【正文】 鼠隱睪生殖細胞凋亡的影響[J]．中華男科學，2003，9(3)：175－177致 謝歲月匆匆，我的論文即將完成，我的大學生活也將隨之結(jié)束。低劑量處理組大鼠睪丸TAOC較對照組高，中、高劑量組大鼠睪丸TAOC低于對照組。本研究結(jié)果表明，低劑量暴露組γGT的活力出現(xiàn)代償性升高，高劑量組明顯降低，說明高劑量組對支持細胞受到了嚴重損傷。AKP主要存在于精原細胞、胚胎期初級精母細胞及各級生精細胞與支持細胞的交界面上，參與睪丸生殖細胞增殖、分裂與分化時的營養(yǎng)物質(zhì)的運輸，生精細胞的分裂活動密切相關(guān)、并參與營養(yǎng)物質(zhì)向各級生精細胞的轉(zhuǎn)運，AKP活性下降勢必干擾各級生精細胞的營養(yǎng)和能量供應(yīng)[35]，其活力在精原細胞和早期發(fā)育時期的初級精母細胞較強[36]。因此推測TPT產(chǎn)生毒性效應(yīng)的作用機制之一可能是TPT透過血睪屏障而作用于生精細胞，雄性生殖器官是TPT毒性作用的主要靶器官，影響睪丸正常的生精過程，從而干擾精子的生長、發(fā)育和能量代謝過程。本試驗結(jié)果表明，隨著TPT染毒劑量的增加，曲精小管萎縮，間質(zhì)不同程度的增寬，各級生精細胞減少，管腔內(nèi)精子數(shù)降低，部分管腔內(nèi)精子缺失。精子形態(tài)的改變反映雄性生殖細胞的遺傳損傷，精子畸形率的高低，可反映該化學毒物的生殖毒性和對生殖細胞潛在的致突變性[27]。因此，評價精子的數(shù)量、活動能力和形態(tài)可以反映環(huán)境因素對雄性生殖最終的毒性效應(yīng)，是雄性生殖毒性評價不可缺少的觀察終點[25]。染毒組體重的變化說明低劑量的TPT對大鼠生長有促進作用，而高劑量的TPT對大鼠的生長會產(chǎn)生抑制作用。d)的劑量范圍內(nèi)，TPT就能對大鼠生殖功能和形態(tài)產(chǎn)生不良影響。TPT 50 μg/kg5177。177。 177。圖5 TPT暴露后SD大鼠曲精小管直徑的變化(n=5)上標沒有相同字母的組間表示差異顯著（P＜）圖6 TPT暴露后SD大鼠睪丸和附睪組織結(jié)構(gòu)照片AA2為對照組睪丸圖片；BB2為低劑量組睪丸圖片；CC2為中劑量組睪丸圖片；DD2為高劑量組睪丸圖片；a為對照組附睪尾圖片；b為低劑量組附睪尾圖片；c為中劑量組附睪尾圖片；d為高劑量組附睪尾圖片 TPT暴露后SD大鼠睪丸標志性酶的變化TPT暴露后，比較各暴露組與對照組標志性酶結(jié)果（表3）可發(fā)現(xiàn)，低劑量組大鼠睪丸γGT活力較對照組顯著增高，高劑量組大鼠睪丸γGT活力較對照組顯著降低，中劑量組與對照組無顯著差異（P）（圖7）。支持細胞呈不規(guī)則的高柱狀或錐狀，細胞底部附著在基膜上，頂部伸達腔面。TPT 50 μg/kg51000177。SD大鼠正常精子的結(jié)構(gòu)完整，頭、體、尾正常（圖41），TPT暴露后SD大鼠的精子出現(xiàn)如下畸形現(xiàn)象：體部分叉（圖42）、無尾（圖43）、頸部膨大（圖44）、彎頸（圖45）、前鉤變形（圖46）、無頭（圖47）、多個相連（圖48）、頭頸折轉(zhuǎn)（圖49）、頭尾相連（圖410）、尾部彎曲（圖411）。TPT 50 μg/kg177。177。177。t法，以α=。 統(tǒng)計學方法，結(jié)果用平均值177。蒸餾水洗滌。PBS()洗2分鐘3次8. 滴加試劑SABC，2037Oc 20分鐘。5. 滴加5%BSA封閉液，室溫20分鐘。3. 3%的雙氧水室溫510分鐘以滅活內(nèi)源性酶。HE染色：二甲苯Ⅰ種脫蠟10 min——二甲苯Ⅱ中脫蠟5 min——100%酒精Ⅰ中脫二甲苯5min——100%酒精Ⅱ中脫二甲苯5 min——95%酒精中5 min——85%酒精中5 min——75%酒精中5 min——蒸餾水中洗3 min——蘇木素染色5 min——流水沖洗5 min——%鹽酸分化20~40 s——流水沖洗5 min————流水沖洗5~10 min——鏡檢著色滿意后放入蒸餾水清洗——70%酒精5 min——85%酒精5 min——伊紅染色2~3 min——95%酒精Ⅰ5 min——95%酒精Ⅱ5 min——100%酒精Ⅰ中10 min——100%酒精Ⅱ中5 min——二甲苯Ⅰ中10 min——二甲苯Ⅱ中10 min——中性樹膠封片。 試驗儀器與試劑；蘇木精，分析純（AR），購于成都市科龍化工試劑廠，批號：20080725；伊紅，分析純（AR），購于天津市津科精細化工研究所，批號：20080727；二甲苯，分析純（AR），購于煙臺市雙雙化工有限公司，批號：20111116；無水乙醇，分析純（AR），購于天津市凱通化學試劑有限公司，批號：2012415；氯化鈉（AR）,購于天津市凱通化學試劑有限公司；磷酸氫二鈉（AR）, 購于天津市凱通化學試劑有限公司。2 材料與方法 實驗動物及分組處理選健康的SPF級青春期SD大鼠20只（鄭州大學試驗中心提供），隨機分為4組：3個不同劑量(、50 μg/kg)的處理組和對照組，每組5只。關(guān)于有機錫化合物對哺乳動物生殖系統(tǒng)影響的研究很少，只有Alam等（1993）報道過DBTL（二月桂酸二丁基錫）對大鼠繁殖的影響，而對哺乳動物精子影響未見報道[21]。 本試驗的目的及意義近十多年來，國內(nèi)外對多種有機錫化合物對哺乳動物免疫系統(tǒng)的影響有很多研究[17]。堿性磷酸酶（AKP）是動物代謝過程中重要的調(diào)控酶，能夠?qū)?yīng)底物去磷酸化，即通過水解磷酸單酯將底物分子上的磷酸基團除去，并生成磷酸根離子和自由的羥基，這類底物包括核酸、蛋白、生物堿等。機體防御體系的抗氧化能力的強弱與健康程度存在著密切聯(lián)系，該防御體系有酶促與非酶促兩個體系，許多酶是以微量元素為活性中心，例如：超氧化物岐化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶（GST）等，非酶促反應(yīng)體系中主要為維生素、氨基酸和金屬蛋白質(zhì)。支持細胞比生殖細胞大得多，而且形態(tài)復雜，成體的支持細胞不再分裂，它們支持著整個生精上皮，附著于生精上皮的基底層，并穿過生殖細胞間伸向管腔，為精子發(fā)生提供了一個合適的環(huán)境。初級精母細胞經(jīng)過第一次減數(shù)分裂形成次級精母細胞，體積比初級精母細胞小，細胞和細胞核均為圓形，核內(nèi)染色質(zhì)呈細網(wǎng)狀，著色較淺，細胞質(zhì)少。曲細精管周邊為一結(jié)締組織薄層，即基膜，由彈性纖維及一些平滑肌細胞構(gòu)成。睪丸被膜包括鞘膜臟層、白膜和血管膜3層。在附睪內(nèi)精子的形態(tài)和代謝都發(fā)生變化，變得成熟，并獲得運動和受精能力。高等動物的生殖過程必須由雌、雄兩性個體共同完成。1958年法國因用含三乙基錫的藥劑治療皮膚病而造成10%的死亡率（稱為斯特利農(nóng)時間）。但在暴露1 h后脫離24 h測定，細胞毒功能下降91177。Whalen(2003)發(fā)現(xiàn)短期暴露于TPT會造成人類自然殺傷細胞(NK)的細胞毒功能的不可逆抑制。有機錫化合物一般可通過呼吸道、消化道和皮膚黏膜進入機體，影響生物的生殖功能，干擾體內(nèi)激素的分泌造成生殖和遺傳的不良后果[10]。有機錫化合物可使海洋動物性成熟和繁殖推遲，性畸變，致使其性別比例失調(diào)，威脅到它們的族群生存[5]，也可干擾哺乳動物的內(nèi)分泌，導致生育力下降、胚胎畸形、生長發(fā)育遲緩還可誘發(fā)基因突變、染色體畸變和DNA損傷等遺傳毒性問題[6]；Grote et al.（2004）報道6 mg/kg TPT影響青春期雄性大鼠的性發(fā)育[7]，林春芳等（2008）報道魚類生命早期階段暴露于TBT和TPT可引起胚胎發(fā)育畸形、孵化延遲或抑制、生育力下降、精子減少等生殖問題[6]；體外試驗表明，TPT可以直接激活雄激素受體調(diào)節(jié)的轉(zhuǎn)錄，并能抑制參與類固醇激素代謝酶的活性。歐盟已經(jīng)先后發(fā)布過89/677/EEC、1999/51/EC和2002/62/EC，規(guī)定：“有機錫混合物用作游離締合的涂料中的生物殺滅劑時，不能在市場上銷售。污染嚴重的地區(qū)多是船只活動頻繁的地區(qū)，在沉積物表層2 cm內(nèi)出現(xiàn)最大濃度，然后隨深度的增加而急劇下降，之后保持平緩下降的趨勢[1]。碳元素增多其毒性降低，故三丁基錫（Tributyltin，TBT）和三苯基錫（Triphenyltin，TPT）常用于農(nóng)藥和漁具防污劑，增大了向環(huán)境的釋入量。所有有機錫化合物都具有四價結(jié)構(gòu)。 rat testis seminiferous tubule diameter increased with increasing TPT, but seminiferous tubule germ cells and sperm decreased varying degrees。 sperm morphology was observed and the abnormal rate was calculated by epididymal sperm smears。結(jié)果顯示，TPT暴露組與對照組相比，低、中劑量組大鼠睪丸指數(shù)升高，高劑量組降低，而低、高劑量組大鼠附睪指數(shù)降低，中劑量組升高，但差異均不顯著(P)；精子畸形率隨藥物劑量的增加顯著升高；大鼠睪丸內(nèi)曲精小管直徑隨藥物劑量的增加而減小，曲精小管生精細胞和管腔內(nèi)精子數(shù)量均有不同程度減少；低、中劑量組AKP高于對照組，高劑量組低于對照組，但差異不顯著（P）；低劑量組γGT活力和TAOC顯著高于對照組，中劑量組與對照組相比變化不明顯，高劑量組顯著低于對照組（P）。主要技術(shù)指標(或研究目標)1．比較試驗組和對照組大鼠體重、睪丸重、睪丸指數(shù)和附睪指數(shù)；2．精子數(shù)量及其畸形率、精子相對數(shù)；3．檢測大鼠睪丸AKP、γGT和TAOC水平；4．通過本試驗，掌握石蠟切片的制作技術(shù)；5．觀察并總結(jié)染毒后大鼠睪丸和附睪組織結(jié)構(gòu)變化規(guī)律；6．本項試驗查閱20篇以上與本題有關(guān)的文獻資料；撰寫不少于1萬字的論文；中文