【正文】 織切片； 人類常見癌癥組織切片； 組織芯片客戶定制效勞。 2. 組織芯片應(yīng)用領(lǐng)域 組織芯片的應(yīng)用領(lǐng)域包括與生命科學(xué)相關(guān)的根底研究、臨床研究、應(yīng)用研究和新藥開發(fā)等。 免疫組化具有操作簡單，特異性強(qiáng)，敏感性高，定位準(zhǔn)確，形態(tài)與功能相結(jié)合等特點(diǎn)。免疫組化、免疫熒光、 流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用比較 及常見問題分析 宋硯明 song_yanmingwuxiapptec 第一頁，共三十五頁。 免疫組織化學(xué) 〔 Immunohistochemistry, IHC〕 第三頁，共三十五頁。 免疫組化染色〔 IHC〕； 原位雜交〔 ISH〕； 熒光原位雜交〔 FISH〕； 原位末端標(biāo)記分析〔 TUNEL〕； 原位 PCR 以及激光捕獲顯微別離系統(tǒng)輔助的 cDNA雜交。 組織芯片 /切片應(yīng)用 第六頁，共三十五頁。 特點(diǎn)：該法孵育時(shí)間短〔通常為 10min〕，靈敏度高以及低背景染色等特點(diǎn)。 ?特點(diǎn)： 該法具有靈敏度高以及低背景染色等特點(diǎn)。因此需要普通的酶標(biāo)二抗即可完成。 2. AEC顯色法 產(chǎn)品描述： 3氨基 9乙基咔唑 (3amino9ethylcarbazole， AEC) 是過氧化物酶 (Peroxidase) 的顯色底物，在過氧化物酶的催化下， AEC顯色工作液會(huì)于反響部位產(chǎn)生溶于酒精的紅色沉淀，必須在水溶性介質(zhì)中復(fù)染和封片。 試劑盒組成： DAB顯色原〔 20〕〔試劑 A〕 DAB底物緩沖液〔 1〕〔試劑 B〕 3. BCIP/NBT顯色法 產(chǎn)品描述： BCIP/NBT〔 5溴 4氯 3吲哚磷酸 /氮藍(lán)四唑〕是一種冷藏穩(wěn)定的、單一組分溶液，用于免疫組化、原位雜交、 western blot、 northern blot和 southern blot，特異性地與堿性磷酸酶〔 AP〕反響生成紫色物質(zhì)。 ?石蠟切片脫蠟不徹底，建議延長脫蠟時(shí)間。 ?蛋白封閉不充分，建議增加蛋白封閉時(shí)間。 ?一抗?jié)舛冗^低或孵育時(shí)間過短，建議增加一抗?jié)舛然蜓娱L孵育時(shí)間。 ?一抗種屬來源與二抗不匹配，建議實(shí)驗(yàn)前確認(rèn)一抗的種屬來源。用免疫熒光顯示和檢查細(xì)胞或組織內(nèi)抗原或半抗原物質(zhì)等方法稱為免疫熒光細(xì)胞〔或組織〕技術(shù)。 免疫熒光實(shí)驗(yàn)過程 細(xì)胞爬片〔多聚賴氨酸處理，生長密度 7080%〕 細(xì)胞固定〔適宜的固定液，如 4%甲醛溶液等〕 細(xì)胞膜穿透〔 Triton X100 等〕 封閉〔 3%BSAPBS等〕 一抗孵育 熒光二抗孵育 胞漿 /核襯染〔鬼筆環(huán)肽 /DAPI/PI〕 封片熒光顯微鏡拍照 第十五頁，共三十五頁。 第十七頁，共三十五頁。 碘化丙啶 (PI)是一種溴化乙啶的類似物，它在嵌入雙鏈 DNA后釋放紅色熒光。可與 F肌動(dòng)蛋白結(jié)合，使 F肌動(dòng)蛋白保持穩(wěn)定。 各種熒光染料原理及選擇 第十八頁，共三十五頁。 二抗選擇錯(cuò)誤〔種屬不匹配〕，建議選用與一抗種屬相匹配的二抗。 ?洗滌不充分，建議增加沖洗次數(shù)與時(shí)間。