hplc儀器ppt課件-wenkub
2023-05-16 18:16:07 本頁面
【正文】 年代，由于氣相色譜對高 沸點(diǎn) 有機(jī)物分析的局限性，為了分離蛋白質(zhì)、核酸等不易氣化的大分子物質(zhì)，氣相色譜的理論和方法被重新引入經(jīng)典液相色譜。 1960年代末科克蘭（ Kirkland）、哈伯、荷瓦斯 (Horvath)、莆黑斯、里普斯克等人開發(fā)了世界上第一臺高效液相色譜儀，開啟了高效液相色譜的時(shí)代。 1980年后，改善分離的選擇性成為 色譜 工作者的主要問題，人們越來越認(rèn)識到改變流動(dòng)相的組成事提高選擇性的關(guān)鍵。 ?為了獲得高柱效而使用粒度很小的固定相 （ 10μm ） ， 液體的流動(dòng)相高速通過時(shí) ， 將產(chǎn)生很高的壓力 ， 因此高壓 、 高速是高效液相色譜的特點(diǎn)之一 。 梯度洗脫（ gradient) 2022/5/29 1．梯度洗脫的特點(diǎn) （ 1）提高分離度，加快分析速度； （ 2）改善峰形 , 減少拖尾 , （ 3）提高檢測的靈敏度， 有利于痕量組分的檢測； （ 4） 增加峰容量； （ 5） 強(qiáng)烈滯留的組分不容易殘留在柱上 , 保持柱性能長期良好； 梯度洗脫的作用 2022/5/29 (2)梯度淋洗裝置 外梯度 : 利用兩臺高壓輸液泵，將兩種不同極性的溶劑按一定的比例送入梯度混合室，混合后進(jìn)入色譜柱 。 發(fā)展趨勢是減小填料粒度和柱徑以提高柱效。 2022/5/29 ? 光電轉(zhuǎn)換元件是 :光電二極管 ,即晶體硅 (體積僅 50ul),如 Agilent 1100型光電二極管陣列檢測器 ,波長范圍為 190950nm對應(yīng) 1024個(gè)光電二極管 ,平均 ,由一個(gè)光電二極管接收 . 光電二極管陣列檢測器構(gòu)造 2022/5/29 2022/5/29 當(dāng)復(fù)合光透過流通池后 ,被組分吸收 ,其透過光具有了組分的光譜吸收特征 .此透過光被光柵分光后 ,形成組分的吸收光譜 ,照到光電二極管陣列裝置上 ,使每個(gè)納米光波的光強(qiáng)轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的電信號 ,給出組分的吸收光譜 . 本檢測器可以同時(shí)獲得樣品的色譜圖 (Ct)及每個(gè)色譜峰的吸收光譜 (A入 ),得到三維光譜 色譜圖 ,可以同時(shí)得到定性和定量及色譜峰是否單一組分的信息 . 工作原理 2022/5/29 2022/5/29 c. 示差折光檢測器 （ differential refractive index detector） 除紫外檢測器之外應(yīng)用最多的檢測器； 可連續(xù)檢測參比池和樣品池中流動(dòng)相之間的折光指數(shù)差值 。 高效液相色譜的工作流程 。 2022/5/29 構(gòu)造 l
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