《蛋白質(zhì)復(fù)性》ppt課件(文件)
【正文】 蛋白質(zhì)分子內(nèi)和分子間的各種化學(xué)鍵，使多肽伸。 ，蛋白質(zhì)成為失去了生物學(xué)活性伸展肽鏈 蛋白質(zhì)體外復(fù)性的常用方法 : \透析 \超濾復(fù)性法； ：表面活性劑、 PEG、分子伴侶等； 3.反相膠團復(fù)性法、雙水相體系復(fù)性法； 4. 層析折疊復(fù)性（固相復(fù)性）：凝膠過濾層析（ GF）、親和層析（ AFC） 、離子交換層析（ IEC） 、疏水層析（ HIC）等 。為將包涵體充分溶解，需加入還原劑（如二硫蘇糖醇 DTT、 GSH、 β－巰基乙醇 βME）打開蛋白質(zhì)中所有二硫鍵，一般是 50100mM βME或 DTT（對于目標(biāo)蛋白沒有二硫鍵的有時也應(yīng)使用還原劑，因為含SS的雜蛋白會影響包涵體的溶解）。 5）重組蛋白所處的環(huán)境：發(fā)酵溫度高時容易形成包涵體。 減少包涵體形成的策略 : 1）降低重組菌的生長溫度：較低的生長溫度降低了無活性聚集體形成的速率和疏水相互作用，從而可減少包涵體的形成。 ? 開發(fā)實用的設(shè)備。 ? 缺點： 一旦復(fù)性時發(fā)生聚沉副反應(yīng)，使得柱堵塞且不可再生 → 經(jīng)濟損失較大 。 蛋白質(zhì)復(fù)性時聚集反應(yīng)的抑制 常用的蛋白質(zhì)復(fù)性添加劑 復(fù)性添加劑 復(fù)性蛋白質(zhì) GdmCl 熒光假單孢菌脂肪酶，溶菌酶，碳酸酐酶 II，干擾素 β多肽 尿素 豬生長激素，溶菌酶， IGF1，干擾素 β 多肽 L精氨酸 熒光假單孢菌脂肪酶，雞卵清溶菌酶， α糖苷酶 鹽類 (NH4)2SO4 溶菌酶 糖類 甘油熒光假單孢菌脂肪酶，溶菌酶， IGF1 蔗糖 IGF1 葡萄糖 溶菌酶 N乙?；咸前? 溶菌酶 肌氨酸 溶菌酶 蛋白質(zhì)復(fù)性時聚集反應(yīng)的抑制 表面活性劑類 Chaps TGFβ類蛋白質(zhì)，碳酸酐酶 II Tween 人生長激素 SDS 干擾素 β多肽 月桂?；“彼徕c 單鏈 Fv片段 十二烷基麥芽糖 MHC Triton X100 碳酸酐酶 II PEG 碳酸酐酶 II 十八烯甘油 碳酸酐酶 II 單十二?；姿狨? 溶菌酶 硫代甜菜堿 雞卵清溶菌酶 短鏈醇 正戊醇，正己醇， 碳酸酐酶 環(huán)己醇 蛋白質(zhì)復(fù)性的促進劑 分子內(nèi)沒有 SS鍵的蛋白質(zhì)復(fù)性相對比較簡單，只需抑制聚集反應(yīng)，不涉及 SS鍵的形成。分子伴侶和折疊酶不僅可在細(xì)胞內(nèi)調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的折疊和聚集過程的平衡，而且可在體外促進蛋白質(zhì)折疊復(fù)性。如胰島素生長因子 I的復(fù)性，除了在復(fù)性液中加入 Cu2+和Mg2+、 2mol尿素、鹽類（ 1mol/L NaCl、 DTT）外，還加入乙醇、甘油等。如 Chaps、 Triton X100、磷脂、十二烷基麥芽糖苷、磺酸甜菜堿等對蛋白質(zhì)復(fù)性有促進作用。天然蛋白質(zhì)即由第二個中間體形成。 2. 對于某些需要輔因子才表現(xiàn)活性的蛋白質(zhì)，輔因子、配基、或底物具有很好促進折疊的作用。 例：人 ?干擾素的后處理工藝 發(fā)酵液
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