基因重組和雜交育種培訓(xùn)課程-wenkub
2023-01-26 18:00:30 本頁(yè)面
【正文】 標(biāo)記 自然轉(zhuǎn)化過(guò)程的特點(diǎn)： a） 對(duì)核酸酶敏感； c） 轉(zhuǎn)化是否成功及轉(zhuǎn)化效率的高低主要取決于轉(zhuǎn)化（ DNA） 供體菌和受體菌之間的親源關(guān)系； d） 通常情況下質(zhì)粒的自然轉(zhuǎn)化效率要低得多； b） 不需要活的 DNA給體細(xì)胞； 提高質(zhì)粒的自然轉(zhuǎn)化效率的二種方法： 1）使質(zhì)粒形成多聚體，這樣進(jìn)入細(xì)胞后重新組合成有 活性的質(zhì)粒的幾率大大提高； 2）在質(zhì)粒上插入受體菌染色體的部分片段，或?qū)①|(zhì)粒轉(zhuǎn)化進(jìn)含有與該質(zhì)粒具有同源區(qū)段的質(zhì)粒的受體菌 —— 重組獲救 。 良好的轉(zhuǎn)化因子有 dsDNA（ 最宜于細(xì)胞表面結(jié)合）、ssDNA和 質(zhì)粒 DNA， 通常不能與核染色體組發(fā)生重組。 調(diào)節(jié)感受態(tài)的一類特異蛋白稱 感受態(tài)因子 。 感受態(tài)細(xì)胞 （ petent cell） 具有攝取外源DNA能力的細(xì)胞。 （一）轉(zhuǎn)化 （ transformation） 1. 定義 自然遺傳轉(zhuǎn)化 （ natural geic transformation） 人工轉(zhuǎn)化 （ artificial transformation） 原核生物 Streptococcus pneumoniae（ 肺炎鏈球菌）、 Haemophilus（ 嗜血桿菌屬）、 Bacillus（ 芽孢桿菌屬）、 Neisseria（ 奈瑟氏球菌屬）、 Rhizobium（ 根瘤菌屬）、 Staphylococcus（ 葡萄球菌屬）、 Pseudomonas（ 假單胞菌屬）、 Xanthomonas（ 黃單胞菌屬）等。 一、原核生物的基因重組 原核生物的基因重組形式很多，機(jī)制較原始。 重 組 雜交 （ hybridization） 遺傳物質(zhì) 分子水平 上的雜交 細(xì)胞水平 細(xì)胞水平的雜交包含分子水平上的重組。 基因重組是雜交育種的理論基礎(chǔ)。 特點(diǎn)： ① 片段性，僅一小段 DNA序列參與重組； ② 單向性，即從供體菌向受體菌（或從供體基因組向受體基因組）作單方向轉(zhuǎn)移； ③ 轉(zhuǎn)移機(jī)制獨(dú)特而多樣，如接合、轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)導(dǎo)等。 2. 轉(zhuǎn)化微生物的種類 真核微生物 Saccharomy cescerevisiae（ 釀酒酵母）、 Neurosporacrassa（ 粗糙脈孢菌）、 Aspergillusniger（ 黑曲霉）等。 自然感受態(tài) 是細(xì)胞一定生長(zhǎng)階段的生理特性，受細(xì)菌自身的基因控制； 人工感受態(tài) 則是通過(guò)人為誘導(dǎo)的方法，使細(xì)胞具有攝取 DNA的能力，或人為地將 DNA導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)。 膜相關(guān) DNA結(jié)合蛋白 （ membraneassociated DNA binding protein） 細(xì)胞壁 自溶素 （ autolysin） 幾個(gè)核酸酶 4. 轉(zhuǎn)化因子 （ transforming principle） 轉(zhuǎn)化因子 的本質(zhì)是離體的 DNA片段。 轉(zhuǎn)化的頻率通常為 ％～ ％ ，最高為 20％。 （ 2）人工轉(zhuǎn)化 用 CaCl2處理細(xì)胞，電穿孔等是常用的人工轉(zhuǎn)化手段。 6. 轉(zhuǎn)
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