cr技術(shù)與應(yīng)用ppt課件-wenkub
2023-01-23 00:23:24 本頁(yè)面
【正文】 4種 dNTP混合物 各 200umol/L 引物 各 10～ 100pmol 模板 DNA ～ 2ug Taq DNA聚合酶 Mg2+ 1 2 3 4 5 22 55 72 94 時(shí)間（ min） 溫度 （ ℃ ） PCR的基本原理 ? PCR反應(yīng)條件 ? PCR過程 ? PCR的特點(diǎn) 適溫延伸 3 高溫變性 1 低溫退火 2 重復(fù) 1~3步 25~30輪 目的 DNA片段 擴(kuò)增 100萬(wàn)倍以上 DNA雙螺旋 DNA單鏈 與引物復(fù)性 DNA變性 形成2條單鏈 子鏈延伸 DNA加倍 PCR的基本原理 ? PCR反應(yīng)條件 ? PCR過程 ? PCR的特點(diǎn) 1 2 3 4 5 22 55 72 94 時(shí)間（ min） 溫度 （ ℃ ） 適溫延伸 3 高溫變性 1 低溫退火 2 重復(fù) 1~3步 25~30輪 目的 DNA片段 擴(kuò)增 100萬(wàn)倍以上 DNA雙螺旋 DNA單鏈 與引物復(fù)性 子鏈延伸 DNA加倍 DNA變性 形成2條單鏈 模板 DNA 95℃ PCR的基本原理 ? PCR反應(yīng)條件 ? PCR過程 ? PCR的特點(diǎn) 95℃ 50℃引物 1 引物 2 DNA引物 PCR的基本原理 ? PCR反應(yīng)條件 ? PCR過程 ? PCR的特點(diǎn) 50℃ 引物 1 引物 2 DNA引物 72℃Taq酶 Taq酶 PCR的基本原理 ? PCR反應(yīng)條件 ? PCR過程 ? PCR的特點(diǎn) 72℃ 第 1輪結(jié)束 95℃第 2輪開始 PCR的基本原理 ? PCR反應(yīng)條件 ? PCR過程 ? PCR的特點(diǎn) 95℃ 50℃72℃Taq Taq Taq Taq PCR的基本原理 ? PCR反應(yīng)條件 ? PCR過程 ? PCR的特點(diǎn) 72℃ 第 2輪結(jié)束 PCR的基本原理 ? PCR反應(yīng)條件 ? PCR過程 ? PCR的特點(diǎn) 模板 DNA 第 1輪擴(kuò)增 第 2輪擴(kuò)增 第 3輪擴(kuò)增 第 4輪擴(kuò)增 第 5輪擴(kuò)增 第 6輪擴(kuò)增 PCR的基本原理 ? PCR反應(yīng)條件 ? PCR過程 ? PCR的特點(diǎn) ? 靈敏度高 (pg=1012)量級(jí)擴(kuò)增到微克 (ug=106)水平 100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞 3個(gè) RFU 3個(gè)細(xì)菌 ? 簡(jiǎn)便、快速 ， 2～ 4 小時(shí)完成擴(kuò)增 ? 對(duì)標(biāo)本的純度要求低 ?血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活組織等組織的粗提 DNA 引物設(shè)計(jì) ： （ 1)序列應(yīng)位于高度保守區(qū)，與非擴(kuò)增區(qū)無(wú)同源序列。 （
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