rna干擾技術(shù)基本原理與應(yīng)用-wenkub
2023-05-21 19:21:26 本頁(yè)面
【正文】 NA 利用 Dicer或 RNaseⅢ 消化長(zhǎng)的 dsRNA成siRNA 化學(xué)合成法制備 siRNA 優(yōu)點(diǎn)： 純度高 合成量不受限 能被標(biāo)記 缺點(diǎn)：價(jià)格昂貴、合成周期長(zhǎng) 用途：已經(jīng)找到最有效的 siRNA的情況下，需要大量 siRNA進(jìn)行研究 體外轉(zhuǎn)錄法制備 siRNA 優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)單 成本低 速度快 毒性小 穩(wěn)定性好 缺點(diǎn)：反應(yīng)規(guī)模和量始終有一定的限制 用途：篩選 siRNAs，特別是需要制備多種 siRNAs 消化法（ “ siRNAs 雞尾酒 ”） 優(yōu)點(diǎn)：無(wú)需檢測(cè)或篩選多個(gè) siRNA序列產(chǎn)生多種 siRNAs 混合體，保證有效的目的基因沉默 缺點(diǎn)：有可能引發(fā)非特異的基因沉默 用途：快速而經(jīng)濟(jì)地研究某個(gè)基因功能缺失的表型 siRNA的制備方法 細(xì)胞內(nèi)制備方法 依賴表達(dá)質(zhì)?；虿《据d體在細(xì)胞內(nèi)獲取siRNA 通過(guò) PCR介導(dǎo)的 siRNA表達(dá)試劑盒獲取siRNA siRNA載體 依賴 RNA聚合酶 III 啟動(dòng)子 (pol III) ，操縱一段小的發(fā)夾 siRNA在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的表達(dá)。 人源 U6啟動(dòng)子 鼠源的 U6啟動(dòng)子 人 H1啟動(dòng)子 pol III可在細(xì)胞中表達(dá)許多的小分子 RNA，通過(guò)添加一串（ 3~6個(gè)） U來(lái)終止轉(zhuǎn)錄的 需要訂購(gòu) 2段編碼短發(fā)夾 RNA序列的 DNA單鏈再克隆到載體中 表達(dá)載體法制備 siRNA 優(yōu)點(diǎn)：可以進(jìn)行較長(zhǎng)期研究。pp16 謝 謝 ! 。體內(nèi)研究 siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞 .磷酸鈣共沉淀 電穿孔法 DEAE葡聚糖和 polybrene 機(jī)械法 ：顯微注射和基因槍 陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑 提高轉(zhuǎn)染效率的方法 純化的 siRNA 避免使用抗生素 避免 RNA酶污染 較低傳代數(shù)的細(xì)胞 合適的轉(zhuǎn)染試劑 合適的陽(yáng)性對(duì)照 熒光標(biāo)記的 siRNA RNAi技術(shù)的應(yīng)用 基因組功能研究的新方法 研究信號(hào)傳導(dǎo)通路的新途徑 開(kāi)展基因治療的新策略 （抗病毒、抗腫瘤等） 篩選藥物靶點(diǎn)的新工具 RNAi技術(shù)抗病毒 作用 阻止病毒入侵、抑制病毒的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄 自然界中普遍存在 在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用 RNA病毒：如 HIV、 HCV、脊髓灰質(zhì)炎病毒 DNA病毒：如 HBV
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