動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶-wenkub
2023-06-10 03:59:00 本頁面
【正文】 及血纖維等海綿狀基質(zhì)中 – 細(xì)胞不易脫落 ? 固定化培養(yǎng)優(yōu)點(diǎn) – 細(xì)胞損傷程度低，可重復(fù)使用 – 產(chǎn)物分離容易 –動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程 ? 種質(zhì)細(xì)胞 – 體細(xì)胞（動(dòng)物體內(nèi)組織取出） – 雜交瘤細(xì)胞 ? 基本工藝過程 – 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基 ? 氨基酸：各種必需氨基酸， Gln 等，作為碳源和能源利用 ? 維生素： B族和維 C，可由血清提供 ? 無機(jī)鹽：調(diào)節(jié)滲透壓 ? 微量元素： Fe、 Cu、 Zn等，可由血清提供 ? 葡萄糖：作為碳源和能源（易產(chǎn)生乳酸） ? 激素：胰島素、生長激素、氫化可的松等，可由血清提供 ? 生長因子：如表皮生長因子、神經(jīng)生長因子、成纖維細(xì)胞生長因子等，一般來源于血清 – 培養(yǎng)基配制 ? 配制母液，使用前過濾除菌、稀釋； Gln 單獨(dú)配制，冷凍保存 –動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的工藝條件及其控制 ? 溫度 – 哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)一般控制在 177。 oC – 溫度也影響 CO2 溶解度，從而影響培養(yǎng)液 pH 值 ? 滲透壓 – 保持細(xì)胞內(nèi)外等滲狀態(tài)，一般 700～ 850 kPa ? 溶解氧 – 供氧不足：細(xì)胞生長受抑制 – 過量供氧：容易產(chǎn)生較多氧自由基，殺傷細(xì)胞 – 用混合氣代替空氣（空氣、 O N CO2） –動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的工藝條件及其控制 ? pH 值與 CO2 濃度 – 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液 pH 在 ～ 之間，以 pH 為最佳 – 最常用的緩沖體系為 CO2 / HCO3 – 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)缺少 CO2，培養(yǎng)液中的 HCO3 會(huì)被耗盡；CO2 保持了 HCO3 的濃度，以提供穩(wěn)定的緩沖環(huán)境 – 通常 CO2 濃度維持在 2～ 10% 之間 – 指示劑：酚紅 C O 2 + H 2 O H + + H C O 3 –動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的工藝條件及其控制 ? pH 值 —— HEPES 緩沖體系 – HEPES： 4羥乙基哌嗪乙磺酸 – 4(2hydroxyethyl)1piperazine1ethanesulfonic acid – HEPES is a zwitterionic anic chemical buffering agent. HEPES is widely used in cell culture, largely because it is better at maintaining physiological pH despite changes in carbon dioxide concentration (produced by cellular respiration) when pared to bicarbonate buffers, which are also monly used in cell culture. HEPES is like water in that its dissociation decreases as the temperature decreases. This makes HEPES a more effective buffering agent for maintaining enzyme structure and function at low temperatures. –相關(guān)問題 —— 為什么培養(yǎng)的細(xì)胞要及時(shí)傳代 ? 傳代培養(yǎng)：將原代培養(yǎng)的細(xì)胞分離、稀釋并接種到新培養(yǎng)基上繼續(xù)擴(kuò)大培養(yǎng)的階段 ? 體外培養(yǎng)的細(xì)胞大多具有生長接觸抑制的特性，也就是說當(dāng)一個(gè)細(xì)胞被其他細(xì)胞包圍的時(shí)候，它就會(huì)停止生長 ? 當(dāng)細(xì)胞鋪滿培養(yǎng)器皿的表面時(shí)，正常的細(xì)胞停止生長，但是轉(zhuǎn)化（即發(fā)生遺傳物質(zhì)突變）的、對接觸抑制不敏感的細(xì)胞會(huì)繼續(xù)生長 ? 如果不及時(shí)傳代，這些轉(zhuǎn)化的細(xì)胞就會(huì)逐步取代正常的細(xì)胞，導(dǎo)致正常細(xì)胞的退化 ? –產(chǎn)酶實(shí)例
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