培養(yǎng)基的外表，即瓶、袋等菌種容器的開口、裂紋、孔隙處開始。 在培養(yǎng)基制作過程中或在菌種培養(yǎng)管理期間，只要有一道環(huán)節(jié)控制不當，污染的現(xiàn)象就會增多。種源本身若帶有蟲體(如螨、線蟲等)，則造成菌種病蟲害同時發(fā)生且蔓延速度加快。培養(yǎng)基滅菌不徹底，一般接種后2～3天即可發(fā)現(xiàn)，它是造成菌種成批污染、大量報廢的最重要原因。蘑菇菌種被污染的原因較多，有單一因素造成的，也有多種因素交叉影響引起的。吐黃水的菌種松軟，水分大，不成塊，菌絲少或不明顯，無菌種香味。菌種培養(yǎng)期要盡量減少高溫的影響。八、菌種生產(chǎn)常見問題及原因（一）“退菌”的原因 蘑菇菌種堆肥堆制發(fā)酵不良、養(yǎng)分差、基質(zhì)分裝過松、菌絲生長表現(xiàn)稀弱無力，若遇到高溫，再加上培養(yǎng)室通風不良，容易造成菌絲萎縮消退，即退菌的現(xiàn)象。接種后菌絲應在30～45天長滿瓶。（二）菌種質(zhì)量標準 目前我國尚無制訂蘑菇菌種的國家標準。這點在制作菌絲穿透較慢的谷粒菌種和生料菌種時尤要注意。蘑菇菌種的適齡標準是，在適溫培養(yǎng)條件下，母種長滿培養(yǎng)基表面后再延長3～5天使用較好。適齡菌種若不立即使用，應置于低溫環(huán)境下存放，以延緩菌絲衰老程度。適齡的菌種菌絲量大，菌絲活性強，實用價值高。若尿素添加過量，還會不是影響菌絲生長，如果菌種培養(yǎng)基添加尿素配制后，只經(jīng)過短時間(1～3天)堆積，就分裝后滅菌，同樣也是不適宜的，其原因是短期堆積過程中，基質(zhì)內(nèi)雖有一些微生物參與分解尿素，但尿素分解不充分，還會放出氨氣，基質(zhì)中含有較多的氨便能殺傷蘑菇菌絲，進而造成接種后種