龍牙百合在組織培養(yǎng)過程中的酶譜分析(文件)
【正文】 [15] [J].中國柑橘,1990,19(3):2022[16] 李合生,孫群,[M].北京:高等教育出版社,2000[17] 唐錫華,Ⅷ,稻胚發(fā)育過程中過氧化物酶的活性、出現(xiàn)位置及其同工酶譜的變化規(guī)律[J].植物生理學(xué)報(bào),1983,(9):357361附圖圖1 龍牙百合的生長情況 Lilumbrownii Browh Var virdum baker’s Growth situation after 30 days圖2 龍牙百合的生長情況 Lilumbrownii Browh Var virdum baker’s Growth situation after 40 days圖3 龍牙百合的生長情況 Lilumbrownii Browh Var virdum baker’s Growth situation after 50 days1號：未分化階段2號、3號：分化初期4號、5號：分化后期1號 2號 3號 4號 5號圖4過氧化物酶同工酶聚丙烯酰胺凝膠電泳 the peroxidase enzyme isozyme polyacarylamide gel electrophore表2 聚丙烯胺凝膠電泳貯液配制方法序號試制(加入濃HCL40滴)3分離膠丙膠貯液(AcrBis貯液Ⅱ)Acr ，Bis ，用無離子水溶解后定容至100 mL，過濾除去不溶物，裝入棕色試劑瓶，4℃保存。7核黃素溶液，無離子水溶解后定容至100mL。117％乙酸溶液 mL 36％乙酸稀釋至100 mL。她不但用嚴(yán)謹(jǐn)?shù)闹螌W(xué)態(tài)度和淵博的知識指導(dǎo)我完成論文，而且教我做人和處世的道理，鼓勵我在實(shí)踐中摸索。2 實(shí)驗(yàn)材料、主要儀器與試劑 4 實(shí)驗(yàn)材料 5 實(shí)驗(yàn)主要儀器 5值此論文完成之際，向涂藝聲教授致以最誠摯的感謝！同時(shí)，還有生命科學(xué)學(xué)院多位老師和同學(xué)給予的幫助，我衷心感謝曾給予我?guī)椭睦蠋熀屯瑢W(xué)。 致 謝本人有幸?guī)煆耐克嚶暯淌谕瓿杀究普撐?，本文是在她親切關(guān)懷和精心指導(dǎo)下完成的。940％蔗糖溶液蔗糖40 g，溶于100 mL無離子水中。510％過硫酸銨溶液（Ap）10g過硫酸銨溶于100 mL無離子水中(當(dāng)天配制)。法1分離膠緩沖液， ( TrisHCl緩沖液)取48 mL 1mol/L HCl，用無離子水溶解后定容至100 mL。名因?qū)嶒?yàn)時(shí)間所限，僅對過氧化物酶同工酶進(jìn)行了分析，而未對其它同工酶如超氧化物進(jìn)行分析 。本實(shí)驗(yàn)以龍牙百合的莖段為材料進(jìn)行過氧化物酶同工酶分析發(fā)現(xiàn)，龍牙百合生長分化階段過氧化物酶同工酶譜有明顯差別，龍牙百合莖段生長分化期的過氧化物酶同工酶酶譜比生長分化期多3條酶帶，表明利用過氧化物酶同工酶分析鑒別作一般組織分化的指標(biāo)是可行的。5討論盡管目前對過氧化物酶的生理功能還認(rèn)識不夠，但根據(jù)其與植物生長發(fā)育及組織分化之間所表現(xiàn)的比較穩(wěn)定的關(guān)系，可以用它作一般組織分化的指標(biāo)之一。但隨著分化進(jìn)程的加深，會逐漸出現(xiàn)3條酶帶，、可作為判定生長分化進(jìn)程的特征帶。聚丙烯酰胺凝膠電泳分離過氧化物酶同工酶實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)龍牙百合組織培養(yǎng)過程不同生長分化階段出現(xiàn)不同的過氧化物酶酶譜。不抽生葉片的小鱗莖相對要肥厚。接種30天后，無菌小鱗莖的獲得。膠片用雙蒸水沖洗3次后， 30% H2O2。把調(diào)節(jié)旋扭調(diào)至零，關(guān)閉電源，電泳約一個(gè)半小時(shí)。點(diǎn)樣時(shí)須小心，防止樣品液的擴(kuò)散。將稀釋10倍的電極緩沖液倒入兩槽中，前槽（短板側(cè)）緩沖液要求沒過樣品槽，后槽（長板側(cè)）緩沖液要求沒過電極，備用。按表3比例配制分離膠將分離膠沿長玻璃板加入膠室內(nèi)，小心不要產(chǎn)生氣泡，加至距短玻璃板頂端3cm處，立即覆蓋2～3mm的水層（或水飽和正丁醇），靜置待聚合（約40min），當(dāng)膠與水層的界面重新出現(xiàn)時(shí)表明膠已聚合。當(dāng)凝膠模子與兩半槽固定在一起后，凝膠槽子兩側(cè)形成前后兩個(gè)槽，供裝電極緩沖液和冷凝管用?！拾彼峋彌_液，分離膠采用過硫酸銨——TEMED催化系統(tǒng)，%，濃縮膠采用核黃素——TEMED催化系統(tǒng)，、%，——甘氨酸系統(tǒng)。待酶帶完全出現(xiàn)后（約20min），用自來水沖洗23次，再隔一天換一次水，總共換23次。實(shí)驗(yàn)試劑見附表4 聚丙烯胺凝膠電泳貯液配制方法，
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