【正文】 ................................................................................. 24 五種烤煙品種對煙草青枯病的抗病性試驗 ............................................................................ 24 青枯假單胞桿菌的藥劑篩選試驗 ............................................................................................ 27 農(nóng)用鏈霉素的抑菌活性 ................................................................................................. 28 多菌靈的抑菌活性 ......................................................................................................... 28 蜂膠的抑菌活性 ............................................................................................................. 28 復(fù)配 I（農(nóng)用鏈霉素 +蜂膠）的抑菌活性 .................................................................... 28 復(fù)配 II（多菌靈 +蜂膠）的抑菌活性 ........................................................................... 29 幾種藥劑處理對煙草青枯病防治的綜合評價 ............................................................. 29 室內(nèi)盆栽藥效試驗 .................................................................................................................... 29 田間藥效試驗 ............................................................................................................................ 30 ...................................................................................................................................................... 30 煙草青枯病的接種方法 ............................................................................................................ 30 五種烤煙品種對青枯假單胞桿菌的抗性 ................................................................................ 30 蜂膠對青枯假單胞桿菌的抑制效果 ........................................................................................ 31 蜂膠對煙草青枯病的防治效果 ................................................................................................ 31 盆栽試驗與田間藥效試驗中防效的比較 ................................................................................ 32 煙草青枯病的防治 .................................................................................................................... 32 ...................................................................................................................................................... 32 參考文獻 ................................................................................................................................................. 34 致 謝 ................................................................................................................................................... 39 蜂膠對煙草青枯病防治效果的初步研究 1 摘要 在有機煙葉生產(chǎn)過程中，不能使用任何化學(xué)合成的農(nóng)藥 ， 所以 對蜂膠 的防治效果進行了 測試。盡我所 知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得云南農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。分別通過藥劑篩選實驗、 抗 病性實驗、盆栽實驗及 田間藥效實驗，為蜂膠防治煙草青枯病提供了初步依據(jù)： 1． 抗 病性實驗中， 通過針刺接種方法與注射接種方法的比較，表明注射接種能使植株更易更快發(fā)病，易于本實驗研究； 通 過 紅花大金元、 NC29 MSK32云 8云 97 五個烤煙品種對青枯假單胞桿菌的 抗病 性 試驗 ，結(jié)果表明 紅花大金元與云 87 為高感品種， MSK326 與云 97 為中感品種， NC297 為中抗品種，生產(chǎn)種植中應(yīng)選種 NC297。 Pseudomonas solanacearum 。在煙草種植過程中，煙草病害是影響煙草產(chǎn)量、品質(zhì)的重要因素，因此世界各煙草栽培國均高度重視病害防治。真菌病害中，煙草黑脛病、 根黑腐病 和赤星病為害最為嚴重。做好煙草苗期病害的綜合防治，是培育足夠壯苗、提高 煙葉產(chǎn)、質(zhì)量，獲得較好經(jīng)濟效益的基礎(chǔ)性工作。 目前在中國，長江流域及其以南煙區(qū)普 遍發(fā)生，個別年份常常暴發(fā)流行，造成毀滅性損失。目前 ， 該病造成的損失已居各類病害的第 4 位，必須重視該病的防治工作。菌體桿狀，革蘭氏染色陰性，菌體大小為 ～ ～ μm，極生鞭毛 1～ 4 根，不形成莢膜和芽孢，為好氣性細菌，在兼氣下培養(yǎng)，其毒力迅速喪失。在 TTC 培養(yǎng)基上，菌落中央呈粉紅色，周圍乳白色流動性較強（鄭繼法等， 1998） [6]。莖部發(fā)病后，外表出現(xiàn)黑色條斑，發(fā)病嚴重時黑色條斑一直延伸到煙株頂部，將病株莖部橫切，可見維管束變成褐色，用力擠壓切口，會從導(dǎo)管中滲出黃白色乳狀粘液，即細菌 “菌膿 ”[7]。 青枯雷爾氏菌 (Ralstonia solanacearum)寄主范圍雖然廣泛，但菌株間的致病性具有明顯寄主?；?[9,10]。而且進一步蜂膠對煙草青枯病防治效果的初步研究 5 的 研究表明，不同地區(qū)來源的煙草青枯病菌株， 對其他不同寄主植物的致病性以及對煙草不同品種的致病性都有顯著差異 [13]。來源不同的菌株之間致病性喪失的速率有很大差異。這可能是該菌易變異的主要原因之一。煙草青枯菌的生化型變異很大，不同來源的菌株其生化型有很大差異 [11,17]，而且菌株經(jīng)長時間保存后，其所屬生化型也會發(fā)生變化 [17]。在自然或人工培養(yǎng)條件下，青枯菌易產(chǎn)生無毒突變體，其生化型也發(fā)生變化，在同一個地區(qū)和同一寄主上可以分離到生化型不同的菌株。 在自然條件下，病原菌通常是從煙株的根部侵入，而且在根系又傷口的條件下更容易侵入。但是，在接種細菌數(shù)量很大的情況下，即使沒有傷口也能侵入。 青枯病菌引起多種植物的致死性枯萎，主要通過根和莖的傷口 ， 或次生根的根冠進入植物體，侵染寄主的木質(zhì)部，然后在整個維管束中蔓延，引起嚴重的萎蔫，最終導(dǎo)致植物死亡。 20 世紀 80 年代中期以來，已從分子水平上來研究這些因素的作用。 蜂膠對煙草青枯病防治效果的初步研究 7 由于各地地理環(huán)境和氣候條件不同， 青枯病在各地區(qū)的發(fā)生消長態(tài)勢存 在很大差異。煙草青枯病發(fā)生危害與品種、耕作類型、栽培管理、地形地勢等有密切關(guān)系 [29]。同一省區(qū)平原與山區(qū)發(fā)病時期也不同，山區(qū)比平原發(fā)病稍晚一些 [30]。濕度是影響該病發(fā)病流行的另一重要因素。 土質(zhì)粘重易板結(jié)或土壤含沙量過高都易誘發(fā)病害。種子一般是不帶菌的。在諸多因素中，帶菌土壤是最重要的初侵染源。 蜂膠對煙草青枯病防治效果的初步研究 8 青枯病的防治長期以來都是許多學(xué)者探索的問題。 從理論上講，青枯病最根本的防治方法是培育和推廣抗病品種 [32]，國外已有這方面報道。周清明、匡傳富、林海、潘建菁、巫升鑫等 [3438]對青枯病抗病品種篩選進行了大量的研究，結(jié)果發(fā) 現(xiàn)沒有免疫品種，只有少數(shù)幾個品種表現(xiàn)抗病，多數(shù)為中感和高感品種。 （ 1） 輪作 對于細菌性青枯病的防治，前人已做了大量的工作，提出的農(nóng)業(yè)防治措施主要是輪作。 （ 2） 培育和使用無病壯苗 選擇地勢平坦、背風向陽、交通方便、有清潔水源的地方作苗床地，前作不能為茄科作物。 （ 4） 農(nóng)事操作 多雨的地區(qū)，提倡高起壟、高培土技術(shù) ； 雨季做到煙田無積水，健全排灌系統(tǒng)，防止串灌和雨水 串流，以減少病原在田間擴散傳播。張永春等 [41]的研究表明，使用堆漚圈肥的土壤對青枯病的發(fā)生具有一定的抑制作用，可推遲其始發(fā)病期，降低發(fā)病程度。用于青枯病生物防治的因子主要集中于弱毒力的青枯假單孢桿菌 [44]、鏈霉菌 [45]、假單胞桿菌 [46]、菌根真菌和芽孢桿菌 [47]。陳永惠 [52]經(jīng)室內(nèi)毒力 測定，田間小區(qū)試驗和大面積示范試驗，參試的 12 種藥劑中， 90%乙霜青可濕性粉 劑 防治青枯病的效果較好，小區(qū)試驗防治效果， 1 000倍液為 %～%， 1 500 倍為 %～ %，大田在 1 500 倍兩次用藥條件下，各地的平均防效達 %～ %；盧洪興等 [53,54]的研究也表明， 90%乙霜青可溶性粉劑防治煙草青枯病效果顯著， 好 于 1 000 萬單位硫酸鏈霉素，其防治效果可達 80%以上；孔凡玉 [55]等在 1999—2022 年進行了 20%青枯靈可濕性粉劑 400 倍、 60 倍、 800 倍 3 個處理防治煙草青枯病藥效試驗，結(jié)果表明， 400倍、 600倍兩個處理平均防效在 %～%，每公頃可挽回經(jīng)濟損失 1 740 元以上。 Harrison 等 [56]在煙草根部接種 青枯病菌的死菌來誘發(fā)植物體的抗性，誘導(dǎo)后的植株顯示出了對青枯病菌的強烈抑菌作用。但是植株體內(nèi)可檢測的 cecropin B蛋白水平和對青枯病的抗性并未提高，很可能是由于 cecropin B被植物內(nèi)生蛋白酶降解的原因。李乃堅等 (1998)應(yīng)用花粉管通道技術(shù)將天蠶抗菌 肽 B 基因轉(zhuǎn)入煙草子房，經(jīng)多世代接種青枯菌鑒定及各項檢測表明，抗菌 肽 B基因已整合到煙草基因組并傳遞到后代中，田間發(fā)病率和病情指數(shù)分析顯示 T T4代轉(zhuǎn)基因株系抗青枯病能力有明顯提高。田長恩等 (2022)用花粉管通道法將柞蠶抗菌膚 D 基因?qū)敕?，得到了具有較強青枯病抗性的轉(zhuǎn)基因后代。 蜂膠是蜜蜂用于維持整個群體健 康的有效物質(zhì)，一個 5～ 6 萬只的蜂群一年只能生產(chǎn)蜂膠 70～ 110 克，被譽為 “紫色黃金 ”。具有令人喜愛的特殊的芳香味。不溶于水，微溶于松節(jié)油，部分溶于乙醇，極 易溶 于乙醚和氯仿。各類蜂膠中已知的化學(xué)成分達 300 余種。例如：根據(jù)董捷 [59]等的研究報道，在智利蜂膠、巴西蜂膠、埃及蜂膠、新西蘭蜂膠和索拉納沙漠地區(qū)蜂膠中，都檢出了各不相同的新化學(xué)成分。蜂膠中的酚類化合物，主要包括黃酮類化合物 、 酚酸類化合物以及它們的縮合體。根據(jù)陳國有 [60]等人的研究總結(jié)，蜂膠中的黃酮類化合物的生物活性主要有以下幾方面。這些研究開拓了蜂膠活性物質(zhì)的應(yīng)用領(lǐng)域，也大大提升了蜂膠應(yīng)用的前景，而其中的一些理論基礎(chǔ)也為后續(xù)研究提供了參考與借鑒。雞蛋試驗組在 60 天時大部分還比較完好 ，而對照組則全部散黃 ， 有的變臭 ， 不能食用。云南農(nóng)業(yè)大學(xué)的研究者將蜂膠制劑按 %的比例作為添加劑加人到飼料中去 ， 結(jié)果試驗組的平均體重比對照組提高 %， 每增重蜂膠對煙草青枯病防治效果的初步研究 14 1 公斤 ， 比對照組飼料消耗降低巧