【正文】 ）的概率；f：克隆片段的平均大小/ 生物基因組的大小。初始模板量X0的對數(shù)值與C(T) 值之間呈線性關系：log X0= log(1 Ex) *Ct log N 6. 分子雜交的類型主要有哪些？探針的標記方法與標記類型？常用的雙鏈DNA的標記方法是哪兩種？探針的標記方法：切口平移法、隨機引物合成法，末端標記法，PCR標記法，體外轉錄標記法。(4)引物濃度：，過多則非特異擴增增加，形成引物二聚體；167。mol/L，不能低于20181。濃度低，擴增產(chǎn)物不夠；179。PCR原理：變性溫度下， DNA雙鏈變性雙螺旋解開成單鏈DNA，在退火溫度中人工合成的特異引物根據(jù)堿基互補配對原則與單鏈DNA特異結合，然后在DNA聚合酶的作用下，在延伸溫度下不同的脫氧核苷酸按照堿基互補配對原則在引物的引導下合成與模板DNA互補的新鏈，實現(xiàn)DNA的擴增。凝膠濃度: 濃度大，篩孔小，適合小分子電泳；濃度小，篩孔大，適合大分子電泳4）電泳緩沖液220。分子構型：超螺旋解螺旋2）電場：直流電場216。在堿性環(huán)境下，核酸分子帶負電荷，在外加電場的作用下，分子在凝膠多孔性剛性濾孔中從負極向正極泳動，其中主要由于分子篩效應和電荷效應達到分離不同大小核酸分子的目的。濃度越大，復性越容易。DNA變性后，它的一系列性質(zhì)發(fā)生變化，如紫外吸收(260 nm)值升高（增色效應）, 粘度降低等，如DNA增加25－40%. %。因此公眾完全可以安全地消費、大膽地食用轉基因食品。人們對轉基因技術的主要擔憂在于環(huán)境方面?；蚬こ淘谑称饭I(yè)上有何應用發(fā)展？主要是通過基因重組，使各種轉基因生物提高生產(chǎn)谷氨酸、調(diào)味劑、酒類和油類等有機物的產(chǎn)率；或者改良這些有機物組成成分，提高利用價值。特征：具跨越天然物種屏障的能力。(1分)⑧具有較好的轉譯后加工機制等，便于真核目的基因的高效表達。一般選用致病缺陷型的細胞或營養(yǎng)缺陷型細胞作為受體細胞。(1分)③遺傳穩(wěn)定性高，易于進行擴大培養(yǎng)或易于進行高密度發(fā)酵而不影響外源基因的表達效率。()⑧載體的特征都是充分掌握的，包括它的全部核苷酸序列。(1分)④載體都必須是安全的，不應含有對受體細胞有害的基因，并且不會任意轉入除受體細胞以外的其他生物細胞，尤其是人的細胞。(4分)六、論述題：共1題，15分?，F(xiàn)用Bgl I切割該載體進行基因克隆，問：(1)轉化后涂皿時應加什么樣的抗生素? (2)培養(yǎng)后長出的菌落具有什么樣的抗性基因型? (3)如何利用抗性變化篩選到含有插入片段的重組體? （6分）答：(1)加四環(huán)素；(2)TetrKans和TetrKanr；(3)重新點種在含Tet、Kan和只加Tet的平板上，選擇只在Tet平板上生長的菌落，即為所需的重組體。2. 分子克隆載體應具備哪些特點？（4分）答：(1) 在宿主細胞內(nèi)必須能夠自主復制（1分）(2) 必須具備合適的酶切位點，供外源DNA片段插入，同時不影響其復制（1分）(3) 有一定的選擇標記，用于篩選（1分）(4) 具有較高的拷貝數(shù)，便于載體的制備（1分）3. cDNA文庫和基因組文庫的主要差別有哪些？（5分）答：（1）基因組文庫克隆的是任何基因，包括未知功能的DNA序列；cDNA文庫克隆的是具有蛋白質(zhì)產(chǎn)物的結構基因，包括調(diào)節(jié)基因。（3）從mRNA合成cDNA：（1分）采用一定的方法釣取特定基因的mRNA，再通過逆轉錄酶催化合成其互補DNA（cDNA），除去RNA鏈后，再用DNA聚合酶合成其互補DNA鏈，從而得到雙鏈DNA。1．簡述獲得目的基因常用的幾種方法。7. ORF : 起始于AUG、止于UAA、UGA、UAG的連續(xù)的密碼子區(qū)域，是潛在的編碼區(qū)。2. 定位克隆: 獲取基因在染色體上的位置信息，然后采用各種方法對該基因進行定位和克隆3. 融合基因: 是指應用DNA體外重組技術構建的一類具有來自兩個或兩個以上的不同基因核苷酸序列的新型基因。本課程主要介紹基因工程概述、重組DNA基本技術及原理、基因克隆、基因的分離及鑒定、基因工程的表達系統(tǒng)、基因工程的應用等。通過本課程的學習，使學生掌握基因工程技術的基本原理和了解該技術在動物、植物和微生物等方面的應用，為今后從事生物學教學、生物技術研究和產(chǎn)品開發(fā)，或進一步的研究生學習科研打下堅實的理論及專業(yè)基礎。4. 轉化子: 導入外源DNA后獲得了新遺傳標志的細菌細胞或其他受體細胞，又稱重組體。8. MCS: 指載體上人工合成的含有緊密排列的多種限制核酸內(nèi)切酶的酶切位點的DNA片段。（5分）答：（1）直接從染色體DNA中分離：（1分）僅適用于原核生物、葉綠體和線粒體基因的分離，較少采用。這一方法通?？傻玫娇杀磉_的完整基因。（2分）（2）基因組文庫克隆的是全部遺傳信息，不受時空影響；cDNA文庫克隆的是不完全的編碼DNA序列，因它受發(fā)育和調(diào)控因子的影響。五．分析題 10分科學家將人的生長素基因與大腸桿菌的DNA分子進行重組，并成功地在大腸桿菌中得以表達。1．在基因工程操作過程中，使用的克隆載體需要具備哪些條件？選擇受體細胞時需要具備哪些基本原則？答：克隆載體需要具備條件：（7分）①載體都能攜帶外源DNA片段(基因)進入受體細胞，或停留在細胞質(zhì)中自我復制，或整合到染色體DNA上，隨著染色體DNA的復制而同步復制。(1分)⑤載體本身的分子量都比較小，可容納較大的外源基因片段。()受體細胞的選擇應具備的基本原則：（8分）①便于重組DNA分子的導入。對動物細胞而言，所選用的受體細胞具有對培養(yǎng)的適應性強，可以進行貼壁或懸浮培養(yǎng)，可以在無血清培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)。(1分)⑥能使重組DNA分子穩(wěn)定存在于細胞中。()⑨在理論研究和生產(chǎn)實踐上有較高的應用價值。 強調(diào)了確定的DNA片段在新寄主細胞中的擴增。轉基因是一把雙刃劍，請客觀談談對轉基因及轉基因食品安全性的認識。外源基因的導入可能會造就某種強勢生物，產(chǎn)生新物種或超級雜草、損害非目標生物、破壞原有生物種群的動態(tài)平衡和生物多樣性，也即轉基因生物存在潛在的環(huán)境安全問題。第一章 DNA的分子特性與利用 原核生物和真核生物的基因表達調(diào)控有何差別？1）原核基因表達調(diào)控的三個水平：轉錄水平調(diào)控、翻譯水平調(diào)控、蛋白質(zhì)加工水平的調(diào)控原核基因表達調(diào)控主要是在轉錄水平上的調(diào)控。 DNA復性及其影響因素。（附加：注意：將熱變性的DNA驟然冷卻至低溫時，DNA不可能復性。2. DNA凝膠電泳中影響電泳遷移率的因素主要有哪些？1）分子本身的影響216。電壓高則快216。 pH值：偏堿性，帶負電荷220。影響PCR擴增的影響因素：167。濃度高，非特異性擴增增加；179。mol/L，特異性、保真性；16