醫(yī)學(xué)高級(jí)職稱論ppt課件-wenkub
2023-01-20 07:53:31 本頁面
【正文】 of tissue factor pathway inhibitor2 (TFPI2). Methods Eca9706 cell line was treated by 5azaCdR of different concentrations。 methylation。目前，關(guān)于 TFPI2在食管癌中的基因表達(dá)情況的分析研究尚少。Trizol試劑購自 MBI公司 。 細(xì)胞培養(yǎng)和藥物處理 人食管癌細(xì)胞 Eca9706以含 10 mL/L胎牛血清的 RPMI1640培養(yǎng)基， 37 ℃ 、50 mL/L CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，每 2～ 3 d消化傳代 1次。 流式細(xì)胞儀 (FCM)檢測(cè)干預(yù)前后細(xì)胞凋亡率的變化 取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞，按 5 105/mL的密度接種于 6孔板內(nèi)，待細(xì)胞貼壁后加藥，分組如下：對(duì)照組 (0 μmol/L), μmol/L 5AzaCdR組， μmol/L 5AzaCdR組， μmol/L 5AzaCdR組。βactin作為內(nèi)參照，上下游引物分別為 5′AGGCATTGTGATGGACTCCG3′和 5′AGTGATGACCTGGCCGTCAG3′，合成產(chǎn)物為 301 bp。擴(kuò)增片段經(jīng) 20 g/L瓊脂糖凝膠電泳鑒定。結(jié)果判定： TFPI2蛋白陽性信號(hào)均呈棕黃色顆粒樣物質(zhì)，位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用均數(shù) 177。 2 結(jié) 果 干預(yù)前后細(xì)胞增長率的變化 經(jīng) MTT檢測(cè)，結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞抑制率明顯高于未加藥組，且隨著作用時(shí)間的延長和濃度的增加而增加 (表 1)。 )%，與 5AzaCdR誘導(dǎo)濃度成正比。 干預(yù)前后 Eca9706細(xì)胞 mRNA的表達(dá)情況 擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳顯示， Eca9706細(xì)胞中 TFPI2 mRNA表達(dá)在各用藥組和未用藥組之間有明顯差異， TFPI2 mRNA在未用藥組細(xì)胞中未見表達(dá)。C： μmol/L 5AzaCdR組 。TFPI2： 440 bp。4： μmol/L組 。 )%、 (177。其 mRNA的啟動(dòng)子具有典型的管家基因特征，沒有典型的 TATA盒或 CAAT盒，在推定的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)區(qū)域 GC含量超過80%[1]。 目前，有體外實(shí)驗(yàn)表明， DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑 5AzaCdR通過去甲基化作用可使多種含有 CpG島的高甲基化抑癌基因重新表達(dá)，從而恢復(fù)抑癌功能 [9]。根據(jù) MTT實(shí)驗(yàn)可知，經(jīng)過 5AzaCdR干預(yù)處理過的 Eca9706細(xì)胞增殖明顯受抑制，且隨著藥物濃度的增加，抑制作用越明顯。 BENDER等 [11]在同等條件下用 5AzaCdR處理惡性腫瘤細(xì)胞系和正常纖維細(xì)胞系時(shí)，發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞增殖均被抑制，而纖維細(xì)胞增殖不被抑制。 【 參考文獻(xiàn) 】 [1]HUBE F， REBERDIAU P， IOCHMANN S， et al. Characterization and functional analysis of TFPI2 gene promoter in a human choriocarcinoma cell line [J]. Thromb Res， 203， 109(4)： 207215. [2]MIYAGIi Y， KOSHIKAWA N， YASUMITSU H， et al. cDNA cloning and mRNA expression of a serine protein 5 and tissue factor pathway inhibitor2 [J]. J Biochem， 1994， 116(5)： 939942.
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