【正文】 小干擾 RNA small interference RNA(siRNA) 參與轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)；對外源入侵 RNA基因的切割 目 錄 （一）核內(nèi)小 RNA與核糖核蛋白結(jié)合共同參與mRNA前體加工 snRNA 長度（ nt） 剪接 hnRNA的靶位點(diǎn) U1 U2 U4 U5 U6 U7 165 189 145 115 106 63 5?端 內(nèi)含子腺苷酸分支點(diǎn) 5?端，補(bǔ)充分支點(diǎn) 轉(zhuǎn)酯化反應(yīng)， 3?剪接點(diǎn)， 使外顯子連接 轉(zhuǎn)酯化反應(yīng) 組蛋白 H3前體的 mRNA3?末端裂解 高等真核細(xì)胞 snRNA的特征 目 錄 （二）催化性小 RNA參與 RNA剪接加工 一些小 RNA分子具有催化特定 RNA降解的活性 ，在 RNA合成后的剪接中具有重要作用 。 （一）核酸可被酸、堿水解 目 錄 NHNNHNONH2NHNNNO HNH2GNHNHOONNO HOHUNHNHOOC H3NNO HOHC H3TNNNHNN H2NHNNHNN HANNHN H2ONHNHN HOC（二）核酸是兩性分子 ? 堿基可發(fā)生互變異構(gòu) ? 堿基在體液環(huán)境中以堿性解離為主 ? 核酸分子是酸性化合物 目 錄 （三）核酸溶液具有高分子性質(zhì) ? 黏滯度 ： DNA 〉 RNA dsDNA 〉 ssDNA ? 沉降系數(shù) ： 溶液中的核酸在離心力場中可下沉。 融 解 溫 度 Tm7 6 1 0 0 C9 69 28 88 48 00 . 5 00 . 7 00 . 6 50 . 6 00 . 5 5光密度（260nm）5 0 %5 0 %目 錄 ? Tm： 變性是在一個相當(dāng)窄的溫度范圍內(nèi)完成 ， 在這一范圍內(nèi) ， 紫外光吸收值達(dá)到最大值的 50%時的溫度稱為 DNA 的解鏈溫度 ， 又稱熔解溫度 (melting temperature, Tm)。 減色效應(yīng) DNA復(fù)性時，其溶液 A260降低。 這種雜化雙鏈可以在不同的 DNA單鏈之間形成 ， 也可在 RNA單鏈之間形成 ， 甚至還可以在 DNA單鏈和 RNA單鏈之間形成 ， 其前提條件是兩種單鏈分子之間存在著一定程度的 堿 基 配 對 關(guān) 系 。這些分子可以是有機(jī)小分子 ， 也可以是生物大分子 。 核酸與蛋白質(zhì)的相互作用最為常見。 DNA的磷酸骨架中還能夠發(fā)生 磷硫?；揎?，從而解釋了為什么硫元素結(jié)合到 DNA骨架上會使之降解的奧秘。 目 錄 （一）按底物專一性分類 ?DNA酶 (deoxyribonuclease, DNase)： 專一降解 DNA ?RNA酶 (ribonuclease, RNase)： 專一降解 RNA 一、核酸酶有多種 目 錄 （二）按對底物作用方式不同分類 核酸內(nèi)切酶： 分為限制性核酸內(nèi)切酶和非特異性限制性核酸內(nèi)切酶 核酸外切酶： 5?→3 ?或 3?→5 ?核酸外切酶 （三）按對底物二級結(jié)構(gòu)的專一性分類 雙鏈酶： 作用于雙鏈核酸 單鏈酶： 作用于單鏈核酸 目 錄 二、核糖核酸酶是一類 RNA內(nèi)切酶 （一）胰核糖核酸酶識別嘧啶核苷酸 （二）核糖核酸酶 T1識別鳥嘌呤核苷酸 （三）核糖核酸酶 T2識別腺嘌呤核苷酸 目 錄 3種核酸酶作用位點(diǎn) 目 錄 三、不同脫氧核糖核酸酶有不同的作用方式和產(chǎn)物 （一）胰脫氧核糖核酸酶 Ⅰ 可切割單鏈 /雙鏈 DNA （二）脾脫氧核糖核酸酶 Ⅱ 產(chǎn)物是 3?磷酸末端的寡聚核苷酸 （三） 3?外切酶活性是 BAL 31核酸酶的主要功能 （四）限制性內(nèi)切核酸酶具有位點(diǎn)特異性 目 錄 四、 N糖苷酶可移去堿基 N糖苷酶 （ glycosidase） 有多種 ， 各種非特異或堿基特異的糖苷酶可以水解核苷酸的 N糖苷鍵 ，去除核苷酸的堿基 。 ? 核酸酶種類多 ， 功能多樣 。 構(gòu)成 tRNA的稀有堿基就是化學(xué)修飾的結(jié)果 。 作用方式可以是共價的 ， 也可以是非共價的 。 目 錄 目 錄 DNADNA 雜交雙鏈分子 變性 復(fù)性 不同來源的DNA分子 目 錄 目 錄 核酸分子雜交的應(yīng)用 （ 1） Southern印跡 可檢測 DNA （ 2） Northern印跡 用于檢測 RNA 此外， 斑點(diǎn)印跡雜交 (Dot blot)和 DNA芯片(DNA micray)技術(shù)也是 利用核酸雜交原理設(shè)計(jì)的。 目 錄 （四）利用變性、復(fù)性可進(jìn)行分子雜交 將不同來源的 DNA混合在一起 ， 經(jīng)熱變性后 ， 讓其慢慢冷卻復(fù)性 。 Tm值是 DNA變性的重要參數(shù) Tm值的經(jīng)驗(yàn)公式是： Tm = +（ %G+C） 目 錄 （三）變性的 DNA可以復(fù)性 DNA復(fù)性 (renaturation)的定義 當(dāng)變性條件緩慢地除去后，兩條解離的互補(bǔ)單鏈可重新配對結(jié)合成為雙螺旋結(jié)構(gòu)，或恢復(fù)局部雙螺旋結(jié)構(gòu)。 目 錄 （四）核酸具有紫外線吸收特性 ? 核酸的紫外吸收（ OD260） 單核苷酸 〉 ssDNA（或 RNA） 〉 dsDNA 目 錄 目 錄 1. DNA或 RNA的定量 A260= 50μg/ml雙鏈 DNA 40μg/ml單鏈 DNA（或 RNA） 20μg/ml寡核苷酸 2. 判斷核酸樣品的純度 DNA純品 : A260/A280 = RNA純品 : A260/A280 = A260的應(yīng)用 目 錄 二、核酸 變性、復(fù)性是很多分子生物學(xué)技術(shù)操作的基礎(chǔ) 定義 ： 核酸的變性（ denaturation）指 DNA雙螺旋之間的氫鍵斷裂變成單鏈、或 RNA局部氫鍵斷裂變成線性單鏈結(jié)構(gòu)的過程 方法： 過量酸，堿，加熱，變性試劑如尿素以及某些有機(jī)溶劑如乙醇、丙酮等 變性后其它理化性質(zhì)變化： A260增高 粘度下降 比旋度下降 浮力密度升高 酸堿滴定曲線改變 生物活性喪失 （一）核酸變性是雙鏈解離為單鏈的過程 目 錄 DNA變性的本質(zhì)是雙鏈間氫鍵的斷裂 目 錄