【正文】 頂稀的密度梯度，與此同時(shí)，可以帶動(dòng)原來(lái)混合的樣品顆粒也發(fā)生重新分布，到達(dá)與其自身密度相等的梯度層里，即達(dá)到等密度的位置而獲得分離。這里的懸浮顆粒往往是指制成懸浮狀態(tài)的細(xì)胞、細(xì)胞器、病毒和生物大分子等。通過(guò)逐步增加相對(duì)離心力，使一個(gè)非均相混合液內(nèi)形狀不同的大小顆粒分步沉淀。本法可分離各種細(xì)胞、病毒、染色體、脂蛋白、dna和rna等生物樣品。3）自成梯度等密度離心法。根據(jù)被分離物質(zhì)的浮力密度差別進(jìn)行分離，所用的介質(zhì)起始密度約等于被分離物質(zhì)的密度，介質(zhì)在離心過(guò)程中形成密度梯度，被分離物質(zhì)沉降或上浮到達(dá)與之密度相等的介質(zhì)區(qū)域中停留并形成區(qū)帶。二、采血方法的選擇成人：用肝素化的玻璃注射器或一次性注射器穿刺，采血部位首選橈動(dòng)脈，次選股動(dòng)脈小兒：首選用顳淺動(dòng)脈或頭皮小動(dòng)脈，嚴(yán)格消毒后，用肝素化的5號(hào)頭皮針連接2ml注射器，待動(dòng)脈血流至注射器乳頭時(shí)，立即用小止血鉗分別夾住頭皮針?biāo)芰宪浌苁孜矁啥耍ǎ缓蟀纬鲠橆^立即混勻送檢。未充分動(dòng)脈化的毛細(xì)管血的po2偏低，對(duì)ph、pco2和hco3—的測(cè)定結(jié)果影響不明顯。第一次遇到尿糖檢測(cè)失真是在1984年，叢玉隆還是醫(yī)院檢驗(yàn)科的檢驗(yàn)員。叢玉隆再仔細(xì)檢查后，發(fā)現(xiàn)在抽取病人血樣時(shí)，患者正輸著vc，結(jié)果終于弄明白了，原來(lái)是患者血樣中含有的大量vc還原了檢驗(yàn)試劑中的酶，干擾了病人的血糖檢驗(yàn)結(jié)果。叢玉隆說(shuō)，假如一個(gè)糖尿病人，沒(méi)吃vc以前的尿糖是2個(gè)加號(hào)，吃了9片vc后，就可能是1個(gè)加號(hào)，甚至?xí)霈F(xiàn)陰性結(jié)果。磷鉬酸法是血清中無(wú)機(jī)磷與鉬酸鹽結(jié)合形成磷鉬酸化合物，再用還原劑將其還原成鉬藍(lán)進(jìn)行比色測(cè)定。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：火焰分光光度法的儀器原始的火焰光度計(jì)由霧化器、火焰燃燒嘴、濾光片和光電池檢測(cè)器組成。不同的燃料氣體和助燃?xì)饨M分，及其配比，稱助/燃比，決定該化學(xué)火焰能達(dá)到的最高溫度和化學(xué)作用性質(zhì)（見(jiàn)表）。由于當(dāng)時(shí)使用照相方法記錄譜線，致使準(zhǔn)確定量分析工作較為繁瑣。此法不僅可作為一個(gè)光化學(xué)分析方法獨(dú)立使用，而且可作為一個(gè)有特色的光檢測(cè)器，與氣相色譜儀聯(lián)用，或作為一種試樣原子化裝置，用于原子吸收光譜法中。髂骨后上棘此處骨皮質(zhì)薄，骨髓腔大，進(jìn)針容易，骨髓液豐富，被血液稀釋的可能性小，故為臨床上首選的穿刺部位。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試綜合知識(shí)輔導(dǎo)：均相酶免疫測(cè)定均相酶免疫測(cè)定：屬于競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合分析方法。①液相酶免疫測(cè)定：其測(cè)定靈敏度與放射免疫方法相近，近年有取代放射免疫方法的趨勢(shì)。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí)輔導(dǎo)：尿的方法學(xué)評(píng)價(jià)尿色和透明度判斷，受主觀因素影響。（2）飲水及尿量：大量飲水、尿量多則尿色淡；尿色深見(jiàn)于尿量少、飲水少或運(yùn)動(dòng)、出汗、水分丟失。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)免疫檢驗(yàn)考試輔導(dǎo)：腫瘤壞死因子的生物效應(yīng)腫瘤壞死因子的生物效應(yīng)：tnf對(duì)多種腫瘤細(xì)胞均有殺傷或抑制作用，敏感性因腫瘤細(xì)胞類型而異；tnf呈劑量依賴性地抑制病毒介導(dǎo)的細(xì)胞病變的發(fā)展，對(duì)rna病毒和dna病毒均有抑制作用；tnf能夠增強(qiáng)t細(xì)胞產(chǎn)生以il2為主的淋巴因子，提高il2r的表達(dá)水平，促進(jìn)t細(xì)胞增殖；還能促進(jìn)b細(xì)胞增殖、分化和產(chǎn)生抗體；tnf有中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞趨化作用，并使之活化和脫顆粒，釋放炎癥介質(zhì)；tnf可刺激成骨細(xì)胞內(nèi)的堿性磷酸酶活性，誘導(dǎo)成骨細(xì)胞吸收骨質(zhì)、使軟骨細(xì)胞進(jìn)行軟骨更新，抑制軟骨形成。結(jié)果：陰性，無(wú)鐮變細(xì)胞。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)知識(shí)輔導(dǎo)：埃希菌屬的腸道感染埃希菌屬的腸道感染：致病性大腸埃希菌有下列五個(gè)病原群。（4）腸出血型大腸埃希菌（ehec）：又稱產(chǎn)志賀樣毒素（vt）大腸埃希菌（sltec或utec），其中o157：h7可引起出血性大腸炎和溶血性尿毒綜合征（hus）。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)臨床檢驗(yàn)技師考試綜合輔導(dǎo)資料：埃希菌屬的概念埃希菌屬包括5個(gè)種，即大腸埃希菌、蟑螂埃希菌、弗格森埃希菌、赫爾曼埃希菌和傷口埃希菌。將選擇培養(yǎng)基或鑒別培養(yǎng)基上的可疑菌落分別接種克氏雙糖鐵瓊脂（kia）和尿素靛基質(zhì)動(dòng)力（miu）復(fù)合培養(yǎng)基管中，并根據(jù)其六項(xiàng)反應(yīng)結(jié)果，將細(xì)菌初步定屬。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)免疫檢驗(yàn)考試輔導(dǎo)：細(xì)胞因子共同特性（1）化學(xué)性質(zhì)大都為糖蛋白。輕度貧血時(shí)紅細(xì)胞形態(tài)無(wú)明顯異常，中度以上貧血時(shí)紅細(xì)胞體積減小，中心淡染區(qū)擴(kuò)大，嚴(yán)重時(shí)紅細(xì)胞可呈環(huán)狀，并有嗜多色性紅細(xì)胞及點(diǎn)彩紅細(xì)胞增多。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)免疫檢驗(yàn)考試輔導(dǎo)：?jiǎn)蜗驍U(kuò)散試驗(yàn)單向擴(kuò)散試驗(yàn)：瓊脂內(nèi)混入抗體，待測(cè)抗原從局部向瓊脂內(nèi)自由擴(kuò)散，如抗原和相應(yīng)抗體結(jié)合，則形成沉淀環(huán)。（2）每次測(cè)定都必須作標(biāo)準(zhǔn)曲線。雙向擴(kuò)散試驗(yàn)也分為試管法和平板法。根據(jù)沉淀線的位置可作如下分析：①抗原、抗體是否存在及其相對(duì)含量。由于慢者擴(kuò)散圈小，局部濃度較大，形成沉淀線彎向分子量大的一方。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)血液檢驗(yàn)復(fù)習(xí)指導(dǎo)：酸化甘油溶血試驗(yàn)（1）原理：當(dāng)甘油存在于低滲溶液氯化鈉磷酸緩沖液時(shí)，可阻止其中的水快速進(jìn)入紅細(xì)胞內(nèi)，使溶血過(guò)程緩慢。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)血液檢驗(yàn)復(fù)習(xí)指導(dǎo)：紅細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)與功能：紅細(xì)胞膜含脂類40%，蛋白質(zhì)50%，碳水化合物10%.膜的主要蛋白有主體蛋白和外周蛋白。：紅細(xì)胞能量代謝紊亂；紅細(xì)胞膜有遺傳性缺陷；酶缺陷。通常是由接觸或誤服化學(xué)藥物所致。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)臨床檢驗(yàn)技師輔導(dǎo)：溶血空斑形成試驗(yàn)溶血空斑形成試驗(yàn)：經(jīng)典的溶血斑試驗(yàn)用于檢測(cè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物抗體形成細(xì)胞的功能，其原理是將綿羊紅細(xì)胞（srbc）免疫小鼠，4天后取出脾細(xì)胞，加入srbc及補(bǔ)體，混合在溫?zé)岬沫傊芤褐?，澆在平皿?nèi)或玻片上，使成一蒲層，置37℃溫育。但是上述直接和間接空斑形成試驗(yàn)都只能檢測(cè)抗紅細(xì)胞抗體的產(chǎn)生細(xì)胞，而且需要事先免疫，難以檢測(cè)人類的抗體產(chǎn)生情況。在該測(cè)試系統(tǒng)中，加入抗人ig抗體，可與受檢細(xì)胞產(chǎn)生的免疫球蛋白結(jié)合形成復(fù)合物，復(fù)合物上的fc段可與連接在srbc上的spa結(jié)合，同時(shí)激活補(bǔ)體，使srbc溶解形成空斑。主要的方法有：①粘附貼壁法；②吸附柱過(guò)濾法；③磁鐵吸引法。201。根據(jù)細(xì)胞的特性和標(biāo)志選擇純化所需細(xì)胞的方法是陽(yáng)性選擇法，而選擇性去除不要的細(xì)胞，僅留下所需的細(xì)胞為陰性選擇。用抗iga、igg或igm抗體包被srbc，可測(cè)定相應(yīng)免疫球蛋白的產(chǎn)生細(xì)胞，這種試驗(yàn)稱為反相空斑形成試驗(yàn)。現(xiàn)在常用的為spasrbc溶血空斑試驗(yàn)。每一個(gè)空斑表示一個(gè)抗體形成細(xì)胞，空斑大小表示抗體生成細(xì)胞產(chǎn)生抗體的多少。常見(jiàn)的珠蛋白生成障礙性貧血為α或β珠蛋白生成障礙性貧血。血紅蛋白病多為遺傳性，如：因控制遺傳的珠蛋白基因發(fā)生突變所致的結(jié)構(gòu)性血紅蛋白?。灰蛑笇?dǎo)珠蛋白合成速率的遺傳基因缺陷所致的珠蛋白生成障礙性貧血或稱海洋性貧血。膜的主要脂類為磷脂和膽固醇，起屏障和保持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定性作用。當(dāng)紅細(xì)胞膜蛋白及膜脂質(zhì)有缺陷時(shí)，導(dǎo)致紅細(xì)胞懸液的吸光度降至50%的時(shí)間（aglt50）明顯縮短。③抗原性質(zhì)的分析，受檢的抗原性質(zhì)可能完全相同、部分相同、完全不同，沉淀弧可分別出現(xiàn)完全融合、部分融合、不融合三種情況；④抗體效價(jià)的滴定。②抗原、抗體相對(duì)分子量的分析；抗原或抗體在瓊脂內(nèi)自由擴(kuò)散，其速度受分子量影響。平板法：是在瓊脂板上相距3～5mm打一對(duì)孔，或者梅花孔、雙排孔、三角孔等。（4）注意雙環(huán)現(xiàn)象（出現(xiàn)了兩種抗原性相同成分）。平板法：%瓊脂糖內(nèi)，未凝固前傾注成平板，然后在上打孔，將抗原加入孔中，放37℃讓其自由擴(kuò)散，24～48h后可見(jiàn)孔周圍出現(xiàn)沉淀環(huán)，測(cè)定環(huán)的直徑或面積計(jì)算標(biāo)本中待測(cè)抗原的濃度。白細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類一般正常。（3）一種細(xì)胞可產(chǎn)生多種細(xì)胞因子，不同類型的細(xì)胞可產(chǎn)生一種或幾種相同的細(xì)胞因子。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)免疫檢驗(yàn)考試輔導(dǎo)：細(xì)胞因子的類型細(xì)胞因子分類按其作用大致可分為免疫調(diào)節(jié)因子和免疫調(diào)控因子兩大類。大腸埃希菌俗稱大腸桿菌，大多數(shù)菌株是人類和動(dòng)物腸道正常菌群。嚴(yán)重者可發(fā)展為急性腎衰竭。（2）腸致病型大腸埃希菌（epec）：主要引起嬰兒腹瀉。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)知識(shí)輔導(dǎo)：埃希菌屬的常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目cdc將大腸埃希氏菌o157：h7列為常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目ehec的血清型》50種，最具代表性的是o157：，o157：h7占腸道分離病原菌的第二或第三位，是從血便中分離到的最常見(jiàn)的病原菌，分離率占血便的40%，8三個(gè)月o157：h7感染的發(fā)生率最高。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床經(jīng)驗(yàn)表明，tnf對(duì)某些腫瘤具有明顯的抑制作用，但副作用大，建立合理的用藥方案及治療措施，可望降低用量，減輕副作用，達(dá)到最佳治療效果。（4）鹽類結(jié)晶及酸堿度：生理性尿混濁的主要原因是含有較多的鹽類，常見(jiàn)有：①尿酸鹽結(jié)晶：在濃縮的酸性尿遇冷時(shí)，可有淡紅色結(jié)晶析出。臨床應(yīng)用僅作參考2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí)輔導(dǎo)：尿的質(zhì)量控制，鹽類結(jié)晶析出、尿膽原轉(zhuǎn)變?yōu)槟蚰懰?、?xì)菌增殖和腐敗、尿素分解，均可使尿顏色加深、混濁度增高。膽汁淤積性肝硬化alt活性較高可與黃疸平行，ast升高不及alt顯著。②克隆酶供體免疫分析：dna重組技術(shù)可分別合成某種功能酶（如βd半乳糖苷酶）分子的兩個(gè)片段，大片段稱為酶受體（ea），小分子稱作酶供體（ed），兩者單獨(dú)均無(wú)酶活性，一定條件下結(jié)合形成四聚體方具酶活性。（2）油鏡：選擇滿意的片膜段，觀察200～500個(gè)細(xì)胞，按細(xì)胞的種類、發(fā)育階段分別計(jì)算，并計(jì)算它們各自的百分率；仔細(xì)觀察各系統(tǒng)的增生程度和各階段細(xì)胞數(shù)量和質(zhì)量的變化。骨髓穿刺部位選擇一般要從以下幾個(gè)方面考慮：①骨髓腔中紅骨髓豐富；②穿刺部位應(yīng)淺表、易定位；③應(yīng)避開(kāi)重要臟器。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：火焰分光光度法的應(yīng)用火焰分光光度法主要用于堿金屬和堿土金屬元素的定量分析。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：火焰分光光度法的簡(jiǎn)史，就是火焰分光光度法的起源，用此法發(fā)現(xiàn)了許多新元素。反射鏡起聚光作用。雖非常敏感，但影響因素多，顯色不穩(wěn)定，重復(fù)性也較差，不能用于常規(guī)檢驗(yàn)。試驗(yàn)也證明5個(gè)小時(shí)以后，使用vc的病人每毫升尿含vc幾十毫克，已經(jīng)屬于正常值，不再干擾檢驗(yàn)結(jié)果。一組人一天吃6片vc，第二天尿含vc90毫克。急診醫(yī)生一看檢驗(yàn)報(bào)告馬上產(chǎn)生疑問(wèn)：怎么會(huì)是8毫克？人的正常血糖最低是80毫克，如果真是8毫克，那這個(gè)人早就死了。若不能立即測(cè)定，應(yīng)將血?dú)鈽?biāo)本保存在2～8℃容器內(nèi)，但即使這樣待測(cè)時(shí)間也不宜超過(guò)2小時(shí)。因技術(shù)條件限制，不能反復(fù)動(dòng)脈穿刺時(shí)，早產(chǎn)兒與小嬰兒可在足后跟用肝素化毛細(xì)管采取動(dòng)脈化毛細(xì)血管的血亦可。每抽血?dú)馇?，?ml注射器抽取肝素稀釋液2ml，完全濕潤(rùn)整個(gè)針管后棄去肝素液，殘留在針頭及針管頭部死腔內(nèi)的肝素液即可起到抗凝作用。需要離心分離的樣品可和梯度介質(zhì)先均勻混合，離心開(kāi)始后，梯度介質(zhì)由于離心力的作用逐漸形成管底濃而管頂稀的密度梯度，與此同時(shí)，可以帶動(dòng)原來(lái)混合的樣品顆粒也發(fā)生重新分布，到達(dá)與其自身密度相等的梯度層里，即達(dá)到等密度的位置而獲得分離。要求在離心前預(yù)先配制管底濃而管頂稀的密度梯度介質(zhì)，常用介質(zhì)有蔗糖、cscl、cs2so4等，待分離樣品一般鋪在梯度液頂上，如需挾在梯度液中間或管底部，則需調(diào)節(jié)樣品液密度。離心前，離心管內(nèi)先裝入分離介質(zhì)（如蔗糖、甘油等），使形成連續(xù)的或不連續(xù)的密度梯度介質(zhì)，然后加入樣品進(jìn)行離心，具體又可分為：1）速度區(qū)帶離心法。常用的離心機(jī)有多種類型，一般低速離心機(jī)的最高轉(zhuǎn)速不超過(guò)6000rpm，高速離心機(jī)在25000rpm以下，超速離心機(jī)的最高速度達(dá)30000rpm以上。根據(jù)被分離物質(zhì)的浮力密度差別進(jìn)行分離，所用的介質(zhì)起始密度約等于被分離物質(zhì)的密度，介質(zhì)在離心過(guò)程中形成密度梯度，被分離物質(zhì)沉降或上浮到達(dá)與之密度相等的介質(zhì)區(qū)域中停留并形成區(qū)帶。3）自成梯度等密度離心法。本法可分離各種細(xì)胞、病毒、染色體、脂蛋白、dna和rna等生物樣品。通過(guò)逐步增加相對(duì)離心力，使一個(gè)非均相混合液內(nèi)形狀不同的大小顆粒分步沉淀。這里的懸浮顆粒往往是指制成懸浮狀態(tài)的細(xì)胞、細(xì)胞器、病毒和生物大分子等。離心機(jī)的種類很多，按照使用目的，可兩類，即制備型離心機(jī)和分析型離心機(jī)。因?yàn)橐鹊鞍酌敢呀?jīng)被廣泛用于貼壁細(xì)胞的消化傳代。結(jié)合蛋白在細(xì)胞代謝過(guò)程中起重要作用。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試免疫檢驗(yàn)輔導(dǎo)：血漿的主要作用提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：氨基酸、維生素、無(wú)機(jī)物、脂類物質(zhì)、核酸衍生物等，是細(xì)胞生長(zhǎng)必須的物質(zhì)。人體含有27503300毫升血漿，約占血液總體積的55%.血漿的絕大部分是水（體積的90%），其中溶解的物質(zhì)主要是血漿蛋白，還包括葡萄糖、無(wú)機(jī)鹽離子、激素以及二氧化碳。見(jiàn)不動(dòng)精子，須染色方可區(qū)分：不活動(dòng)的精子、死精子、未成熟精子等。二、復(fù)檢內(nèi)涵尚待統(tǒng)一有人認(rèn)為“復(fù)檢”就是要在鏡下重新進(jìn)行白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)而己，這是偏面的。根據(jù)1987年我赴日本考察時(shí)，日本對(duì)三分群儀器白細(xì)胞分類是不收費(fèi)的，而且每一例仍然需要涂片染色，在顯微鏡下重新分類后才能報(bào)告?，F(xiàn)就此問(wèn)題談?wù)剛€(gè)人看法。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試臨檢基礎(chǔ)知識(shí)輔導(dǎo)：重視血常規(guī)的復(fù)檢工作目前血細(xì)胞分析儀己經(jīng)普及到縣醫(yī)院或衛(wèi)生院，這對(duì)提高血細(xì)胞常規(guī)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性，減輕工作人員勞動(dòng)強(qiáng)度起促進(jìn)作用。如果出現(xiàn)hiv2型的特異性指示條帶，需用hiv2型免疫印跡試劑再做hiv2的抗體確認(rèn)試驗(yàn)，呈陰性反應(yīng)，報(bào)告hiv2抗體陰性；呈陽(yáng)性反應(yīng)則報(bào)告hiv2抗體血清學(xué)陽(yáng)性，并將樣品送國(guó)家參比實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行核酸序列分析，wb的敏感性一般不低于初篩實(shí)驗(yàn)，但它的特異性很高，這主要是基于hiv不同抗原組分的分離以及濃縮和純化，能夠檢測(cè)針對(duì)不同抗原成分的抗體，因而能夠用wb方法鑒別初篩實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試血液檢驗(yàn)復(fù)習(xí)輔導(dǎo)：hiv抗體確認(rèn)實(shí)驗(yàn)免疫印跡試驗(yàn)（wb）、條帶免疫試驗(yàn)（liatekhivⅲ）、放射免疫沉淀試驗(yàn)（ripa）及免疫熒光試驗(yàn)（ifa）。，表明有不同程度的生育障礙。當(dāng)有糖供體、二價(jià)錳離子與o型紅細(xì)胞共同孵育時(shí)，羊水中的轉(zhuǎn)移酶可在紅細(xì)胞膜上合億a或b物質(zhì)，利用血型測(cè)定的方法可檢測(cè)埋分泌型胎兒的血型。：11：256倍比稀釋后，將2%a，b，置室溫1小時(shí)后觀察結(jié)果，以出現(xiàn)4+凝塊的最高稀釋度定為最適稀釋度。馮分作用10min后，便血型物質(zhì)將抗體中和完全，再于各管加入相對(duì)應(yīng)的2%標(biāo)準(zhǔn)a型，b型，充分混勻。胞質(zhì)量豐富，染色淡藍(lán)或灰藍(lán)色，有透明感，邊緣處著色較深藍(lán)色。ⅱ型（幼稚型）：胞體較大，核圓形或卵圓形。胞體比正常淋巴細(xì)胞稍大，