植物原生質體的分離實驗(文件)
【正文】 色與觀察 取豆芽的根尖 ↓用刀片縱切根尖 放入中性紅染液滴中，染色5~10min。實驗報告（1）. 繪口腔上皮細胞示線粒體的形態(tài)與分布 （2）. 繪蟾蜍胸骨劍突軟骨細胞示液泡系的形態(tài)與分布實驗五 葉綠體的分離與熒光觀察葉綠體是植物細胞所特有的能量轉換細胞器，光合作用就是在葉綠體中進行的, 由于具有這一重要功能，所以葉綠體一直是細胞生物學、遺傳學和分子生物學的重要研究對象。 實 驗 原 理 將組織勻漿后懸浮在等滲介質中進行差速離心，是分離細胞器的常用方法。 葉綠體的分離應在等滲溶液()中進行, 以免滲透壓的改變使葉綠體到損傷。 利用熒光顯微鏡對可發(fā)熒光的物質進行檢測時，將受到許多因素的影響，如溫度、光、淬滅劑等。 : 500ml燒杯2個, 250ml量筒1個, 滴管20支, 10ml刻度離心管20支, 試管架5個，紗布若干，無熒光載片和蓋片各4片。 2. 利用組織搗碎機低速(5000r/min)勻槳3~5min。 5. 將上清液在3000r/min下離心5min。 (2)在熒光顯微鏡下觀察葉綠體的直接熒光。 (2)在熒光顯微鏡下觀察其直接熒光。 3. 加入吖啶橙染色后，葉綠體可發(fā)出桔紅色熒光，而其中混有的細胞核則發(fā)綠色熒光。 2. 在熒光顯微鏡下，葉綠體發(fā)出火紅色熒光，但其熒光強度要比游離葉綠體弱, 氣孔發(fā)綠色熒光，兩保衛(wèi)細胞內的火紅色葉綠體則環(huán)繞氣孔排列成一圈。 2. 在熒光顯微鏡下，觀察葉綠體的自發(fā)熒光時，更換濾鏡系統(tǒng)，葉綠體的顏色是否有變化？ 3. 游離葉綠體和整體細胞內的葉綠體，在熒光顯微鏡下，其顏色和強度有無差異？為什么？ 思 考 題 1. 葉綠體分離的實驗原理是什么？在分離葉綠體時應注意些什么問題？ 2. 普通光學顯微鏡與熒光顯微鏡有何異同點？ 12 / 12。 3. 用吖啶橙染色后，葉綠體則發(fā)出桔紅色熒光，細胞核可發(fā)出綠色熒光, 氣孔仍為綠色。 (2)保衛(wèi)細胞: 為構成氣孔的成對存在的腎形細胞；(3)葉肉細胞: 為排列成柵狀的長形和橢圓形細胞。 實 驗 結 果 一、葉綠體的分離和觀察 1. 普通光鏡下，可看到葉綠體為綠色橄欖形，在高倍鏡下可看到葉綠體內部含有較深的綠色小顆粒，即基粒。 二、菠菜葉手切片觀察 用剔須刀片將新鮮的嫩菠菜葉切削出一斜面置于載玻片上，滴加1~，加蓋片后輕壓，置顯微鏡下觀察。 6. 、 7. 取葉綠體懸液一滴滴于載玻片上，加蓋玻片后即可在普通光鏡和熒光顯微鏡下觀察。 4. 取濾液4ml在1000r/min下離心2min。 三、試劑 ，%吖啶橙(acridine orange)。另外，在制作熒光顯微標本時最好使用無熒光載片、蓋片和無熒光油。然后，在3000r/min的條件下離心5min，即可獲得沉淀的葉綠體(混有部分細胞核)。在一給定的離心場中，同一時間內，密度和大小不同的顆粒其沉降速率不同。 實 驗 目 的 1. 通過植物細胞葉綠體的分離, 了解細胞器分離的一般原理和方法。然后，由生長點向延長區(qū)觀察，在一些已分化長大的細胞內，液泡的染色較淺，體積增大，數(shù)目變少。最好現(xiàn)用現(xiàn)配，以保持它的充分氧化能力。 試劑（1）Ringer溶液： 氯化鈉 () 氯化鉀 氯化鉀 氯化鈣 蒸餾水 100ml （2）10%、1/3000中性紅溶液： Ringer液，稍加熱 (30~40℃)使之很快溶解，用濾紙過濾，裝入棕色瓶于暗處保存，否則易氧化沉淀，失去染色能力
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