rgkaaa細(xì)胞凋亡與免疫-wenkub
2022-09-02 01:10:44 本頁面
【正文】 nse reaction)： 清除病毒感染細(xì)胞等對機(jī)體有害的細(xì)胞。 14 ? Morphological Changes (細(xì)胞生物學(xué)詳講 ) ? 第一階段 ：胞體縮小與周圍細(xì)胞失去聯(lián)系，細(xì)胞器變致密，核體積縮小，核仁消失，染色質(zhì)濃集于核膜內(nèi)表面下，形成新月形致密小塊。上述三個階段維持時間很短，通常在 幾分鐘、十幾分鐘內(nèi) 即可完成。 21 ? 接受凋亡信號 ? 凋亡調(diào)控分子間的相互作用 ? 蛋白水解酶（ caspases）的活化 ? 凋亡的級聯(lián)反應(yīng) 22 ?免疫相關(guān)的凋亡信號途徑 ? 死亡受體介導(dǎo)的信號途徑 ? 線粒體途徑 ? 顆粒酶 B途徑 (CTL特有 ) 23 ? 死亡受體通路、線粒體通路 24 ? 其中 膜受體 和 線粒體 途徑均通過激活含 半胱氨酸的天冬氨酸酶 （ Caspase）剪切胞內(nèi)底物（ Caspase不可逆有限水解底物的級聯(lián)放大反應(yīng)過程 ），導(dǎo)致凋亡特有的生化和形態(tài)學(xué)改變。 ? 首先在 caspase前體的 N端前肽和大亞基之間的特定位點被水解去除 N端前肽，然后再在大小亞基之間切割釋放大小亞基，并進(jìn)而形成兩兩組成的有活性的四聚體 , 30 31 凋亡細(xì)胞的特征性表現(xiàn)： 包括 DNA裂解為 200bp左右的片段 ， 染色質(zhì)濃縮 ， 細(xì)胞膜活化 ， 細(xì)胞皺縮 ， 最后形成由細(xì)胞膜包裹的凋亡小體 ， 然后 ， 這些凋亡小體被其他細(xì)胞所吞噬 。 ? 有意義的是 CAD只在 ICAD存在時才能合成并顯示活性，因而 ICAD對 CAD的活化與抑制是必需的 。 由于 DNA的作用，這些蛋白功能被抑制，使細(xì)胞的增殖與復(fù)制受阻并發(fā)生凋亡。 42 根據(jù)結(jié)構(gòu)和功能分為兩類： ? 抗凋亡 /促增殖成員： 包括 Bcl Bclxl 等。 46 ? (3) Smac/Dablo ? 在細(xì)胞凋亡過程中它可以從線粒體釋放進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)。 48 (4) AIF(apoptosisinducing factor) Endo G 兩者均由線粒體釋放，可以非 Caspase依賴方式介導(dǎo)染色質(zhì)的濃集和 DNA片段化，促進(jìn)凋亡。 51 二 細(xì)胞凋亡與免疫生理 二 細(xì)胞凋亡與免疫生理 ? T細(xì)胞 ? （ 1）凋亡與 T細(xì)胞在胸腺的分化發(fā)育： 52 （ 2） 凋亡與成熟 T細(xì)胞 ：活化 T細(xì)胞表面高表達(dá) fas及fasL。一個十分誘人的設(shè)想是 基因治療 —— 通過 載體導(dǎo)入凋亡相關(guān)基因 干預(yù)細(xì)胞的凋亡調(diào)控來實現(xiàn)。因此 ,該方法只能作為 細(xì)胞凋亡初步推測的手段 。 63 On this slide the easiest and historically first way of identifying apoptotic cells is shown. In this assay the blue fluorescent dye DAPI(439。 ? 但該法只能定性 ,不能定量 ,而且觀察到凋亡小體的幾率也不高 ,在體內(nèi)試驗時 ,凋亡小體可能很快被巨噬細(xì)胞吞噬清除 ,而不易觀察到 。 67 ? ： ? （ 1） 典型的細(xì)胞凋亡顯示出 DNA梯形電泳圖譜： 細(xì)胞凋亡時主要的生化特征是其 染色質(zhì)發(fā)生濃縮 ,染色質(zhì) DNA 在核小體單位之間的連接處斷裂 ,形成180～ 200 bp 長的 DNA片段 或 整數(shù)倍的寡核苷酸片段 。 DNA 轉(zhuǎn)移酶 (TdT) 的作用下 ,在無需模板的情況下 ,可進(jìn)行 3′端的 DNA 合成 。 ? ② 敏感性 :TUNEL 法可用于只有極少細(xì)胞發(fā)生凋亡的情況。 ? ⑥ TUNEL法 檢測快速 ,其反應(yīng)過程僅需 3h。 ? ④若樣品處理不當(dāng) ,易形成假陽性 ,影響結(jié)果判斷。 81 ? ： ? 細(xì)胞凋亡的相關(guān)蛋白分析 :如 p53 蛋白、cmyc 、 Fas 、 Bcl2 家族蛋白等。此外 ,將 PCR 技術(shù)和核酸分子雜交技術(shù)相結(jié)合 ,能顯著提高檢測的特異性和靈敏度。 ? AnnexinV(Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白 )能與 PS高親和力特異性結(jié)合 。 ? 線粒體膜電位變化的檢測： ? 端粒酶檢測： ? mRNA水平的檢測： ? 蛋白印跡法 :檢測細(xì)胞凋亡的相關(guān)蛋白分析 :如caspase 、 Fas 家族蛋白等 . ? : 88 ? 細(xì)胞凋亡檢測技術(shù)存在的問題 ? （ 1）細(xì)胞凋亡的判斷標(biāo)準(zhǔn) :目前 ,檢測細(xì)胞凋亡的許多方法的結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)不一。 89 ? （ 2）細(xì)胞凋亡檢測結(jié)果分析 : 在一個檢測體系中檢出了發(fā)生凋亡的細(xì)胞 , 生理性還是病理性，需進(jìn)行致病因素的相關(guān)性分析 . ? 細(xì)胞凋亡檢測技術(shù)存在的問題 90 ? 細(xì)胞凋亡檢測技術(shù)存在的問題 ? （ 3）細(xì)胞凋亡的定量分析： 定量分析包括 2 個方面 ,一是群體細(xì)胞凋亡的定量 ,二是細(xì)胞凋亡程度的定量。 （細(xì)胞凋亡研究所處的地位） 93 生命科學(xué)的研究從宏觀上可以分為 三個層次： 核心層次 （包括分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)學(xué)科） 個體生物學(xué)層次 （對多個物種及種群的結(jié)構(gòu)及功能研究） 生物圈層次 。 95 96 對細(xì)胞生命活動的研究成為當(dāng)今生命科學(xué)發(fā)展的瓶頸 細(xì)胞生命活動 突變體分析 突變體分析 蛋白修飾分析 基因表達(dá) 多肽定性分析 生物信息學(xué) 序列測定 雙向電泳分析 DNA分離與克隆 機(jī)器人技術(shù) (robotics) 功能基因組學(xué) 蛋白質(zhì)分離與制備 蛋白質(zhì)組學(xué) 97 98 重點研究領(lǐng)域： ? 染色體 DNA與蛋白質(zhì)相互作用關(guān)系 — 主要是非組蛋白對基因組的作用 ? 細(xì)胞增殖 、 分化 、 凋亡的相互關(guān)系及其調(diào)控 細(xì)胞增殖 、 分化 、 凋亡與衰老是細(xì)胞最重要的生命活動現(xiàn)象 ， 它們既相互聯(lián)系又相互制約并受到一系列基因的調(diào)控 。 natural killer cells) can kill tumour cells using the granule exocytosis pathway or the deathreceptor pathway. ?Cancer treatment by chemotherapy and irradiation kills target cells primarily by inducing apoptosis. Therefore, modulation of the key elements of apoptosis signalling directly
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