【正文】 n，使之切片呈棕黃色。(12)用5%硫代硫酸鈉水溶液固定3~5min。4．BielschowskyRogerFoot改良法【固定】取小塊新鮮組織用甲醛液固定。【染色方法】(1)石蠟切片厚5μm，脫蠟至水。(5)蒸餾水速洗l~2次。(9)蒸餾水速洗或不經(jīng)水洗直接用濾紙輕輕吸去銨銀溶液。(13)蒸餾水稍洗。(17)水洗2~3min。有髓鞘纖維經(jīng)HE染色在光鏡下，可見其分三部分：軸突、髓鞘和神經(jīng)膜；無髓鞘纖維是一些較細(xì)的感覺纖維和植物神經(jīng)的節(jié)后纖維。腦和脊髓的神經(jīng)大多數(shù)屬于有髓鞘纖維。在病理檢查中往往發(fā)現(xiàn)潰變神經(jīng)纖維的原纖維發(fā)生腫脹、碎裂，繼而成為顆粒狀。三、神經(jīng)髓鞘染色原理和方法的選擇髓鞘染色通常為顯示正常和變性髓鞘，可根據(jù)病理檢查和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)性研究的實(shí)際要求而選用染色方法。常用的方法有Loyez法，Weil法，Weigert Pal法，Kultschitzky法，Luxol堅(jiān)牢藍(lán)(固藍(lán))等等。先將蘇木素溶于乙醇，放入60℃溫箱中30min，充分溶解后，加入蒸餾水，最后加碳酸鋰。(3)多次蒸餾水洗。(7)充分流動(dòng)水洗，并使之返藍(lán)黑色為止?！驹噭┡渲啤?1)LaManna液 g， g，蒸餾水加至100ml。(2)石蠟切片厚5~8μm，冰凍及火棉膠切片厚15~20μm。(6)入碳酸鋰蘇木素染液2~4 h，置56℃溫箱內(nèi)。(10)用Loyez分化液2min。3．Weil鐵礬蘇木素染色法 Berube，Powers與Clark(1965年)源于Weil(1928年)。冰凍切片應(yīng)裱在涂有蛋白或白膠的載玻片上，并在空氣中干燥。(2)B液 硫酸鐵銨[FeNH4(SO4)2(4)D液 綜合染色液，A液l份，B液1份，蒸餾水2份。(4)在B液中分色，直至灰質(zhì)和白質(zhì)可以區(qū)別為止。(8)用Darrow紅染色5~lOmin(Darrow紅25mg，蒸餾水200m1，加熱溶解過濾)?！窘Y(jié)果】變性髓鞘呈黑色，中性脂肪呈黑色，背景呈淡黃色。直到本世紀(jì) 50年代前后，Glees提出新的方法，即改進(jìn)的Bielschowsky法，才進(jìn)一步顯示包括無髓纖維在內(nèi)的各種纖維及其終末的形態(tài)改變，但是Glees法在切片上區(qū)分潰變纖維和正常纖維尚有困難，追蹤潰變纖維仍不容易。1．Nauta染色法(1957年)【操作技術(shù)與染色方法】(1)組織固定于10%甲醛液，必要時(shí)可適當(dāng)加溫和震動(dòng)以縮短固定時(shí)間(更換固定液3次)。②%~%高錳酸鉀水溶液，分別以切片試處理10及15 min，這一步是抑制未潰變纖維的關(guān)鍵；時(shí)間過短抑制不足，時(shí)間過長(zhǎng)則可使?jié)⒆兝w維不易銀染而受到抑制。③在等量的1%草酸和對(duì)苯二酚液內(nèi)消色，至少2min。以后均應(yīng)逐片處理。⑧待沉淀下沉至 70 m1刻度時(shí)小心傾去上清液，再加蒸餾水至250ml刻度處，再搖動(dòng)。然后邊搖邊慢慢滴加濃氨液至溶液幾乎透明為止( m1濃氨水， m1)。過濾于洗凈(化學(xué)潔凈)的瓶?jī)?nèi)。此時(shí)不斷輕搖，勿使切片沉底不動(dòng)。Albrecht明膠乙醇封片法：%明膠及80%乙醇約5min ，將切片撈于載玻片上，使用新濾紙略吸干。但有一些正常軸索被鍍銀成黑色。 黑色素在黑色素母細(xì)胞內(nèi)合成，黑色素母細(xì)胞起源干神經(jīng)脊，在胚胎發(fā)育過程中，由神經(jīng)脊移行到皮膚、眼和中樞神經(jīng)系統(tǒng)。 二、黑色素的病理診斷分類和染色的應(yīng)用。其它 色素性神經(jīng)瘤、透明細(xì)胞肉瘤也有黑色素存在，皮病性淋巴結(jié)炎時(shí)，淋巴結(jié)內(nèi)也可有黑色素沉著。Graham(1979年)指出它們不是通過酪氨酸酶的作用形 成，而是兒苯酚胺代謝的產(chǎn)物，這些神經(jīng)細(xì)胞沒有通過黑白素母細(xì)胞的黑色素小體。在臨床上見嚴(yán)重便秘和習(xí)慣用鼠李皮作緩瀉劑者。但還需用別的色素法作為對(duì)照用。應(yīng)指出的是，有一些黑色素用PAS反應(yīng)可呈陽性結(jié)果，曾有作者在一例透明細(xì)胞肉瘤中見到PAS陽性的黑色素反應(yīng)。 Masson Fontana 銀浸法(1929年)[固定] 10%中性甲醛液或乙醇液，不能用含有鉻酸鹽的固定液固定。(2)用蒸餾水充分洗滌。 (6)蒸餾水洗3min (7)用5%硫代硫酸鈉水溶液固定2min。(11)95%、無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。7H2O)，蒸餾水100ml。 （3）用蒸餾水洗20min（需更換3次）。(7)95%、無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固或DPX封固。含鐵血黃素用此染色法也能呈陽性，可結(jié)合鐵反應(yīng)法來鑒別。為預(yù)防反應(yīng)作用受影響，冰凍切片浸水時(shí)間不超過數(shù)秒鐘。 (2)緩沖液 溶解磷酸氫二鈉(Na2HPO4在一定之溫度中，反應(yīng)速度以pH值為轉(zhuǎn)移。 [染色方法] (1)浸切片于Dopa緩沖染色液約30min，℃。 (5)95%乙醇、無水乙醇脫水，二甲苯透明，封固（人工膠最好）欲染配色，先洗于水。而脫黑色素的方法，則是從另一方面驗(yàn)證染色所顯示的結(jié)果是否就有黑色素。通常采用此法來證實(shí)是否有黑色素存在時(shí)，切制3張連續(xù)石蠟切片，一張作HE染色，一張作黑色素染色，一張用氧化漂自脫色素法。(3)溴水脫色法 用1%溴水溶液處理切片12~24h。在上述脫色后，經(jīng)過水洗5~l0min，根據(jù)需要進(jìn)行染色，常規(guī)脫水、透明及封固。以往認(rèn)為脂褐素是從一脂類或脂蛋白衍生而來。其次在睪丸、卵巢、腎上腺網(wǎng)狀帶、精囊和神經(jīng)節(jié)細(xì)胞等處亦可出現(xiàn)。晚期脂褐素是經(jīng)完全氧化后的色素，因而失去其嗜染蘇丹和油紅性，但卻具有更大的還原性能力，顯示此種脂褐素方法較多，都是以相互比較進(jìn)行鑒別診斷。三、具體染色方法Schmoil反應(yīng)法[固定] 顯示脂褐素和黑色素，任何固定液均可。(2)鐵氰化鉀溶液 鐵氰化鉀1g，蒸餾水100ml。[染色方法](1)切片脫蠟至水。(5)充分自來水沖洗。 [結(jié)果]脂褐素呈綠色至暗藍(lán)色；黑色素呈深藍(lán)色；嗜銀細(xì)胞顆粒呈藍(lán)色；嗜鉻細(xì)胞顆粒呈綠藍(lán)色；細(xì)胞核呈紅色。其它還原物質(zhì)，如嗜鉻顆粒由于其還原鐵氰化物的能力較弱，染色時(shí)間相應(yīng)加長(zhǎng)，著色較綠。 高碘酸無色復(fù)紅法 [試劑配制] 無色復(fù)紅液：堿性復(fù)紅1g，蒸餾水200ml，lM鹽酸20ml。 (4)加入lM鹽酸20ml，稍搖勻。 (7)，搖動(dòng)1~2min后靜置1~2min時(shí)；過濾于棕色小口砂塞瓶?jī)?nèi)。 [染色方法](1)組織固定于10%甲醛液，按常規(guī)脫水包埋。(5)入無色復(fù)紅液內(nèi)，于室溫下置。(3)%高碘酸水溶液氧化5~8min。(8)置于冰箱保存待用。此時(shí)堿性復(fù)紅液的顏色將變淡。 (2)加入堿性復(fù)紅1g于煮沸后的蒸餾水內(nèi)(不要在煮沸時(shí)立即加入，否則在傾入堿性復(fù)紅徹底溶解，此時(shí)溶液為深紅色)。 (4)可用1%硝酸鐵代替三氯化鐵作反應(yīng)劑。 (2)由于一般組織中有少量的還原劑，背景很快就著色，因此，染色應(yīng)控制在最恰當(dāng)而短的時(shí)間。(7) 自來水沖洗。(3)自來水沖洗。此溶液必須新配。顯示嗜鉻顆粒，用不含醋酸的重鉻酸鹽固定液。 與膽色素、含鐵血黃素等鑒別 也需應(yīng)用脂褐素染色法進(jìn)行顯示觀察來診斷。脂褐素又分為早期脂褐素和晚期脂褐素。脂褐素主要見于老年人或者患慢性消耗性疾病者，尤以心肌和肝細(xì)胞最多見。第二節(jié) 脂 褐 素一、脂褐褐的基本概念、形狀和存在特點(diǎn)脂褐褐又稱為棕色萎縮性色素或消耗性色素。(5)過氧化氫脫色法 用10%過氧化氫液處理切片24~48h。在立式染色缸中進(jìn)行3h。使黑色素被脫色。 [結(jié)果] Dopa陽性反應(yīng)細(xì)胞漿（黑素母細(xì)胞及白細(xì)胞）呈灰色至黑色，黑素不改變顏色，膠原纖維無色或呈淺灰色。 (3)每30min鏡檢1次，2~3h后染液變紅色，3~4h后染液變棕色，亦即切片染色適宜之表現(xiàn)。但此加速法促成組織濃染，用緩饅反應(yīng)可靠。甲、乙兩液分別貯藏于冰箱。緊閉瓶口，放入冰箱，可保存數(shù)周。我們要求采取新鮮組織或組織固定于5%甲醛液(至多固定2~3h)。用V (5)用1%醋酸液分化。[染色方法] (l)切片脫蠟至水。Lillie亞鐵反應(yīng)法 [固定] 10%甲醛及Carnoy液，不用含鉻鹽的固定液。(9)用1%藏紅花紅或Van Gieson染色1min。 (4)經(jīng)蒸餾水洗數(shù)次。此液貯存在棕色蘑口瓶?jī)?nèi)，置暗處過24h后可才應(yīng)用，如果此溶液貯存在冷暗處，可保存1個(gè)月，但最好于2周內(nèi)使用。除了用染色的復(fù)合試劑顯示以外，還可用單一的漂白法來證明黑色素是存在還是被去除。所以黑色素組織非常容易保存，采用一般的固定和石蠟包埋均不會(huì)丟失。有人認(rèn)為是含鐵血黃素與腸道內(nèi)細(xì)菌所產(chǎn)生的硫化氫相作用而形成的硫化鐵；也有人認(rèn)為是腸道內(nèi)吸收的蛋白質(zhì)分解而生成的黑色素、脂褐素相似的物質(zhì)。提示這種色素通過黑色素染色法，可供神經(jīng)研究的參考。但是在染色應(yīng)用上，只是用必要的情況下用黑色素染色法。另外當(dāng)黑色素很少時(shí)，黑色素染色可使黑色素容易發(fā)現(xiàn)。在病理情況下可能在全身各處含有黑色素沉著物。胞體及樹突近側(cè)端染成淡褐色。（10）脫水、透明、封片。（8）切片速經(jīng)水洗，浸于1%硫代硫酸鈉1min，再用蒸餾水洗數(shù)次。用前過濾。配好后略有氨氣味。如此反復(fù)沉淀3次。Laidlaw氨化碳酸銀液配制法：①用250m1量杯內(nèi)溶12 g硝酸銀于20m1，雙蒸水中。(4)經(jīng)蒸餾水充分洗滌。此外，切片的厚薄亦與作用的時(shí)間有關(guān)。(3)鍍銀時(shí)每次以數(shù)片為宜(如5~20片)，略水洗后按以下步驟處理。后來的改進(jìn)，如磷鉬酸、高錳酸鉀、改變的氨銀以及硝酸鈾的處理等，都是旨在增加潰變纖維的特異性，這樣對(duì)后來的技術(shù)有促進(jìn)作用。19世紀(jì)末至本世紀(jì)初，多側(cè)重于對(duì)神經(jīng)纖維髓鞘脂肪變化的研究，因而采用脂肪染色來顯示這種變化?！窘Y(jié)果】髓鞘深藍(lán)色至黑色，灰質(zhì)黃色至無色(圖35)。(6)在C液中完成分色。(2)將切片浸入D液染20 min。(3)C液 鐵氰化鉀[K3Fe(CN)6)，硼砂(Na2B4O7【試劑配制】(1)A液 蘇木素1g，無水乙醇100m1?！竟潭ā?0%甲醛液。(11)自來水充分浸洗。(8)用4%鐵明礬初步分化，此時(shí)髓鞘呈黑藍(lán)色，背景淡灰色，鏡下控制。(4)浸入4%鐵明礬水溶液12~24 h。(3)Loyez分化液 硼砂2 g， g，蒸餾水200m1。【結(jié)果】髓鞘呈藍(lán)色，底色帶淡藍(lán)色。(5)自來水洗數(shù)分鐘。【染色方法】(1)組織切片脫蠟至水(必要時(shí)在無水乙醇后加火棉膠覆蓋液進(jìn)行處理)。四、具體染色法1．Loyez蘇木素染色法【固定】10%甲醛液，石蠟切片厚5~8μm。髓鞘的染色也即脂蛋白的染色，原理有二：①髓鞘的脂質(zhì)十媒染劑一結(jié)合物+氧化后蘇木素一“色沉”(藍(lán)黑色)；②鋨酸被髓鞘還原并與髓鞘相結(jié)合，而使髓鞘呈黑色。神經(jīng)纖維在許多疾病中都出現(xiàn)髓鞘變性、脫失和軸突變性，如多發(fā)性硬化、亞急性脊髓聯(lián)合變性、急性出血性白質(zhì)腦炎、種痘后腦脊髓炎、播散性腦脊髓炎、腦橋中部髓鞘溶解、癌癥和淋巴瘤時(shí)的腦病、多發(fā)性神經(jīng)炎等。髓鞘變性可分為早期、中期和晚期三個(gè)階段。脂質(zhì)包括脂肪、卵磷脂、腦磷脂及膽固醇等。【結(jié)果】神經(jīng)元及神經(jīng)纖維呈灰黑色。(15)水洗3~5min。(11)蒸餾水洗2~3min。(7)用濾紙將切片周圍的水分吸干。(3)80%乙醇液速洗1次。(2)銨銀溶液 取20%硝酸銀水溶液20ml，滴加氫氧化銨數(shù)滴，不斷搖蕩，直至形成沉淀剛好溶解，再滴入10滴氫氧化銨，最后加蒸餾水至40m1，過濾使用。(14)乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。(10)%氯化金水溶液調(diào)色3~5 min。(6)蒸餾水洗3~5min。(2)蒸餾水洗1~2min。3．Bielschowsky改良法【固定】 甲醛液。(10)組織脫水、透明、浸蠟包埋和切片，裱于載片上。(6)在B液中浸染6~24 h。(2)放在純吡啶中，胚胎組織則放入吡啶與蒸餾水等分混合液中，l~2日。(2)B液 5ml NH4OH(濃)與40ml 2%NaOH混合。欲使背景清晰和神經(jīng)元著色較深，一般多采用之。(14)自來水洗。(10)蒸餾水洗2~3次約5~10min。(7)用新配的上述氨銀液處理2~10min。(4)切片用蒸餾水洗1 h，多次換水。逐滴加入濃氨水，邊滴邊搖蕩，使沉淀剛剛?cè)芙猓偌诱麴s水稀釋至總量為25 m1，過濾后備用(放在冰箱中保存)。1．Bielschowsky冰凍切片法引自Davenport，Windle與Beech(1934年)和Beech與Davenport(1933年)，原由 Bielschowky(1904年，1909年)所作。神經(jīng)元及神經(jīng)纖維染色在診斷和鑒別某些神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤方面也經(jīng)常應(yīng)用。某些疾病時(shí)，神經(jīng)原纖維集結(jié)，可用鍍銀染色清晰地顯示。電鏡下可見它們是粗約120197。軸突外周的構(gòu)造，有些較為復(fù)雜，外層被鞘膜包裹，稱為有髓纖維；有些比較簡(jiǎn)單，無鞘膜被覆。神經(jīng)元的胞突分為樹突與軸突兩種。神經(jīng)元的細(xì)胞體具有和其他細(xì)胞一樣的結(jié)構(gòu)，即表面有細(xì)胞膜、中有細(xì)胞質(zhì)、內(nèi)有細(xì)胞核。神經(jīng)細(xì)胞是神經(jīng)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和功能單位，所以又稱神經(jīng)元。（8）純丙酮脫水、二甲苯透明、中性樹膠封固。（4）堿性復(fù)紅染色液3min。（1）Harris蘇木素液（2）堿性復(fù)紅染色液 ，蒸餾水100ml。 第二節(jié) 早期心肌病變組織染色早期心肌梗死是近年來被稱為早期心肌病變，從60年代開始，有許多作者都對(duì)心肌病變進(jìn)行方法學(xué)研究，其共同特點(diǎn)是選用酸（堿）性復(fù)紅對(duì)缺氧心肌進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果證明了心肌病變的可靠性，這種缺氧心肌對(duì)酸性復(fù)紅的親和力稱嗜復(fù)紅性，對(duì)堿性復(fù)紅的親和力稱為親復(fù)紅性。 胞核、纖維、肌肉、神經(jīng)膠質(zhì)纖維、纖維素、橫紋肌等均呈藍(lán)色；膠原纖維、網(wǎng)狀纖維、軟骨基質(zhì)及骨呈黃色或玫瑰紅色；粗