【正文】 action rate of polysaccharide to different degrees, but sodium hydroxide and hydrochloric acid oxalic acid is good for reducing the effect of polysaccharide hydrolysis. The optimum concentration of sodium hydroxide is , temperature 65℃。 迄今為止，幾百種天然多糖的發(fā)現(xiàn)，給人類提供了豐富的生物多聚體寶庫。隨著新方法、新手段在多糖研究上的應(yīng)用及新多糖物質(zhì)的發(fā)現(xiàn)，國內(nèi)外對真菌多糖的研究有了空前發(fā)展。干香菇的水浸物中含有組氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、擷氨酸、天門冬氨酸及天門冬素、乙酰胺、膽堿、腺嘌呤等成分，它們不僅是營養(yǎng)物質(zhì)，有些還具有降低血脂等功效。我國是香菇栽培生產(chǎn)的第一大國，因此，香菇已成為食品工業(yè)的重要資源和制藥工業(yè)的潛在資源。香菇多糖以獨(dú)特的營養(yǎng)價值，在食品及保健品開發(fā)中成為熱門的研究對象。因此有學(xué)者認(rèn)為，在腫瘤的治療過程中，殺傷腫瘤細(xì)胞與保護(hù)機(jī)體免疫功能具有同等的重要性。1．特殊免疫功能LNT（香菇多糖的簡稱）能使荷瘤或感染后機(jī)體的免疫應(yīng)答能力得以提高，其制劑在動物體內(nèi)篩選實驗中能明顯促進(jìn)體外淋巴細(xì)胞培養(yǎng)物的轉(zhuǎn)化作用。2．抗腫瘤功能大量實驗結(jié)果認(rèn)為LNT提高了NK細(xì)胞對某些血清因子的反應(yīng)性。與抗腫瘤活性關(guān)系密切的遲發(fā)性過敏反應(yīng)(DHR)也得到恢復(fù)和增強(qiáng)。LNT具有增強(qiáng)阿狀內(nèi)皮系統(tǒng)，提高識別抗原的功能。此外，香菇多糖可防止化學(xué)因素或病毒引起的致癌作用；同時它還能增強(qiáng)宿主對不同細(xì)菌、寄生蟲和病毒包括艾滋病毒等引起疾病的抵抗力。研究表明，香菇多糖能夠提高肝臟GSHPx活性，降低游泳力竭后肝臟MDA及血清GPT活性，起到抗氧化、抗損傷等保肝作用，明顯提高肝糖元的水平和運(yùn)動能力，使膈肌組織內(nèi)SOD活性升高，NOS活性、NO及MDA含量明顯降低，從而減輕膈肌線粒體自由基損傷，改善了線粒體呼吸鏈的正常功能，促進(jìn)ATP合成，加強(qiáng)膈肌能量供應(yīng)(史亞麗等，2004)。陳冠敏等(2000)用Ames試驗及活體小鼠骨進(jìn)一步驗證其抗突變功能，分別進(jìn)行鼠傷寒沙門菌微粒體酶(Ames)試驗、小鼠睪丸初級精母細(xì)胞染色體畸變試驗、小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗，各受試物劑量組與致突變物組相比，經(jīng)統(tǒng)計處理差異有顯著性(P)。尋找一種能增強(qiáng)化療療效，同時又能提高機(jī)體免疫力的藥物，是當(dāng)前腫瘤學(xué)研究的主要課題之一。LNT的藥理作用是它并非直接攻擊致病源，而是通過刺激免疫細(xì)胞成熟、分化和增殖，改善宿主機(jī)體平衡，達(dá)到恢復(fù)和提高宿主細(xì)胞對淋巴因子、激素及其它生理活性因子的反應(yīng)性。通過對LNT活性與其構(gòu)效關(guān)系的進(jìn)一步研究，結(jié)合生物工程技術(shù)及先進(jìn)設(shè)備如NMR、PMR、IRRGC、MC等的應(yīng)用，無疑能夠?qū)NT推向醫(yī)藥、食品、石油、紡織印染等工業(yè)應(yīng)用的光明前景。北方地區(qū)的氣候變化劇烈，晝夜溫差較大，適合香菇生長發(fā)育，尤其是夏季的7～9月份南方高溫季節(jié)，香菇生產(chǎn)受到影響，市場供不應(yīng)求。據(jù)分析，鮮香菇中每100克含有的粗蛋白質(zhì)為12～14克，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過一般的植物性食物蛋白含量；，磷415毫克，鈣124毫克，還含有多糖類，維生素Bl，B2和維生素C等。纖維素類的食物能夠加強(qiáng)胃腸蠕動，預(yù)防便秘，食物纖維還能吸附血液中多余的膽固醇，經(jīng)腸道排出體外。(張海嵐，2004)X射線衍射分析證明，其立體的結(jié)構(gòu)為右旋三重螺旋的六方晶系，晶格常數(shù)a=b=，c=。分支程度高而置換率低或分支程度低而置換率高均可降低其免疫激活作用。本試驗是從香菇子實體中分離多糖。早在1989年，Kaneko等人就發(fā)現(xiàn)香菇多糖對艾滋病有一定療效。王如偉等將香菇多糖注射液和化學(xué)療法并用起來治療肺癌、肝癌及晚期癌癥，發(fā)現(xiàn)LCL超過正常水平，NK細(xì)胞接近正常水平，患者LCL和NK細(xì)胞比率得到提高，機(jī)體免疫狀況得到明顯改善。而且療效好。 研究目的和意義由于香菇多糖具有抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、抗病毒等方面的生物活性，不僅是一種比較理想的藥物，也是一類重要的保健食品功能因子，因此對香菇多糖的研究備受重視。本文的研究內(nèi)容：，選擇出最適合工業(yè)生產(chǎn)的提取方法；；；，以便得到純度較高的香菇多糖；2 材料和方法 材料 從長江大學(xué)西校區(qū)附近的菜市場購買的干香菇，香菇樣品顏色正常，無發(fā)霉腐爛的現(xiàn)象。準(zhǔn)確稱取一定量的香菇子實體干品粉末，加入一定量蒸餾水，然后在一定的恒溫水浴中提取一定時間，3000rpm離心10min，測量總糖、還原糖的量。 總糖的測定采用硫酸一苯酚法，以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品。(3) 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及樣品的測定，分別置50mL量瓶中，加水至刻度，搖勻。將樣品準(zhǔn)確稀釋一定倍數(shù)，(相當(dāng)于40微克左右的多糖)，按上述步驟操作，測光密度，以標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計算樣品中多糖含量。(2)溶液的配制1mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液：。以第一份為空白，照分光光度法，在540nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。測定樣品時，將提取液準(zhǔn)確稀釋一定倍數(shù)，然后準(zhǔn)確吸取lmL置于50mL容量瓶中，加5mL的DNS，在沸水浴中煮5min后流水迅速冷卻，定容搖勻。N：稀釋倍數(shù)V：提取液的體積M：原料干重 多糖含量的計算多糖含量： * (總糖百分含量一還原糖的百分含量)???????????????????(5)其中。此法在避免多糖降解方面有較好的效果，但效果低。上層水相再用上述溶劑處理幾次，即得無蛋白質(zhì)的多糖。離心除去沉淀即得無蛋白質(zhì)的多糖提取液，由于三氯乙酸的酸性較強(qiáng)，往往會引起某些多糖的降解，所以操作必須在低溫下進(jìn)行，該法效率較高，常用于植物多糖的去蛋白。酶法脫蛋白多采用中性蛋白、果膠酶、纖維素酶和酸性蛋白酶。提取時間對多糖得率的影響由圖可以看出：當(dāng)提取時間小于2h時，隨著提取時問的增加，多糖的提取得率增加比較快，在最初的幾十分鐘里，甚至呈指數(shù)趨勢增加；但是，達(dá)到2h以后，多糖提取率則無明顯增加。圖給出不下同提取溫度下所對應(yīng)的多糖得率。取其離心分離得到的固體部分以相同的方法提取第二次和第三次，分別測量第二、三次提取液的總糖、還原糖。酸可以破壞細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，使提取得率增加，但同時也使多糖水解，所以，本論文采用較弱的草酸和濃度較稀的鹽酸提取；堿提法可以使更多的堿溶性多糖提取出來。氫氧化鈉濃度對多糖提取得率的影響氫氧化鈉的濃度（mol/L）多糖的提取得率0* 橫坐標(biāo)為氫氧化鈉溶液的濃度，mol/L。本實驗最終利用氫氧化鈉提取出香菇多糖的成品。4) 合并兩次提取液，3000rpm離心10min，將提取液的體積濃縮一倍。此法在避免多糖降解方面有較好的效果，但效果低。從論文的選題、實驗設(shè)計到論文的定稿全過程都滲透著導(dǎo)師辛勤的汗水。最后感謝我的同學(xué)，他們在我的實驗過程中，給我熱心的幫助，細(xì)心的指導(dǎo)，以及我們共同的探討，讓我的實驗得以順利的完成，在此致以最誠摯的謝意。因此，在論文完成之際，我要對我的老師致以最崇高的敬意和最真摯的感謝。 8）干燥 即可得到香菇多糖的粗成品 第6頁（共30頁）2. 實驗所得的粗成品圖片：參考文獻(xiàn)[1] 朱德燕. 幾種香菇多糖純化方法的比較[J]. 農(nóng)產(chǎn)品加工（創(chuàng)新版），2009，（04）：55~57[2] 李紅衛(wèi)，周國燕，鍋慧青，胡琦瑋. 從香菇中浸提香菇多糖的方法對比研究[J]. 食品科學(xué)，2008，（11）：23~25[3] 白玉靜，佟麗華. 香菇多糖提取工藝和含量測定方法研究[J]. 黑龍江醫(yī)學(xué)科學(xué)，2006，（01）:57~59 [4] 陳東海，張謙益，宋宏光. 富含香菇多糖的功能性梨汁保健飲料的研制[J]. 工藝技術(shù)， 2005, 26（01）：136~139[5] 耿安靜. 香菇多糖的制備以及結(jié)構(gòu)特性和生物活性的研究[D]. 廣州：華南理工大學(xué)，2010[6] 申進(jìn)文，馮雅嵐，莊慶利. 香菇子實體多糖提