植物原生質(zhì)體的分離實(shí)驗(yàn)(文件)
【正文】 色與觀察 取豆芽的根尖 ↓用刀片縱切根尖 放入中性紅染液滴中，染色5~10min。實(shí)驗(yàn)報告（1）. 繪口腔上皮細(xì)胞示線粒體的形態(tài)與分布 （2）. 繪蟾蜍胸骨劍突軟骨細(xì)胞示液泡系的形態(tài)與分布實(shí)驗(yàn)五 葉綠體的分離與熒光觀察葉綠體是植物細(xì)胞所特有的能量轉(zhuǎn)換細(xì)胞器，光合作用就是在葉綠體中進(jìn)行的, 由于具有這一重要功能，所以葉綠體一直是細(xì)胞生物學(xué)、遺傳學(xué)和分子生物學(xué)的重要研究對象。 實(shí) 驗(yàn) 原 理 將組織勻漿后懸浮在等滲介質(zhì)中進(jìn)行差速離心，是分離細(xì)胞器的常用方法。 葉綠體的分離應(yīng)在等滲溶液()中進(jìn)行, 以免滲透壓的改變使葉綠體到損傷。 利用熒光顯微鏡對可發(fā)熒光的物質(zhì)進(jìn)行檢測時，將受到許多因素的影響，如溫度、光、淬滅劑等。 : 500ml燒杯2個, 250ml量筒1個, 滴管20支, 10ml刻度離心管20支, 試管架5個，紗布若干，無熒光載片和蓋片各4片。 2. 利用組織搗碎機(jī)低速(5000r/min)勻槳3~5min。 5. 將上清液在3000r/min下離心5min。 (2)在熒光顯微鏡下觀察葉綠體的直接熒光。 (2)在熒光顯微鏡下觀察其直接熒光。 3. 加入吖啶橙染色后，葉綠體可發(fā)出桔紅色熒光，而其中混有的細(xì)胞核則發(fā)綠色熒光。 2. 在熒光顯微鏡下，葉綠體發(fā)出火紅色熒光，但其熒光強(qiáng)度要比游離葉綠體弱, 氣孔發(fā)綠色熒光，兩保衛(wèi)細(xì)胞內(nèi)的火紅色葉綠體則環(huán)繞氣孔排列成一圈。 2. 在熒光顯微鏡下，觀察葉綠體的自發(fā)熒光時，更換濾鏡系統(tǒng)，葉綠體的顏色是否有變化？ 3. 游離葉綠體和整體細(xì)胞內(nèi)的葉綠體，在熒光顯微鏡下，其顏色和強(qiáng)度有無差異？為什么？ 思 考 題 1. 葉綠體分離的實(shí)驗(yàn)原理是什么？在分離葉綠體時應(yīng)注意些什么問題？ 2. 普通光學(xué)顯微鏡與熒光顯微鏡有何異同點(diǎn)？ 12 / 12。 3. 用吖啶橙染色后，葉綠體則發(fā)出桔紅色熒光，細(xì)胞核可發(fā)出綠色熒光, 氣孔仍為綠色。 (2)保衛(wèi)細(xì)胞: 為構(gòu)成氣孔的成對存在的腎形細(xì)胞；(3)葉肉細(xì)胞: 為排列成柵狀的長形和橢圓形細(xì)胞。 實(shí) 驗(yàn) 結(jié) 果 一、葉綠體的分離和觀察 1. 普通光鏡下，可看到葉綠體為綠色橄欖形，在高倍鏡下可看到葉綠體內(nèi)部含有較深的綠色小顆粒，即基粒。 二、菠菜葉手切片觀察 用剔須刀片將新鮮的嫩菠菜葉切削出一斜面置于載玻片上，滴加1~，加蓋片后輕壓，置顯微鏡下觀察。 6. 、 7. 取葉綠體懸液一滴滴于載玻片上，加蓋玻片后即可在普通光鏡和熒光顯微鏡下觀察。 4. 取濾液4ml在1000r/min下離心2min。 三、試劑 ，%吖啶橙(acridine orange)。另外，在制作熒光顯微標(biāo)本時最好使用無熒光載片、蓋片和無熒光油。然后，在3000r/min的條件下離心5min，即可獲得沉淀的葉綠體(混有部分細(xì)胞核)。在一給定的離心場中，同一時間內(nèi)，密度和大小不同的顆粒其沉降速率不同。 實(shí) 驗(yàn) 目 的 1. 通過植物細(xì)胞葉綠體的分離, 了解細(xì)胞器分離的一般原理和方法。然后，由生長點(diǎn)向延長區(qū)觀察，在一些已分化長大的細(xì)胞內(nèi)，液泡的染色較淺，體積增大，數(shù)目變少。最好現(xiàn)用現(xiàn)配，以保持它的充分氧化能力。 試劑（1）Ringer溶液： 氯化鈉 () 氯化鉀 氯化鉀 氯化鈣 蒸餾水 100ml （2）10%、1/3000中性紅溶液： Ringer液，稍加熱 (30~40℃)使之很快溶解，用濾紙過濾，裝入棕色瓶于暗處保存，否則易氧化沉淀，失去染色能力
教學(xué)教案相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1