【正文】 W：試樣重量（ g） ：葡萄糖與淀粉的換算系數(shù) 6 參考書 （ 1）天津輕工業(yè)學(xué)院等，《工業(yè)發(fā)酵分析》，輕工業(yè)出版社， 1980 年 附表 21 斐林試劑糖量表 消耗糖液 體 積 (毫升 ) 相當(dāng)葡萄 糖 量 (毫克 ) 100毫升糖液中所含葡萄糖的量 (毫克 ) 消耗糖液 體 積 (毫升 ) 相當(dāng)葡萄 糖 量 (毫克 ) 100 毫升糖液中所含葡萄糖的量 (毫克 ) 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 327 307 289 274 260 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 實(shí)驗(yàn)三 還原糖的測(cè)定 1 原理 原糖的測(cè)定采用快速法。 乙液：稱取 117g 酒石酸鉀鈉， 氫氧化鈉， 亞鐵氰化鉀，用水溶解并定容至 1000ml。 正式試驗(yàn)：吸取斐林試劑甲、乙液各 5 毫升，置入 250 毫升三角瓶中，加 V1 毫升試樣稀釋液和 (V21)毫升 %標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液，補(bǔ)加 [(V0+10)(V1+V2)]毫升水，搖勻，以下同標(biāo)定時(shí)操作，總耗糖量為 V毫升。 (2)滴定過程應(yīng)該始終保持在微沸狀態(tài)下進(jìn)行。 (5)斐林溶液與還原糖之間的反應(yīng)因受溶液堿性、加熱濕度和時(shí)間以及副反應(yīng)等影響，而沒有嚴(yán)格的定量關(guān)系，不能由當(dāng)量定律來(lái)求出試樣中還原糖的含量，只熊根據(jù)在相同實(shí)驗(yàn)條件下消耗相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)還原糖量或由嚴(yán)格相同的實(shí)驗(yàn)條件下得出的還原糖檢索表上 查得相應(yīng)的還原糖量來(lái)進(jìn)行計(jì)算。藍(lán)色反應(yīng)的強(qiáng)弱，同三氯醋酸中蛋白水解產(chǎn)物的多少成正比而水解產(chǎn)物的量又是同酶活力成正比例關(guān)系。 2H2O)25g，水 700ml， 85%磷酸 50m1，濃鹽酸 1000ml，文火回流10h．加入硫酸鋰 (Li2SO4)150g，蒸溜水 50m1，混勻取去冷凝器，加入幾滴液體溴，再煮沸 l5min，以驅(qū)逐殘溴及除去顏色，溶液應(yīng)呈黃色而非綠色。細(xì)菌漏斗 4~5號(hào)過濾，置于棕色瓶中保存。 A 液：稱取 %乳酸加蒸餾水定容至 1000ml。配制后應(yīng)及時(shí)使用或放入冰箱內(nèi)保存。 100μ g/m1 酪氨酸溶液 精確稱取在 l05℃烘箱中烘至恒重的酪氨酸 ，逐步加入 (HCl)使溶解，加蒸溜水定容至 100m1，其濃度為 1000μ g/m1。一般測(cè) 3 次，取平均值． 以吸光度為縱座標(biāo)。 測(cè)定 取四支試管，分別加入 1ml 稀釋酶液，其中一支為空白管，三支為平行試驗(yàn)管。 空白管中先加入 三氯乙酸溶液，再加 lml2%酪蛋白溶液， 15min 后用濾紙過濾。 WNDOK 1104 ??????蛋白酶活力 式中 K：標(biāo)準(zhǔn)曲線中 O178。 6 參考書 （ 1）鄔顯章，《酶的工業(yè)生產(chǎn)技術(shù)》，吉林科學(xué)技術(shù)出版社， 1988 年 實(shí)驗(yàn) 五 糖化酶的測(cè)定方法 1 原理 糖化型淀粉酶（即淀粉α 1， 4葡萄糖苷酶）有催化淀粉水解的作用，從淀粉分子非還原性末端開始，分解α 1， 4糖苷鍵生成葡萄糖，反應(yīng)生成的葡萄糖用次碘酸鉀法定量測(cè)定，以表示糖化性淀粉酶的活力。 (1)配制：稱取硫 代硫酸鈉 (Na2S2O3178。 (2)標(biāo)定：取在 120℃下干燥至恒重的標(biāo)準(zhǔn)重鉻酸鉀 ．精密稱量。并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。 稱取碘化鉀 (K1)36g，溶解在 100m1 蒸餾水中，再加入碘 (I2) 溶解，定容至 1000ml 貯存于棕色瓶中。 1mol/L 硫酸溶液 量取濃硫酸 ，慢慢加入于 80 m1 蒸餾水中，冷卻后定容至 l00ml，搖勻。 測(cè)定 于甲、乙兩支比色管中 (50ml)，分別加入 20%可溶性淀粉溶液 25m1 及 的醋酸 醋酸鈉緩沖液 5ml，搖勻， 40℃的恒溫水浴中預(yù)熱 (510min)。 2%可溶性淀粉 稱取可溶性淀粉 2g，然后用少量蒸餾水調(diào)勻，徐徐傾入巳沸的蒸餾水中，煮沸至透明，冷卻定容至 l00ml，此溶液需當(dāng)天配制。 吸取 10ml 待標(biāo)定的碘液放入 250m1 碘量瓶中，以 黃色時(shí)，加入 1%淀粉 指示劑 l2 滴，繼續(xù)滴定至無(wú)色為終點(diǎn)。根據(jù)本液的消耗量與重鉻酸鉀的用量，計(jì)算硫代硫酸鈉的當(dāng)量濃度。輕輕振搖使溶解，加 1mol/L 硫酸溶液 40m1搖勻，密塞。貯于棕色瓶中密封保存，配制后應(yīng)放置一星期標(biāo)定使用。 3H2O) 和冰醋酸 (CH3COOH)，用蒸餾水溶解，定容至 1000m1。 D：平行試驗(yàn)管的平均光密度 4：試管中反應(yīng)液總體積 (毫升 ) 10：反應(yīng) 10 分鐘 N：稀釋倍數(shù) W：曲的稱取量 (克 ) 5 說明 （ 1）對(duì)于同一臺(tái)分光光度計(jì)與同一批福林 酚試劑，其工作曲線 K 值可以沿用，當(dāng)另配福林 酚試劑時(shí)，工作曲線應(yīng)重作。 見空白管為對(duì)照，在 680 納米波長(zhǎng)下測(cè)光密度，取其平均值。立即加入 2ml 三氯 乙酸溶液， l5min 后用濾紙過濾。 酶液的制備 準(zhǔn)確稱取蛋白酶固態(tài)發(fā)酵的濕曲 2g，用 10~20ml 蒸餾水， 30℃浸提半小時(shí)，用濾紙過濾。 3 操作步驟 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 （ 1）按表配制各種不同濃度的酪氨酸溶液 試劑（ ml） 管 號(hào) 1 2 3 4 5 6 蒸餾水 10 8 6 4 2 0 100μ g/m1 酪氨酸 0 2 4 6 8 10 酪氨酸最終濃度（μ g/m1） 0 20 40 60 80 100 (2)測(cè)定步驟 另取 6 支試管按上表編號(hào)分別吸取不同濃度的酪氨酸 1ml，各加入 酸鈉 5m1，再加入已稀釋的福林試劑 1m1。 配制酪蛋白溶液定容時(shí)，若泡沫過多，則可加 1~2 滴酒精消泡。 取 A 液 16ml 與 B 液 1ml 稀釋 1 倍即成 。 (TCA)溶液 稱取三氯醋酸 ，定容至 1000ml。再煮沸除去之。 2 試劑 福林試劑 于 2020ml 磨口回流裝置內(nèi)加入鎢酸鈉 (Na2WO4 178。 7 參考書 （ 1）天津輕工業(yè)學(xué)院等，《工業(yè)發(fā)酵分析》，輕工業(yè)出版社， 1980 年 實(shí)驗(yàn)四 蛋白酶活力的測(cè)定方法 1 原理 根據(jù)福林試劑 (磷鉬酸與磷鎢酸混合物 )，在堿性情況下極不穩(wěn)定，可被酞類化合物還原而呈藍(lán)色反應(yīng) (鉬藍(lán)和鎢藍(lán)的混合物 )，由于蛋白質(zhì)分子中含有酚基的氨基酸 (如酪氨酸、色氨酸及苯丙氦酸等 )，它使蛋白質(zhì)或其水解產(chǎn)物也呈這個(gè)反應(yīng)，于是就可利用這個(gè)原理來(lái)測(cè)定蛋白酶活力的強(qiáng)弱， 即以酪蛋白為作用底物，在一定 pH 與溫度下，同酶液反應(yīng)，經(jīng)一定時(shí)間后，加入三氯醋酸，以終止酶反應(yīng)，并使殘余的酪蛋白質(zhì)沉淀，同水解產(chǎn)物分開，經(jīng)過濾后取濾液 (即含蛋白水解產(chǎn)物的三氯醋酸液 )。 (3)樣品液中還原糖濃度不宜過高或過低，根據(jù)預(yù)備試驗(yàn)結(jié)果，應(yīng)將樣品液稀釋至還原糖的含量在 1%左右為宜。 5 計(jì)算 %1001% 10 ?????? VnCVV ）（）還原糖（以葡萄糖計(jì) 式中 V0：斐林試劑標(biāo)定值 (毫升 ) V：斐林試劑測(cè)定值 (毫升 ) C：標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液濃度 (克 /毫升 ) n：試樣稀釋倍數(shù) v1：所取試樣稀釋液體積 (毫升 ) 6 說明 (1)滴定速度、三角瓶壁厚度和熱源的穩(wěn)定程度等，對(duì)測(cè)定精密度影響很大。 3 儀器與設(shè)備 （ 1）三角瓶 （ 2）容量瓶 （ 3）分析天平 （ 4）干燥器 （ 5）電熱恒溫干燥箱 （ 6）滴定管 （ 7）稱量瓶 （ 8）移液管 （ 9）電爐 4 測(cè)定步驟 斐林試劑的標(biāo)定 吸取斐林試劑甲、乙液各 5 毫升，置入 250 毫升三角瓶中，加 10 毫升水，并從滴定管中預(yù)先加入約 20 毫升 %標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液 (其量控制在后滴定時(shí)消耗%標(biāo)準(zhǔn)葡萄搪溶液 1 毫升以內(nèi) )，搖勻，于電爐上加熱至沸，立即以 4~5 秒鐘1 滴的速 度繼續(xù)用 %標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液滴定至藍(lán)色消失，此滴定操作需在 1 分鐘內(nèi)完成，總耗糖量為 V0 毫升。另外，斐林試劑中加入亞鐵氰化鉀 (黃血鹽 )，使紅色氧化亞銅沉淀生成可溶性的復(fù)鹽，反應(yīng)終點(diǎn)更為明顯。 圖 21 水解裝置 校正值的計(jì)算： 先求得 10 毫升斐林試劑相當(dāng)?shù)钠咸烟强藬?shù) (F)， F=CV 式中 C：標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液濃度 (g/ml) 再?gòu)撵沉衷噭┨橇勘?(見附表 21)查得 V 毫升時(shí)相當(dāng)?shù)钠咸烟强藬?shù) (F0)，斐林試劑校正值 f 為： 00 FCVFFf ?? 定糖 吸取斐林試劑甲、乙液各 5 毫升，置入 250 毫升三角瓶中，加 20 毫升水，并從滴定管中預(yù)先加入適量的水解糖液 (其量應(yīng)控制在后滴定時(shí)消耗水解糖液在 1 毫升以內(nèi) )，搖勻，于電爐上 加熱至沸，并保持微沸 2 分鐘。濾紙過濾濾液用 500毫升容量瓶接收，用水充分洗搽殘?jiān)?，然后用水定容至刻度，搖勻，為供試糖液。 3 儀器與設(shè)備 （ 1）三角瓶 （ 2）長(zhǎng)玻璃管 (約 1 米 ) （ 3）容量瓶 （ 4）分析天平 （ 5）干燥器 （ 6）電熱恒溫干燥箱 （ 7）滴定管 （ 8）稱量瓶 （ 9）移液管 （ 10） pH 試紙?jiān)囼?yàn) （ 11）電爐 （ 12）小銅鍋 4 測(cè)定步驟 試樣水解 粗淀粉測(cè)定中試樣水解：準(zhǔn)確稱取試樣 ~2 克，置入 250 毫升三角瓶中。 20％鹽酸溶液 量取 20 毫升濃鹽酸，緩慢倒入 80 毫開水中。因次甲基藍(lán)氧化能力較二價(jià)銅弱，故待二價(jià)銅全部被還原后，過量一滴還原糖立即使次甲基藍(lán)還原，溶液藍(lán)色消失以示終點(diǎn)： =+( C H O H )4H CC H 2 O HO( C H O H ) 4C O O HC H 2 O H+SN( C H 3 ) 2 NN+（ C H 3 ） 2 C l+ H 2 OSHN( C H 3 ) 2 NN ( C H 3 ) 2+ H C l次 甲 基 藍(lán) （ 藍(lán) 色 ）（ 無(wú) 色 ） 2 試劑 斐林試劑 甲液：稱取 克硫酸銅 (CuSO4178。 斐林試劑由甲、乙液組成。 計(jì)算 %1 0 0% 01 21 ???? WW WW）水分（ 式中 W0：稱量瓶重（ g） W1：干燥前試樣與稱量瓶重（ g） W2：干燥后試樣與稱量瓶重（ g） 4 說明 （ 1）原料的水分測(cè)定一般需采用 100105℃烘箱中直接干燥，其結(jié)果較為準(zhǔn)確。試樣的水分一般是指在 100℃左右直接干燥的情況下，所失去的總量。水分過高，原料在貯藏時(shí)容易發(fā)霉變質(zhì)，影響原料的利用價(jià)值。 外加酶糖化法 根據(jù)麥芽的指標(biāo)，釀造 40%輔 料比的麥汁，要求麥汁的 ?氨基氮符合要求。此時(shí)杯內(nèi)加入 100ml 70℃水，保持恒溫； 5 分鐘后，用玻棒取麥芽汁 1 滴，置于白滴板上，再加碘液 1 滴 ，混合，觀察碘液顏色。 ZY ZYR D F ?????? 0 0 5 1 6 1)(100 ?????????????? (8) 式中： RDF —— 啤酒的真正發(fā)酵度， % ； Y —— 啤酒的原麥汁濃度，176。 P [％ (m/m)]； b —— 校正系數(shù)。 P [％ (m/m)]； A —— 酒精度，％ (m/m)； E —— 真正濃度，176。即為啤酒的真正濃度，以plato 度 (176。 a) 試樣的制備：將重量法 (在已知重量的蒸餾燒瓶中 )蒸餾除去酒精后的殘液，冷卻至 20℃，準(zhǔn)確補(bǔ)加水使殘液至 ，混勻。按經(jīng)驗(yàn)公式計(jì)算出啤酒試樣的原麥汁濃度。即為啤酒試樣的酒精度， %(m/m) 。 重量法 蒸餾 稱取制備好的試樣 () 100g，精確至 ，全部移入 500mL 已知質(zhì)量的蒸餾瓶中，加水 50mL 和數(shù)粒玻璃珠，裝上蛇型冷凝器 (或冷卻部分的長(zhǎng)度不短于 400mm的直型冷凝器 )，開啟冷卻水，用已知質(zhì)量的 100mL 容量瓶接收餾出