pcr技術(shù)20xx級(jí)碩士-wenkub
2023-04-28 23:45:54 本頁(yè)面
【正文】 擴(kuò)增基因的途徑 ， 所以 ， Khorana的設(shè)想被人們遺忘了 ?? 二 、 PCR技術(shù)的發(fā)明 — Kary Mullis ? 1985年 ， Kary Mullis在 Cetus公司工作期間 ， 發(fā)明了PCR ? Mullis要合成 DNA引物來(lái)進(jìn)行測(cè)序工作 ， 卻常為沒(méi)有足夠多的模板 DNA而煩惱 ? 1983年 4月的一個(gè)星期五晚上 ， 他開(kāi)車去鄉(xiāng)下別墅的路上 ?? PCR技術(shù)的創(chuàng)建 ? PCR從構(gòu)想成為現(xiàn)實(shí) 1983年 12月， Mullis用同位素標(biāo)記法看到了 10個(gè)循環(huán)后的 49 bp長(zhǎng)度的第一個(gè) PCR片斷； 1985年 10月 25日申請(qǐng)了 PCR的專利， 1987年 7月 28日批準(zhǔn)（專利號(hào) 4,683,202 ）， Mullis是第一發(fā)明人； 1985年 12月 20日在 Science雜志上發(fā)表了第一篇 PCR的學(xué)術(shù)論文， Mullis是共同作者； 1986年 5月， Mullis在冷泉港實(shí)驗(yàn)室做專題報(bào)告，全世界從此開(kāi)始學(xué)習(xí) PCR的方法。 Kary B. Mullis（ 1944－） PCR儀的變遷 ? 三個(gè)水浴鍋，用手移動(dòng) （ Mullis等人當(dāng)時(shí)用的） ? 電加熱塊 ＋ 自來(lái)水冷卻 （ PE， 1988） ? 電加熱塊 ＋ 內(nèi)置循環(huán)液冷卻 （ PE， 1989） ? 三個(gè)加熱塊 ＋ 機(jī)械手 （ Strategene， 1994） ? 半導(dǎo)體制冷和加熱（ MJ, PE, BioMetra, Eppendorf） ? 空氣加熱 (Roche) ? 梯度 PCR儀 , 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR儀 ? Labonchip式的 PCR儀 (芯片 PCR) 全新 4通道實(shí)時(shí)熒光定量 PCR儀 普通 PCR儀、梯度 PCR儀 PCR技術(shù)的原理 無(wú)細(xì)胞分子克隆法：以擬擴(kuò)增的 DNA分子為模板，以一對(duì)分別與模板互補(bǔ)的寡核苷酸片段為引物，在 DNA聚合酶的作用下，按照半保留復(fù)制的機(jī)理沿著模板鏈延伸直至完成新的 DNA合成。 方法：采用兩種不同濃度的引物。 已知序列 未知序列 未知序列 已知序列 未知序列 未知序列 限制酶 限制酶 連接酶 多重 PCR（復(fù)合 PCR） 用于檢測(cè)特定基因序列的存在或缺失。 直接用細(xì)胞涂片或石蠟包埋組織切片在單個(gè)細(xì)胞中進(jìn)行ＰＣＲ擴(kuò)增。 ISPCR則可把這兩者結(jié)合起來(lái) ,成為細(xì)胞學(xué)診斷中一種嶄新的檢測(cè)技術(shù)。 熒光定量 PCR儀 ? 熒光定量 PCR儀是一種帶有激發(fā)光源和熒光信號(hào)檢測(cè)系統(tǒng)的 PCR儀 ,通常配有電腦系統(tǒng)及相應(yīng)的
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