bd流式基礎(chǔ)知識-qj(文件)
【正文】 ? 通常使用 “ 散點(diǎn)圖 ” 來看散射光信號 ? 散點(diǎn)圖上的一個點(diǎn)就代表一個細(xì)胞顆粒的數(shù)據(jù) eg. Major leucocyte subpopulations can be differentiated using FSC and SSC. Figure: Cell subpopulations based on FSC vs SSC Dual Parameter dotplot 流式細(xì)胞儀檢測信號 Injector Tip Fluorescence signals Focused laser beam Sheath fluid Laser beam 1. 散射光信號 自發(fā)熒光信號 特異性熒光信號 熒光信號 （ Fluoresent light ） 雙色熒光散點(diǎn)圖 熒光強(qiáng)度 （ Fluoresence intensity） ? 熒光信號的強(qiáng)度代表被測細(xì)胞膜表面抗原強(qiáng)度或細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)濃度 。流式細(xì)胞術(shù) For FCM Training BD: 錢 璟 重慶 流式細(xì)胞術(shù)？ 對于處在流動狀態(tài)中的細(xì)胞或顆粒各項特性進(jìn)行檢測 Flow Cyto metry in motion cell measure ? 特點(diǎn)： 速度快 (≥ 10000cells/s) 特異性強(qiáng)，靈敏度高 ( MRD:1/10000 ) 多參數(shù)分析、活細(xì)胞分選 ? 研究對象 : 單細(xì)胞懸液 可檢測的樣本種類多樣：外周血、骨髓、細(xì)胞穿刺液、洗脫液、實(shí)體組織、培養(yǎng)細(xì)胞、藻類等 流式細(xì)胞術(shù) FACSVerse Accuri C6 LSR forttesa 現(xiàn)代流式細(xì)胞儀 (Flow cytometer) FL2 PE SSC FSC 電子系統(tǒng) 計算機(jī)系統(tǒng) FL3 PerCP, Cy5 FL1 FITC Light detectors 液流系統(tǒng) 光學(xué)系統(tǒng) laser 流式細(xì)胞儀工作流程 流式細(xì)胞儀的構(gòu)造 1. 細(xì)胞樣本成單列依次通過光檢測區(qū) 液流系統(tǒng) 2. 激發(fā)并收集各種光信號 3. 光信號轉(zhuǎn)換成電信號，數(shù)字化處理 4. 數(shù)字信號傳入計算機(jī) 光學(xué)系統(tǒng) 電子系統(tǒng) 計算機(jī)系統(tǒng) 分選系統(tǒng) 5. 活細(xì)胞分選 液流系統(tǒng) 流動室（ Flow cell） Laser Sample 流體動力學(xué)聚焦 鞘液： sheath Sheath Sample Stream Cell — 樣本流和鞘液流的驅(qū)動一般采用加正壓的方法 — 鞘液壓力恒定，流速不變 — 通過調(diào)節(jié)樣本壓力調(diào)節(jié)樣本進(jìn)樣速率 液流系統(tǒng) 液流驅(qū)動系統(tǒng) 調(diào)節(jié)樣本進(jìn)樣速度 樣本流與鞘液壓力差改變，樣本流直徑改變，細(xì)胞間距改變 10 psi 10 psi
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