農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法的概述(文件)
【正文】 。VirA蛋白的胞質(zhì)區(qū)域有自激酶的功能，結(jié)合活化蛋白，可以以二體或多體形式結(jié)合到vir啟動子的特定區(qū)域，從而成為其它vir基因轉(zhuǎn)錄的激活因子，打開VirB、virC、virD、virE、virH等幾個基因。vir基因表達(dá)的產(chǎn)物作用于TDNA產(chǎn)生TDNA鏈，進(jìn)而轉(zhuǎn)化形成TDNA復(fù)合體，隨后在植物及細(xì)菌蛋白的共同作用下被攝入細(xì)胞核內(nèi)。bp重復(fù)序列和第四個堿基之間切割，將TDNA從Ti質(zhì)粒上剪切下來，稱T鏈。TDNA通過與事先斷裂的寄主DNA雙鏈(DSB)發(fā)生重組來完成整合，進(jìn)而進(jìn)行表達(dá)。②將整塊愈傷組織浸泡于菌液中搖動培養(yǎng)?，F(xiàn)將農(nóng)桿菌介導(dǎo)的植物遺傳轉(zhuǎn)化常采用的方法[9]，簡要介紹如下：結(jié)果顯示，TDNA向禾本科植物中的轉(zhuǎn)化沒有明顯障礙，但人們對整合過程的了解十分有限，同時存在相當(dāng)大的爭議。virus)的cDNA通過根癌農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)入玉米，轉(zhuǎn)入植株表現(xiàn)出感染癥狀；Gould等（1991）用根癌農(nóng)桿菌感染玉米芽尖，得到少量轉(zhuǎn)基因植株；Shen等（1993）觀察到農(nóng)桿菌介導(dǎo)的gus基因轉(zhuǎn)入玉米芽后β葡糖苷酸酶的表達(dá)；Mooney等（1991）采用根癌農(nóng)桿菌感染小麥胚得到轉(zhuǎn)化細(xì)胞；Rainer等（1990）和Chan等（1992）通過根癌農(nóng)桿菌感染未成熟胚得到少量水稻轉(zhuǎn)基因植株。al1996）[1013]。許多研究表明，農(nóng)桿菌介導(dǎo)單子葉植物遺傳轉(zhuǎn)化已具備了與雙子葉植物相似的農(nóng)桿菌本身的必要條件，但單子葉植物的轉(zhuǎn)化相比較而言困難得多，這可能不僅是農(nóng)桿菌一方的因素，單子葉植物的植物因子也可能起著關(guān)鍵作用，也不排除農(nóng)桿菌和這些植物因子的相互作用[14]。據(jù)統(tǒng)計，單子葉植物用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化獲得成功的遺傳轉(zhuǎn)化率玉米為5%30%、水稻為29%、秈稻為22%，接近雙子葉植物(任永霞等2005)這些性狀的改造就需要一個能將大片段DNA導(dǎo)入植物細(xì)胞并穩(wěn)定表達(dá)的轉(zhuǎn)化體系。1997；Liual1999），甲基化等原因造成基因表達(dá)失活（Kumpaltaetal6文安徽農(nóng)學(xué)通報[A].[2][4]HellensH．AbinaryinGelvingenestransferPlantMayerhofera1．TDNAillegitimate[9]．農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報，2001，19(1)：4548．[14][16][15]葉興國，Shirleysato，徐惠君等．小麥農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因植株的穩(wěn)定獲得[J]．中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2001,34(5)：469474.[10][J].生物工程進(jìn)展,2001,21(1):5974.inmodeZ，Nawrath:223.integration[J].AnnuinandScience，2000．5：446451．vectorstoP39。任永霞,季靜,王里,[J].河北北方學(xué)院學(xué),21(6):3842.[3],9(6)張翼，路曦結(jié)，韓文兵等.參1998），轉(zhuǎn)移TDNA區(qū)的兩個基因未必共表達(dá)等（Hamidalet如農(nóng)桿菌感染過程會對植物材料造成損傷，TDNA整合時其邊界可能會發(fā)生截斷（HamidaletTi載體容量目前農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化的方法主
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