化學(xué)發(fā)光楊曉林ppt課件(已修改)
2025-05-16 22:01 本頁面
【正文】 發(fā)光免疫檢測(cè)技術(shù)的臨床應(yīng)用 及其應(yīng)注意的問題 楊曉林 博士 北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部研究員 中國(guó)生物物理學(xué)會(huì)光生物學(xué)專業(yè)委員會(huì)副主任委員 國(guó)際生物發(fā)光和化學(xué)發(fā)光學(xué)會(huì) ( ISBC）學(xué)術(shù)理事 Council member of scientific advisory board of International Society on Bioluminescence amp。 Chemiluminescence ? 由于化學(xué)反應(yīng)（通常是氧化）產(chǎn)生電子能級(jí)處于激發(fā)態(tài)的物質(zhì)，后者通過躍遷釋放能量產(chǎn)生光子，從而導(dǎo)致的發(fā)光現(xiàn)象。 化學(xué)發(fā)光 （Chemiluminescence） ? 生物發(fā)光和化學(xué)發(fā)光均屬于冷光，即發(fā)光不是由于發(fā)光體溫度升高所至，發(fā)射波長(zhǎng)也與其溫度無關(guān) 按化學(xué)反應(yīng)類型 化學(xué)發(fā)光的分類 ? 酶促化學(xué)發(fā)光： 辣根過氧化物酶系統(tǒng) 堿性磷酸酶系統(tǒng) 黃嘌呤氧化酶系統(tǒng) ? 非酶促化學(xué)發(fā)光： 吖啶酯系統(tǒng) 草酸酯系統(tǒng) 三價(jià)鐵 魯米諾系統(tǒng) ? 閃光（ Flash） : 按發(fā)光持續(xù)時(shí)間 發(fā)光時(shí)間在數(shù)十分鐘以上，如： HRPLuminol系統(tǒng) APAMPPD系統(tǒng) 黃嘌呤氧化酶系統(tǒng) 無須原位進(jìn)樣、 以速率法測(cè)量。 發(fā)光時(shí)間在數(shù)秒內(nèi)，如吖啶酯 以原位進(jìn)樣 (In Situ Injector) 和時(shí)間積分法測(cè)量 ? 輝光（ Glow） : 時(shí)間 發(fā)光信號(hào) 輝光坪區(qū) 速率法測(cè)量 原位進(jìn)樣 積分法測(cè)量 閃光尖峰 閃光與輝光及其測(cè)量方式的差別 魯米諾及其衍生物的增敏化學(xué)發(fā)光系統(tǒng) H2O2+ NH2 O O NH NH N2 OH HRP NH2 CO2 CO2 +Photon (425nm) R OH R OH N S R B OH OH 增強(qiáng)劑 （ Enhancer） 商業(yè)化產(chǎn)品中常見的化學(xué)發(fā)光系統(tǒng) AMPPD及其衍生物的化學(xué)發(fā)光系統(tǒng) + * 光子 (477nm) AP O O OCH3 OPO32 O O O OCH3 O O O OCH3 商業(yè)化產(chǎn)品中常見的化學(xué)發(fā)光系統(tǒng) CH3 C=O O R N+ OH H+ H2O2 + H2O + R OH 光子 + CO2 + CH3 C=O O R N HO CH3 C=O O R N HOO CH3 O N CH3 O N C=O O 商業(yè)化產(chǎn)品中常見的化學(xué)發(fā)光系統(tǒng) 吖啶酯化學(xué)發(fā)光系統(tǒng) 發(fā)光信號(hào)檢測(cè) 光敏二極管、光敏電池、光電偶合器（ CCD） ? 結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、性能穩(wěn)定 ? 但靈敏度低、線性范圍較窄。 主要特點(diǎn) 原理 光信號(hào) 光電轉(zhuǎn)換器件 電壓或電流信號(hào) 放大 單光子計(jì)數(shù)器是目前高靈敏度 發(fā)光分析儀的核心部件 光電倍增管 高壓 高速放大器 高速比較器 高速分頻器 發(fā)光樣品 產(chǎn)生光子 激發(fā)光陰極 產(chǎn)生光電子 在陽極上形成較強(qiáng)信號(hào) 脈沖信號(hào) 相對(duì)發(fā)光單位 數(shù)字脈沖 (RLU) 在各打拿極之間得到 能量和數(shù)目的倍增 單光子計(jì)數(shù)式發(fā)光檢測(cè)儀 計(jì) 算 機(jī) 打 印 機(jī) 發(fā)光儀控制模塊 發(fā)光儀執(zhí)行模塊 控制器 程控高壓 計(jì)數(shù) /貯存器 單光子計(jì)數(shù)器 樣品運(yùn)動(dòng) /定位裝置 程控自動(dòng)門鎖及檢測(cè)裝置 原位注射泵 光生物學(xué)技術(shù)的應(yīng)用范圍 ? 軍事偵測(cè) ? 公安稽查 ? 衛(wèi)生檢疫 ? 藥物篩查 ? 醫(yī)學(xué)診斷 ? 環(huán)境檢測(cè) ? 航天遙感 ? 生命科學(xué) ? …… 已成為現(xiàn)代生物技術(shù)最活躍的領(lǐng)域之一 光生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)的優(yōu)越性 ? 徹底消除了放射性危害 ? 無半衰期限制，試劑穩(wěn)定性和有效期大大延長(zhǎng) ? 容易實(shí)現(xiàn)連續(xù)、動(dòng)態(tài)、重復(fù)測(cè)定 ? 適合于復(fù)合標(biāo)記系統(tǒng)進(jìn)行多指標(biāo)并行測(cè)定 ? 操作簡(jiǎn)單，反應(yīng)速度快，容易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化 ? 靈敏度和線性范圍超過以往技術(shù) 幾種標(biāo)記 /檢測(cè)技術(shù)靈敏度的比較 酶標(biāo) 熒光 放免 發(fā)光 靈敏度 (mol/L) 1018 1015 1012 109 幾種標(biāo)記 /檢測(cè)技術(shù)線性范圍的比較 酶標(biāo) 熒光 放免 發(fā)光 線性范圍 105 104 103 102 幾種標(biāo)記 /檢測(cè)試劑的有效期比較 酶標(biāo) 熒光 放免 發(fā)光 有效期（月） 18 15 12 9 6 3 0 0 20,000 40,000 60,000 80,000 100,000 試劑盒 儀器 特殊防護(hù) 治理污染 人民幣 人民幣 三種免疫測(cè)定技術(shù)的成本及費(fèi)用 三種免疫測(cè)定技術(shù)的成本及費(fèi)用 放免 酶標(biāo) 發(fā)光 ? 抗原：可誘導(dǎo)動(dòng)物免疫系統(tǒng)產(chǎn)生免疫應(yīng)答的物質(zhì)。 ? 抗體：由動(dòng)物免疫系統(tǒng)產(chǎn)生，可特異性結(jié)合某種物質(zhì)的球蛋白。 免疫分析技術(shù)基本原理 利用抗原、抗體之間的特異性結(jié)合來測(cè)定、分析特定物質(zhì)的方法 免疫測(cè)定技術(shù)分類 反應(yīng)結(jié)束后是否需要分離 均相法 （ Homogeneous） 非均相法 （ Heterogeneous） 均相法 （Homogeneous） ? 免疫凝集法： 自然凝集：血型測(cè)定 肥達(dá)氏反應(yīng)； 敏化凝集：血球凝集法 凝膠（微粒）比濁法 ? 免疫擴(kuò)散法；免疫電泳法近場(chǎng)液閃法， ? 酶 輔酶（亞基）配位法 ?
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