【正文】 影響因素分析，結果表明乙醇提取女貞子中黃酮類化合物的最佳工藝條件為：乙醇濃度80%，料液比1:40，提取溫度90℃，通過顯色穩(wěn)定性試驗、精密度試驗和方法重現性試驗證明了可見分光光度法測定總黃酮方案的可靠性和索氏提取法的重現性很好。光陰似箭，日月如梭。阿尤甫，阿不都拉最后要感謝我的家人以及我的朋友們對我的理解、支持、鼓勵和幫助，正是因為他們，我所做的一起才更有意義，也正是因為有了他們，我才有追求進步的勇氣和信心。在本論文的寫作過程中，我的指導老師徐老師傾注了大量的心血，從選題到開題報告，從寫作提綱，到一邊又一遍的指出初稿中的具體問題，嚴格把關，循循善誘在此我表示衷心感謝。通過對比試驗初步探討了女貞子各個部位總黃酮的含量，結果表明女貞子果皮中總黃酮的含量最高。結果見下表：表310精密度實驗序號 1 2 3 4 5吸光度 黃酮含量% 平均值 相對偏差% 標準差 變異系數(%) 從上表結果看出，用分光光度法測定女貞子中總黃酮含量，結果標準變偏差和變異系數均較小，說明該方法的精密性、準確性良好，切測定條件易控制，測定結果較滿意。最佳的浸提條件為A2B2C2D1，即以80%的乙醇為提取劑在90℃、料液比為1:，按照上述最佳提取工藝條件對女貞子中黃酮類化合物進行提取。 正交試驗(80目)女貞子粉末于索氏提取器的恒壓漏斗中，根據預實驗進行正交實驗設計，改變提取條件(不同乙醇濃度、不同提取溫度、不同料液比和不同提取時間)以確定提取因素變化范圍以及各因素的最佳值。 不同料液比提取(80目)干燥女貞子粉末五份分別用50ml、75ml、100ml、125ml、150ml(125ml、150ml定容至150ml)的80%乙醇提取3h結果見下表： 表36 乙醇用量對提取效果的影響乙醇用量(ml) 50 75 100 125 150吸光度 總黃酮含量% 由上表數據作圖得:由上圖可知，乙醇用量在50100ml時，黃酮的提取率逐漸上升，大于100ml時，提取率反而呈下降趨勢，料液比影響溶液的極性，從而影響了不同極性黃酮類的溶解性；同時隨著料液比的增大能耗也會增大，所以在正交實驗時乙醇用量應選擇在100ml左右。綜上所述，在正交試驗設計時，提取時間應選擇在3h左右。 顯色反應穩(wěn)定性試驗提取液顯色后，選擇三份不同的提取液，每隔十分鐘測一次吸光度，連連續(xù)測定至90分鐘，確定提取液顯色后的穩(wěn)定性。 不同料液提取比分別用50ml、75ml、100ml、125ml、將濾液抽濾、離心，然后于100ml(125ml或150ml)的容量瓶定容，顯色測定其吸光度。堿性反應：取少量所提樣品溶液，加入少量4% NaOH 溶液，觀察實驗現象。W(g)：為供試品的稱取量。 女貞子總黃酮提取物的制備 (80目)的女貞子粉末，置于索氏提取器中用乙醇提取至提取液呈無色為止。 蘆丁標準曲線回歸方程的確立、用30%， 5% NaNO2，搖勻，放置6min后， 10% Al(NO3)3溶液，搖勻，放置6min，加入5ml 4%NaOH溶液，混勻，用30%乙醇稀釋至刻度搖勻，放置10min后，2000r/min 離心10min，取上清液于波長506nm處測定吸光度，測得不同濃度下的吸光度。 試劑蘆丁對照品(中國藥品生物精品檢定所)無水乙醇、甲醇、丙酮、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、硼酸、三氯化鐵、濃鹽酸、鋅粉、石油醚、硫酸銅、氯化鈉、檸檬酸(均為分析純)蒸餾水(實驗室自制) 主要儀器設備表21主要儀器設備一覽表儀器及型號 生產廠家FZ10植物粉碎機 齊家務科學儀器廠電子天平 梅特勒托利多儀器(上海)有限公司旋轉蒸發(fā)器RE52CS 上海亞榮生化儀器廠恒溫水浴鍋B220 上海亞榮生化儀器廠SHZD(Ⅲ)循環(huán)水式真空泵 鞏義市予華儀器有限公司PH030A干燥箱 上海恒科學儀器有限公司DF101B集熱式恒溫加熱磁力攪拌器 鞏義市予華儀器有限公司WX2無憂真空泵 臨海市譚氏真空設備有限公司TDL40B臺式低速大容量離心機 湖南星科科學儀器有限公司722S分光光度計 上海精密儀器有限公司UV1880紫外分光光度計 SHIMADZU CORDORATIONSB5200DT超聲波清洗機 寧波新芝生物科技股份有限公司 實驗方法 女貞子中黃酮類化合物含量的測定天然藥用植物中總黃酮含量的測定方法主要有鋁鹽顯色可見分光光度法和高效液相色譜法等。本課題主要研究了黃石地區(qū)冬季采摘的女貞子中總黃酮的含量，通過在單因素實驗(即單一變量在各個條件下黃酮的得率)的基礎上，對黃酮類化合物提取效果的因素：提取溫度、濃度、時間、料液比進行了正交試驗設計，以確定最佳的黃酮提取條件。以前黃酮類化合物主要是指具有基本母核2—苯基色原酮化合物，而且前則泛指兩個苯環(huán)(A與B環(huán))通過中央三個碳原子連接而成的一系列化合物的總稱[27]。自1814年發(fā)現的第一個黃酮類化合物——白楊素以來，到1980年已分離出黃酮類化合物約2700種，包括甙和甙元[25]。在可見光區(qū)，除某些物質對光有吸收外，很多物質本身并沒有吸收，但可在一定條件下加入顯色試劑或經過顯色處理使其顯色后再測定，故又稱比色分析[23]。常用的波長范圍為：(1)200~400 nm的紫外光區(qū)(2)400~760 nm的可見光區(qū)(3)~25μm(按波數計為4000㎝1~400㎝1)的紅外光區(qū)。具體顯色現象見下表：表1—2各類黃酮化合物的顯色現象類別 黃酮 黃酮醇 二羥黃酮 查耳酮 異黃酮 橙酮鹽酸+鋅粉 紅 紫紅 紫紅 — — —檸檬酸 綠黃 綠黃 — 黃 — —硝酸鋁 黃 黃綠 藍綠 黃 黃 —三氯化鐵 綠褐色 — — — — —氫氧化鈉 黃 深黃 黃 橙 黃 紅硼酸 — — 亮黃色 — — — 黃酮類化合物的定量分析 測定原理黃酮類化合物主要包括黃酮苷和黃酮醇苷兩大部分。同時還可以通過控制臨界溫度和壓力的變化，來達到選擇性提取和分離純化的目的。同時在液體中還會產生空化作用，即在有相當大的破壞力作用下，液體內形成空化泡的現象。 微波法協(xié)同提取微波輔助提取技術是近年以傳統(tǒng)溶劑浸提法原理為基礎發(fā)展的新型萃取技術，該技術具有選擇性高、耗時少、能耗低、排污量少等優(yōu)點，可克服傳統(tǒng)提取方法的缺陷，與超臨界流體萃取、