pcr試劑盒的選用和質(zhì)檢-wenkub
2023-02-13 06:27:05 本頁面
【正文】 ? 定性測定： PCRELISA、 PCR膜上雜交（雜交梳）、熒光 PCR（分子信標(biāo)和 Taq Man等） ? 定量測定： PCRELISA 、 Taq Man和Amplisensor熒光定量、 Amplicor PCRELISA定量等。 ? 是否有污染。臨床 PCR試劑盒的選用和質(zhì)檢 衛(wèi)生部臨床檢驗中心 李金明 PCR或 RTPCR試劑盒的組成 ? 核酸提取試劑 ? 核酸擴(kuò)增或逆轉(zhuǎn)錄 核酸擴(kuò)增試劑 ? 產(chǎn)物檢測試劑（有些使用全自動分析儀的 PCR方法因其核酸擴(kuò)增和檢測同時完成，故無專門的產(chǎn)物檢測試劑） 影響 PCR試劑盒質(zhì)量的因素 ? 內(nèi)在因素 : 原材料、核酸提取方法、方法學(xué)設(shè)計 影響 PCR試劑盒質(zhì)量的因素： 擴(kuò)增所需的原材料 ? 寡核苷酸引物和探針 ? 緩沖液和 dNTP ? 聚合酶、逆轉(zhuǎn)錄酶等 PCR反應(yīng)混合物 Mg2+ Mn2+ dCTP dGTP dUTP dATP Taq DNA 多 聚 酶 rTth DNA 多 聚 酶 AmpErase 生 物 素 標(biāo) 記 的 引 物 和 或 和 寡核苷酸引物和探針 ? 其對試劑盒質(zhì)量的影響首先是純度。 ? 結(jié)合特異性（濃度） dNTP和緩沖液 ? dNTP（ 包括 dATP 、 dCTP、 dGTP和 dTTP或 dUTP）的濃度 ? 緩沖液：在儲存和擴(kuò)增循環(huán)中穩(wěn)定、作為聚合酶活性所必須的 Mg＋＋ （ 或用于rTth的 Mn＋＋ ） 的濃度以及 pH等 逆轉(zhuǎn)錄酶、 DNA聚合酶 ?酶的濃度 ?酶的活性 核酸擴(kuò)增方法 ? PCR ? RT－ PCR ? 轉(zhuǎn)錄依賴的擴(kuò)增（ TMA） ? 連接酶鏈反應(yīng)（ LCR） ? 鏈替代擴(kuò)增（ SDA） 等 影響 PCR試劑盒質(zhì)
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