【正文】 種方法是色譜法中 最常用 的一種方法。工作時(shí)，首先將樣品加到色譜柱頭上， 然后用吸附或溶解能力比試樣組分弱得多的氣體或液體作沖洗劑 。固定相呈平板狀的色譜，稱(chēng)為平板色譜，它又可分為 薄層色譜和紙色譜 。最近，又有一種新分離技術(shù)，利用不同組分與固定相（固定化分子）的高專(zhuān)屬性親和力進(jìn)行分離的技術(shù)稱(chēng)為 親和色譜法 ，常用于蛋白質(zhì)的分離。利用大小不同的分子在多孔固定相中的選擇滲透而達(dá)到分離的方法，稱(chēng)為 凝膠色譜法或尺寸排阻色譜法。利用組分在固定液（固定相）中溶解度不同而達(dá)到分離的方法稱(chēng)為 分配色譜法 。 隨著色譜工作的發(fā)展，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)將固定液鍵合到載體表面，這種化學(xué)鍵合固定相的色譜又稱(chēng) 化學(xué)鍵合相色譜（ CBPC） 。7216。216。80年代以后 出現(xiàn)毛細(xì)管電泳和毛細(xì)管電動(dòng)色譜等一系列新的色譜分析方法。這種方法因此得名為 色譜法 。概述 第十四章 色譜法分離原理 第一節(jié) 色譜法是一種重要的分離分析方法，它是根據(jù)組分在兩相中作用能力不同而達(dá)到分離目的的。以后此法逐漸應(yīng)用于無(wú)色物質(zhì)的分離， “ 色譜 ” 二字雖已失去原來(lái)的含義，但仍被人們沿用至今。4 n在色譜法中，將填入玻璃管或不銹鋼管內(nèi)靜止不動(dòng)的一相（固體或液體）稱(chēng)為 固定相 ；n自上而下運(yùn)動(dòng)的一相（一般是氣體或液體）稱(chēng)為 流動(dòng)相 ；n裝有固定相的管子（玻璃管或不銹鋼管）稱(chēng)為 色譜柱 。氣體為流動(dòng)相的色譜稱(chēng)為 氣相色譜（GC）液體為流動(dòng)相的色譜稱(chēng) 液相色譜（ LC） 同理液相色譜亦可分為 液固色譜（ LSC） 和液液色譜（ LLC） 。8216。216。103. 按固定相的外型分類(lèi)216。114. 按照展開(kāi)程序分類(lèi) 按照展開(kāi)程序的不同，可將色譜法分為 洗脫法 、 頂替法 、 和迎頭法 。由于各組分在固定相上的吸附或溶解能力不同，被沖洗劑帶出的先后次序也不同，從而使組分彼此分離。13167。A B15167。曲線(xiàn)上突起部分就是色譜峰。21 n 色譜流出曲線(xiàn)和色譜峰n 基線(xiàn)（ a）n 峰高（ h）信號(hào)進(jìn)樣 空氣峰 ha色譜流出曲線(xiàn)色譜峰22（四）保留值 tM 不被固定相吸附或溶解的物質(zhì)進(jìn)入色譜柱時(shí)，從進(jìn)樣到出現(xiàn)峰極大值所需的時(shí)間稱(chēng)為死時(shí)間，它正比于色譜柱的空隙體積，如下圖 。 測(cè)定流動(dòng)相平均線(xiàn)速 ū時(shí)，可用柱長(zhǎng) L與 tM的比值計(jì)算，即保留時(shí)間 tR 某組分的保留時(shí)間扣除死時(shí)間后，稱(chēng)為該組分的 調(diào)整保留時(shí)間 ， 即 tR180。?保留時(shí)間是色譜法定性的基本依據(jù)， 但同一組分的保留時(shí)間常受到流動(dòng)相流速的影響，因此色譜工作者有時(shí)用保留體積來(lái)表示保留值。=式中 保留時(shí)間與保留體積關(guān)系： VR= tR Fco 30 VR? 某組分的保留體積扣除死體積后，稱(chēng)為該組分的調(diào)整保留體積。?31 r2,1 某組分 2的調(diào)整保留值與組分 1的調(diào)整保留值之比，稱(chēng)為相對(duì)保留值。tR2=32 在定性分析中，通常固定一個(gè)色譜峰作為標(biāo)準(zhǔn)（ s）， 然后再求其它峰（ i） 對(duì)這個(gè)峰的相對(duì)保留值，此時(shí)可用符號(hào) ?表示，即 ?/相對(duì)保留值往往可作為衡量固定相選擇性的指標(biāo)，又稱(chēng)選擇因子。 Y1/2即峰高一半處對(duì)應(yīng)的峰寬。這些峰的寬或窄是由組分在色譜柱中傳質(zhì)和擴(kuò)散行為決定的，即與色譜過(guò)程的動(dòng)力學(xué)性質(zhì)有關(guān)。 39 它（ K） 是指在一定溫度和壓力下，組分在固定相和流動(dòng)相之間分配達(dá)平衡時(shí)的濃度之比值，即 K=溶質(zhì)在固定相中的濃度 / 溶質(zhì)在流動(dòng)相中的濃度 Cs41 k 分配比又稱(chēng) 容量因子 ，它是指在一定溫度和壓力下，組分在兩相間分配達(dá)平衡時(shí)，分配在固定相和流動(dòng)相中的物質(zhì)的量比。/=nm42 k值越大，說(shuō)明組分在固定相中的量越多，相當(dāng)于柱的容量大，因此又稱(chēng) 分配容量或容量因子 。 43 k = ns / nm =CsVS / CmVm 式中 cs,cm分別為組分在固定相和流動(dòng)相的濃度； Vm為柱中流動(dòng)相的體積，近似等于死體積。 k–/t?RVk 的關(guān)系kVS/VM其中 β稱(chēng)為相比 ，它是反映各種色譜柱柱型特點(diǎn)的又一個(gè)參數(shù)。 47Rs若用質(zhì)量分?jǐn)?shù)表示，即 對(duì)組分和流動(dòng)相通過(guò)長(zhǎng)度為 L的色譜柱，其所需時(shí)間分別為48整理式（ 1814）～（ 1817），可得 49K對(duì) A、 B兩組分的選擇因子，用下式表示：α=t?R/因此兩組分具有不同的分配系數(shù)是色譜分離的先決條件。下圖是 若要使 A、 B組分完全分離，必須滿(mǎn)足以下三點(diǎn)： 52第一 ，兩組分的分配系數(shù)必須有差異；第二 ，區(qū)域擴(kuò)寬的速率應(yīng)小于區(qū)域分 離的速度；第三 ，在保證快速分離的前提下，提供足夠長(zhǎng)的色譜柱。54小 56 塔板理論假設(shè)：1. 在柱內(nèi)一小段長(zhǎng)度 H內(nèi)，組分可以在兩相間迅速達(dá)到平衡。4. 分配系數(shù)在所有塔板上是常數(shù)，與組分在某一塔板上的量無(wú)關(guān)。nH n稱(chēng)為理論塔板數(shù) 。 故 0號(hào)板上所含組分總量為 0． 5， 其中氣液（或氣固）兩相 59各為 0． 25,而 1號(hào)板上所含總量同樣為0． 5．氣液（或氣固）相亦各為 0． 25。 第二 ，當(dāng)樣品進(jìn)入色譜柱后，只要各組分在兩相間的分配系數(shù)有微小差異，經(jīng)過(guò)反復(fù)多次的分配平衡后，仍可獲得良好的分離。nY1/2)2/與 Y1/2)應(yīng)采用同一單位（時(shí)間或距離）。L/(tRn有效 ==/H有效 n有效 64因?yàn)樵谙嗤纳V條件下，對(duì)不同的物質(zhì)計(jì)算的塔板數(shù)不一樣，因此，在說(shuō)明柱效時(shí)，除注明色譜條件外，還應(yīng)指出用什么物質(zhì)進(jìn)行測(cè)量。 計(jì)算此色譜柱的理論塔板數(shù)。解： (（ 4001600 它用熱力學(xué)的觀(guān)點(diǎn) 定量說(shuō)明了溶質(zhì)在色譜柱中移動(dòng)的速率，解釋了流出曲線(xiàn)的形狀，并提出了計(jì)算和評(píng)價(jià)柱效高低的參數(shù)。但是 ，色譜過(guò)程不僅受熱力學(xué)因素的影響， 而且還與分子的擴(kuò)散、傳質(zhì)等動(dòng)力學(xué)因素有關(guān)， 因此塔板理論只能定性地給出板高的概念，卻不能解釋板高受哪些因素影響；也不能說(shuō)明為什么在不同的流速下，可以測(cè)得不同的理論塔板數(shù)，因而限制了它的應(yīng)用。他們吸收了塔板理論中板高的概念，并充分考慮了組分在兩相間的擴(kuò)散和傳質(zhì)過(guò)程，從而在動(dòng)力學(xué)基礎(chǔ)上較好地解釋了影響板高的各種因素。++A 在填充色譜柱中，當(dāng)組分隨流動(dòng)相向柱出口遷移時(shí)，流動(dòng)相由于受到固定相顆粒障礙，不斷改變流動(dòng)方向，使組分分子在前進(jìn)中形成紊亂的類(lèi)似渦流的流動(dòng)，故稱(chēng) 渦流擴(kuò)散。2λdpA分子擴(kuò)散項(xiàng) （ 縱向擴(kuò)散項(xiàng)）組分從柱入口加入，其濃度分布的構(gòu)型呈 “塞子 ”狀。=277 γ是填充柱內(nèi)流動(dòng)相擴(kuò)散路徑彎曲的因素， 也稱(chēng)彎曲因子 ，它反映了固定相顆粒的幾何形狀對(duì)自由分子擴(kuò)散的阻礙情況。因此為降低縱向擴(kuò)散影響，要加大流動(dòng)相速度。=這一過(guò)程中試樣組分將在兩相間進(jìn)行質(zhì)量交換，即進(jìn)行濃度分配。由上式看出，氣相傳質(zhì)阻力與填充物粒度 dp的平方成正比，與組分在載氣流中的擴(kuò)散系數(shù) Dg成反比。85 液相傳質(zhì)阻力系數(shù) C1為： 由上式看出，固定相的液膜厚度 df薄，組分在液相的擴(kuò)散系數(shù) D1大，則液相傳質(zhì)阻力就小。雖然提高柱溫可增大 D1， 但會(huì)使 k值減小，為了保持適當(dāng)?shù)?C1值，應(yīng)控制適宜的柱溫。當(dāng)流動(dòng)相流過(guò)色譜柱內(nèi)的填充物時(shí)，靠近填充物顆粒的流動(dòng)相流速比在流路中間的稍慢一些，故柱內(nèi)流動(dòng)相的流速是不均勻。Deemter方程式 可表達(dá)為： 根據(jù) van較低線(xiàn)速時(shí)， 分子擴(kuò)散項(xiàng)起主要作用；較高線(xiàn)速時(shí)， 傳質(zhì)阻力項(xiàng)起主要作用 ；其中流動(dòng)相傳質(zhì)阻力項(xiàng)對(duì)板高的貢獻(xiàn)幾乎是一個(gè)定值。固定相粒度大小對(duì)板高的影響當(dāng)然，固定相顆粒愈細(xì)，柱流速愈慢。2/一般說(shuō)，當(dāng) R1時(shí)，兩峰有部分重疊；當(dāng)R=1時(shí)，分離程度可達(dá) 98% ；當(dāng) R=，分離程度可達(dá) % 。通常用 R=分離的標(biāo)志?！謐2 = 由 （ Y///）（ k / 1+ k）上式即為基本色譜分離方程式。當(dāng)固定相確定，被分離物質(zhì)對(duì)的 α確定后，分離度將取決于 n。分離度與選擇因子的關(guān)系α= 這時(shí)，無(wú)論怎樣提高柱效也無(wú)法使兩組